專利名稱：一種煙草普通花葉病抗性的苗期鑒定方法
技術領域：
本發(fā)明屬于植物抗病性鑒定技術領域，具體涉及煙草普通花葉病抗性的鑒定，特別是涉及一種對煙草普通花葉病抗性進行苗期鑒定的方法。

背景技術：
目前已知的煙草侵染性病害有68種，主要包括煙草病毒病(TMV、CMV、PVY、TBTV)、赤星病、根結線蟲病、炭疽病、黑脛病、野火病與角斑病等，給煙草生產造成了巨大的危害。這其中又以煙草普通花葉病----TMV的危害為重，其所造成的經(jīng)濟損失占侵染性病害所致總損失的37％。該病主要依靠汁液接觸傳染，苗期的初侵染源為混有病殘體的農家肥、種子、土壤以及帶病的其它寄主和野生植物，由沾染病毒的手和工具通過農事操作而傳播。因此，如何提高現(xiàn)有煙草品種對TMV的抗病能力，培育出具有高抗病能力的煙草品種，就成為目前該領域研究的熱點。
作為品種選育的關鍵，現(xiàn)有的煙草TMV抗性鑒定方法主要有以下三種①室內離體葉片接種法，該方法雖然簡單易行，但是其鑒定的結果只能反映離體葉片對病害的抗擴展能力，無法反映品種的實際抗性，只能作為抗性劃分的參考指標。②自然誘發(fā)抗性鑒定方法，該方法雖然可以反映品種的自然抗病能力，但是該方法易受種植條件和氣候的影響，同一品種在不同煙區(qū)鑒定的結果會存在較大差異。當測試年份間的環(huán)境條件不利于病害發(fā)生時，該方法無法得到準確地測定結果。③大田病圃人工誘發(fā)鑒定方法，該方法通過建立病圃，人工定量接種病原菌，模擬自然發(fā)病條件等手段，在一定程度上提高了測試的準確性，但是依然無法從根本上解決外部環(huán)境對鑒定結果的影響。同時，病原菌接種的量及接種時間等因素都會對最終的結果產生影響。因此，該方法還存在鑒定品種及數(shù)量有限，鑒定結果易發(fā)生波動等問題。而且該方法從育苗到鑒定的完成需要的時間較長。


發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術的不足，提供一種煙草普通花葉病抗性的苗期鑒定方法，用苗期鑒定結果替代傳統(tǒng)大田鑒定結果，避免外部環(huán)境對鑒定結果的影響，提高煙草普通花葉病抗性鑒定的準確性，縮短鑒定時間。
本發(fā)明的目的通過以下技術方案予以實現(xiàn)。
一種煙草普通花葉病抗性的苗期鑒定方法，包括以下順序的步驟 1.接種體準備 采集感染煙草普通花葉病的病葉，用PH值為7.0的磷酸緩沖液磨碎，將磨碎后的汁液摩擦接種于心葉煙上；分離心葉煙上的枯斑，再通過摩擦接種轉接到K326上進行擴繁，得到煙草普通花葉病接種體，備用； 2.病圃設計及管理 將待鑒定品種置于育苗盤內栽培，每個品種56～60株，不設重復，苗期管理按常規(guī)進行；以Coker176品種為抗病對照，K326品種為感病對照，紅花大金元品種為中感對照； 所述的育苗盤為128孔育苗盤。
3.接種 將備用的接種體用pH值7.0的磷酸緩沖液稀釋過濾，設定接種濃度為2％，于大十字期至貓耳期進行高壓噴槍接種； 噴槍接種時，接種槍距煙苗25～35cm，對準心葉，每株煙噴射二次，噴射壓力設定為1.5～2kg/cm2。
4.鑒定分級 于接種后的第21天進行病情調查，所得病指作為測試品種的抗性指標，進而按國家標準對鑒定品種進行分級。
本發(fā)明率先提出一種具有實用價值的煙草普通花葉病苗期鑒定方法，實現(xiàn)了用苗期鑒定結果替代傳統(tǒng)大田鑒定結果，有效避免外部環(huán)境對鑒定結果的影響，大幅度地縮短了鑒定的時間，提高了鑒定的數(shù)量和質量，節(jié)省地力。該方法操作簡便，成本低廉，具有良好的市場應用前景。

具體實施例方式 下面結合實施例對本發(fā)明作進一步詳細的說明，但他們不是對本發(fā)明的限定。
實施例1 一種煙草普通花葉病抗性的苗期鑒定方法，采集感染煙草普通花葉病的病葉，用PH值為7.0的磷酸緩沖液磨碎，將磨碎后的汁液摩擦接種于心葉煙上。分離心葉煙上的枯斑，再通過摩擦接種轉接到K326上進行擴繁，得到煙草普通花葉病接種體，備用。將待鑒定品種置于128孔育苗盤內栽培，每個品種56株，不設重復，苗期管理按常規(guī)進行。以Coker176品種為抗病對照，K326品種為感病對照，紅花大金元品種為中感對照。將備用的接種體用pH值7.0的磷酸緩沖液稀釋過濾，設定接種濃度為2％，于大十字期至貓耳期進行高壓噴槍接種。接種時，接種槍距煙苗25cm，對準心葉，每株煙噴射二次，噴射壓力設定為1.5kg/cm2。于接種后的第21天進行病情調查，所得病指作為測試品種的抗性指標。按國家行業(yè)標準YC/T39-1996將病害分為四級抗病(R)病指25以下；中抗(MR)；病指在25.1-50.0；中感(MS)病指在50.1-75.0；感病(S)病指75以上。
實施例2 重復實施例1，有以下不同點每個品種栽培58株。
實施例3 重復實施例1，有以下不同點每個品種栽培60株。
實施例4 重復實施例1，有以下不同點接種槍距煙苗30cm。
實施例5 重復實施例1，有以下不同點接種槍距煙苗35cm。
實施例6 重復實施例1，有以下不同點接種槍噴射壓力設定為1.8kg/cm2。
實施例7 重復實施例1，有以下不同點接種槍噴射壓力設定為2.0kg/cm2。
TMV苗期鑒定與大田鑒定結果相關性分析。
實驗例1 1.材料和方法 1.1參試品種 TMV抗性鑒定品種包括云南省區(qū)試品種、全國區(qū)試品種、中美巴品種和白肋煙品種，詳見表1。以Coker176為抗病對照，K326品種為感病對照，紅花大金元品種為中感對照。
1.2接種體的準備 1.2.1TMV接種體的準備 將TMV病葉置于冰箱內冷凍保存，次年用PH7.0的磷酸緩沖液磨碎，然后摩擦接種于心葉煙上進行枯斑分離，取心葉煙上的枯斑，再通過摩擦接種轉接到K326上進行擴繁備用。
1.3試驗方法 1.3.1TMV大田鑒定 各鑒定品種在大田病圃隨機排列，3次重復，每重復種植10株，行株距為0.9m×0.5m，每千株煙施純氮8kg，N∶P2O5∶K2O為1∶1∶2.5，大田管理按優(yōu)質煙栽培技術執(zhí)行。
1.3.2TMV苗期鑒定 各鑒定品種在育苗盤內進行，不設重復，每份品種種植60株，各鑒定品種苗期管理按常規(guī)進行。
1.3.3TMV接種方法 大田和溫室鑒定品種(系)均采用人工接種誘發(fā)鑒定，用病毒稀釋過濾液(pH為7.0的磷酸緩沖液稀釋)進行高壓噴槍接種，每個點噴2次，接種槍距煙苗(煙株)約30cm。大田接種于移栽后15～20d進行，接種濃度為1％；溫室接種于大十字期至貓耳期進行，設兩個實驗組，接種濃度分別為1％和2％。
1.3.4TMV調查方法 大田鑒定于接種后10、20、30d，苗期鑒定于接種后7、14、21d分3次進行病情調查，以最后一次調查的病指進行相關性分析； TMV病害的分級標準均按國家行業(yè)標準YC/T39-1996規(guī)定執(zhí)行。
1.4抗性劃分標準 根據(jù)最后確定的病指，將品種的抗性劃分為四級 抗病(R)病指25以下； 中抗(MR)；病指在25.1-50.0； 中感(MS)病指在50.1-75.0； 感病(S)病指75以上。
2.鑒定結果如表1所示。
表1 TMV苗期和大田期鑒定結果 續(xù)表1 苗期鑒定設置了2個實驗組，第1組在成苗時接種，接種濃度為1％；第2組在大十字期至貓耳期接種，接種濃度為2％。經(jīng)過計算，大田鑒定結果與溫室第1組鑒定結果的相關系數(shù)為R1＝0.7286，大田鑒定結果與溫室第2組鑒定結果的相關系數(shù)為R2＝0.9977。
實驗例2 1.材料和方法 1.1參試品種 TMV抗性鑒定品種包括云南省區(qū)試品種、全國區(qū)試品種、中美巴品種和白肋煙品種，詳見表2。以Coker176為抗病對照，K326品種為感病對照，紅花大金元品種為中感對照。
1.2接種體的準備 1.2.1TMV接種體的準備 將TMV病葉置于冰箱內冷凍保存，次年用PH7.0的磷酸緩沖液磨碎，然后摩擦接種于心葉煙上進行枯斑分離，取心葉煙上的枯斑，再通過摩擦接種轉接到K326上進行擴繁備用。
1.3試驗方法 1.3.1TMV大田鑒定 各鑒定品種在大田病圃隨機排列，3次重復，每重復種植10株，行株距為0.9m×0.5m，每千株煙施純氮8kg，N∶P2O5∶K2O為1∶1∶2.5，大田管理按優(yōu)質煙栽培技術執(zhí)行。
1.3.2TMV苗期鑒定 各鑒定品種在育苗盤內進行，不設重復，每份品種種植60株，各鑒定品種苗期管理按常規(guī)進行。
1.3.3TMV接種方法 大田和溫室鑒定品種(系)均采用人工接種誘發(fā)鑒定，用病毒稀釋過濾液(pH為7.0的磷酸緩沖液稀釋)進行高壓噴槍接種，每個點噴2次，接種槍距煙苗(煙株)約30cm。大田接種于移栽后15～20d進行，接種濃度為1％；溫室接種于大十字期至貓耳期進行，設兩個實驗組，接種濃度分別為1％和2％。
1.3.4TMV調查方法 大田鑒定于接種后10、20、30d，苗期鑒定于接種后7、14、21d分3次進行病情調查，以最后一次調查的病指進行相關性分析； TMV病害的分級標準均按國家行業(yè)標準YC/T39-1996規(guī)定執(zhí)行。
1.4抗性劃分標準 根據(jù)最后確定的病指，將品種的抗性劃分為四級 抗病(R)病指25以下； 中抗(MR)；病指在25.1-50.0； 中感(MS)病指在50.1-75.0； 感病(S)病指75以上。
2.鑒定結果如表2所示。
表2 TMV苗期與大田期鑒定結果 表中“/”為苗期未作鑒定。
苗期鑒定進行了兩次，第1次為貓耳期時接種，接種濃度為2％。用苗期鑒定結果與大田鑒定結果差異較大的品種再進行第2次接種鑒定，接種時期為大十字期至貓耳期，接種濃度為2％。
用大田鑒定結果分別與溫室第1次接種結果和第2次接種結果進行相關性分析。大田鑒定結果與溫室第1次接種結果的相關系數(shù)為r3＝0.4251，大田鑒定結果與溫室第2次接種結果的相關系數(shù)為R4＝0.9751。兩次苗期接種時期相同，但r3＝0.4251而R4＝0.9751，結果之間有一定的差異，可能與高壓噴槍接種時的接種高度和接種時間有關。
查r與R的5％和1％顯著性值表，R1、R2、R4在1％水平上均達顯著正相關，r3在5％水平上達顯著正相關。由此可見，苗期鑒定和大田鑒定存在一定的正相關，且相關性明顯，說明完全可以用苗期鑒定代替大田鑒定。從幾次鑒定結果看，接種的最佳時期為大十字至貓耳期，接種的最佳濃度為1∶50。
權利要求
1、一種煙草普通花葉病抗性的苗期鑒定方法，該方法包括以下順序的步驟
①接種體準備
采集感染煙草普通花葉病的病葉，用PH值為7.0的磷酸緩沖液磨碎，將磨碎后的汁液摩擦接種于心葉煙上；分離心葉煙上的枯斑，再通過摩擦接種轉接到K326上進行擴繁，得到煙草普通花葉病接種體，備用；
②病圃設計及管理
將待鑒定品種置于育苗盤內栽培，每個品種56～60株，不設重復，苗期管理按常規(guī)進行；以Coker176品種為抗病對照，K326品種為感病對照，紅花大金元品種為中感對照；
③接種
將備用的接種體用pH值7.0的磷酸緩沖液稀釋過濾，設定接種濃度為2％，于大十字期至貓耳期進行高壓噴槍接種；
④鑒定分級
于接種后的第21天進行病情調查，所得病指作為測試品種的抗性指標，進而按國家標準對鑒定品種進行分級。
2、根據(jù)權利要求1所述的鑒定方法，其特征在于步驟(2)所述的育苗盤為128孔育苗盤。
3、根據(jù)權利要求1所述的鑒定方法，其特征在于按步驟(3)所述進行噴槍接種時，接種槍距煙苗25～35cm，對準心葉，每株煙噴射二次，噴射壓力設定為1.5～2kg/cm2。
4、根據(jù)權利要求1所述的鑒定方法，其特征在于步驟(4)所述的國家標準為國家行業(yè)標準YC/T39-1996。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種煙草普通花葉病抗性的苗期鑒定方法，包括接種體準備、病圃設計及管理、接種和鑒定分級等步驟。實現(xiàn)了用苗期鑒定結果替代傳統(tǒng)大田鑒定結果，有效避免外部環(huán)境對鑒定結果的影響，大幅度地縮短了鑒定的時間，提高了鑒定的數(shù)量和質量，節(jié)省地力。該方法操作簡便，成本低廉，具有良好的市場應用前景。
文檔編號A01G7/00GK1918959SQ20061004865
公開日2007年2月28日 申請日期2006年9月5日 優(yōu)先權日2006年9月5日
發(fā)明者盧秀萍, 李永平, 白永富, 肖炳光, 段玉琪 申請人:云南省煙草科學研究所