專利名稱：一種甘薯黑斑病苗期抗性鑒定方法
技術領域：
本發(fā)明涉及ー種農(nóng)作物病害抗性鑒定方法，具體的說就是ー種甘薯黒斑病苗期抗性鑒定方法，屬于農(nóng)業(yè)植物保護領域。
背景技術：
甘薯黒斑病是ー種主要危害甘薯根系及莖基部的重要真菌病害，世界各甘薯產(chǎn)區(qū)均有發(fā)生。1937年傳入我國，現(xiàn)有26個省、直轄市、自治區(qū)發(fā)生該病，在甘薯苗床、大田和儲藏期均可為害，是我國北方薯區(qū)的三大嚴重病害之一。薯苗受侵染后，在莖部產(chǎn)生凹陷的圓形或梭形小黒斑，后逐漸擴大，環(huán)繞薯苗基部呈黑腳狀，地上部分葉片發(fā)黃或使幼苗基部變黑腐爛。帶病薯苗移栽大田1-2星期后，基部葉片發(fā)黃脫落，病重時，根部腐爛，僅殘存纖維狀維管束，薯苗枯死。儲藏期薯塊受害后，病斑初為黑色小點，逐漸擴大成圓形或梭形病斑，中間產(chǎn)生黒色刺狀物，與其他真菌和細菌并發(fā)，易引起腐爛。我國毎年因該病造成的產(chǎn)量損 失在10%左右。研究表明，抗病品種的選育和推廣是控制該病害的主要手段。因此，有效、快速、準確的評價品種抗性顯得尤其重要。對甘薯黒斑病的抗性鑒定研究多以薯塊為材料，薯苗對黒斑病的抗性鑒定研究則較少。邱瑞錸等(1990 )采用大田薯蔓注射針接種鑒定，但由于不同品種間薯蔓長勢及木質(zhì)纖維素含量的不同，易導致結(jié)果的誤差。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為克服上述現(xiàn)有技術的不足之處，提供ー種甘薯黒斑病苗期抗性鑒定方法。該方法通過將生長一致的甘薯頂尖幼苗去掉下部葉柄后，浸入配制好濃度為IXlO4個/ml的黒斑病孢子懸浮液中，六天后能快速分辨出不同品種薯苗對黑斑病的抗感程度等步驟，能快速、準確的確定薯苗對黑斑病的抗性程度，具有簡便，易學，省時省力等優(yōu)點，為甘薯抗病育種篩選大批材料提供技術支持。本發(fā)明是以如下技術方案實現(xiàn)的ー種甘薯黒斑病苗期抗性鑒定方法，其特征是按如下步驟進行
(O病菌分離與培養(yǎng)從田間采集發(fā)病薯塊，用真菌分離方法分離出黑斑病菌，在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)7天，備用；
(2)參試薯苗準備從苗床或田間剪取6棵生長一致的甘薯頂尖幼苗，視薯苗節(jié)間長短以5-6個節(jié)間為宜，帶回試驗室后從葉柄基部剪掉最下面兩片葉片，用滅菌水把薯苗莖基部清洗干凈，備用；
(3)接種菌液的配制將在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上長出的分生孢子用無菌水沖洗下來，用無菌水配制成濃度為I X IO4個/ml的孢子懸浮液備用；
(4)接種鑒定將配制好的孢子懸浮液分裝在容量為250ml的無菌三角瓶中，然后將供試薯苗輕放入三角瓶中，每品種3棵，為3次重復，在25-27°C下培養(yǎng)，同時設空白無菌水為對照，三角瓶培養(yǎng)液消耗后用無菌水添加；(5)調(diào)查評價6天后調(diào)查薯苗水面以下部分黒斑病發(fā)病情況，井根據(jù)發(fā)病程度將薯苗分為0-4級共5個等級，根據(jù)受害等級將品種對黑斑病的抗性分為抗病、中抗和感病三個級別；
(6)薯苗受害分級標準0級看不到病癥；1級有零星小病斑出現(xiàn)，病斑數(shù)<20個；2級病斑較大，且病斑數(shù)> 20個，但不連片；3級病斑較多，且斑點連成片，長度< 2cm ；4級病斑連片，且連片長度> 2cm ；
(7)平均發(fā)病級別=(重復I級別+重復II級別+重復III級別)/3;抗病級別確定抗病受吾級別< I. O ;中抗1. O <受吾級別< 3. O ;感病受吾級別> 3. O。本發(fā)明的優(yōu)點是該方法以苗床或大田薯苗莖尖為材料，室內(nèi)接種黑斑病菌鑒定抗病性，能夠準確、快速、直觀的表現(xiàn)出不同品種薯苗對甘薯黒斑病的抗性水平。該方法更接近于田間甘薯幼苗感染黒斑病的實際情況，操作簡單、易學，對實驗設備要求不高，各育種單位均能開展鑒定工作。該鑒定方法能為甘薯抗病育種前期鑒定提供技術支持，剔除部分感病品種，為后期品種篩選減輕人力、物力。同吋，以苗床或大田薯苗莖尖為鑒定材料，能最大限度的減少取材的差異性，降低試驗誤差。室內(nèi)滅菌接種，易于試驗條件控制，也增強了結(jié)果的準確性。該方法的推廣使用，對于篩選抗病品種和指導甘薯抗病育種具有重要意義和現(xiàn)實作用。
具體實施例方式下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進ー步說明
實施例、
甘薯黒斑病苗期抗性鑒定方法，我們對苗床采集的13個甘薯品種的薯苗進行黒斑病抗性鑒定試驗，按如下步驟進行
(1)病菌分離與培養(yǎng)從田間采集發(fā)病薯塊，用真菌分離方法分離出黑斑病菌，在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)7天，備用；
(2)參試薯苗準備從苗床采集華北52-45、南京92、徐薯18、浙徐I號、徐273、濟農(nóng)22、煙臺252、徐02-9-11、徐02-16-17、寧55-1、徐22-1、徐25-2、勝利百號共13個甘薯品種(系)薯苗，每品種分別剪取6棵生長一致的甘薯頂尖幼苗，視薯苗節(jié)間長短以5-6個節(jié)間為宜，帶回試驗室后從葉柄基部剪掉最下面2-3片葉片，用滅菌水把薯苗莖基部清洗干凈，備用;
(3)接種菌液的配制將在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上長出的黒斑病分生孢子用無菌水沖洗下來，用無菌水配制成濃度為I X IO4個/ml的孢子懸浮液備用；
(4)接種鑒定將配制好的孢子懸浮液分裝在容量為250ml的無菌三角瓶中，然后將供試薯苗輕放入三角瓶中，每品種3棵，為3次重復，在25-27°C下培養(yǎng)，同時設空白無菌水為對照，培養(yǎng)液消耗后用無菌水加滿；
(5)結(jié)果調(diào)查評價6天后調(diào)查薯苗水面以下部分黒斑病發(fā)病情況，井根據(jù)發(fā)病程度將薯苗分為0-4級共5個等級，根據(jù)受害等級將品種對黑斑病的抗性分為抗病、中抗和感病三個級別；
薯苗受害分級標準
O級看不到病癥；I級有零星小病斑出現(xiàn)，病斑數(shù)< 20個；
2級病斑較大,且病斑數(shù)> 20個，但不連片；
3級病斑較多，且斑點連成片，長度< 2cm ；
4及病斑連片，且連片長度> 2cm;
平均發(fā)病級別=(重復I級別+重復II級別+重復III級別)/3 ；
抗病級別確定抗病受咅級別< I. O ;中 抗1. O <受咅級別< 3. O ;感病受咅級別^ 3. O。試驗鑒定結(jié)果見表I :
權利要求
1.ー種甘薯黒斑病苗期抗性鑒定方法，其特征是按如下步驟進行 (1)病菌分離與培養(yǎng)從田間采集發(fā)病薯塊，用真菌分離方法分離出黑斑病菌，在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)7天，備用； (2)參試薯苗準備從苗床或田間剪取6棵生長一致的甘薯頂尖幼苗，視薯苗節(jié)間長短以5-6個節(jié)間為宜，帶回試驗室后從葉柄基部剪掉最下面兩片葉片，用滅菌水把薯苗莖基部清洗干凈，備用； (3)接種菌液的配制將在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上長出的分生孢子用無菌水沖洗下來，用無菌水配制成濃度為I X IO4個/ml的孢子懸浮液備用； (4)接種鑒定將配制好的孢子懸浮液分裝在容量為250ml的無菌三角瓶中，然后將供試薯苗輕放入三角瓶中，每品種3棵，為3次重復，在25-27°C下培養(yǎng)，同時設空白無菌水為對照，三角瓶培養(yǎng)液消耗后用無菌水添加； (5)調(diào)查評價6天后調(diào)查薯苗水面以下部分黒斑病發(fā)病情況，井根據(jù)發(fā)病程度將薯苗分為0-4級共5個等級，根據(jù)受害等級將品種對黑斑病的抗性分為抗病、中抗和感病三個級別； (6)薯苗受害分級標準0級看不到病癥；1級有零星小病斑出現(xiàn)，病斑數(shù)<20個；2級病斑較大，且病斑數(shù)> 20個，但不連片；3級病斑較多，且斑點連成片，長度< 2cm ;4級病斑連片，且連片長度> 2cm ； (7)平均發(fā)病級別=(重復I級別+重復II級別+重復III級別)/3;抗病級別確定抗病受吾級別< I. O ;中抗1. O <受吾級別< 3. O ;感病受吾級別> 3. O。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種農(nóng)作物病蟲害抗性鑒定方法，具體的說就是一種甘薯黑斑病苗期抗性鑒定方法。該方法科學，操作過程簡單，試驗條件要求不高，取幾棵生長一致的苗床或田間甘薯莖尖薯苗，剪掉最下面2-3片葉片后用消毒水清洗干凈，放入預先用無菌水配制好的濃度為1×104個/ml的黑斑病孢子懸浮液中，25-27℃室溫下培養(yǎng)6天，調(diào)查各試驗薯苗受黑斑病侵染為害等級，計算各重復平均為害級別，通過為害級別的大小即可判斷各供試品種薯苗對甘薯黑斑病的抗感情況。
文檔編號A01G7/00GK102612962SQ20121009505
公開日2012年8月1日 申請日期2012年4月1日 優(yōu)先權日2012年4月1日
發(fā)明者孫厚俊, 張成玲, 徐振, 楊冬靜, 謝逸萍, 趙永強 申請人:江蘇徐州甘薯研究中心