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一種基于金屬有機骨架材料熒光傳感器檢測尿素的方法

文檔序號:10651942閱讀:1096來源:國知局
一種基于金屬有機骨架材料熒光傳感器檢測尿素的方法
【專利摘要】一種基于金屬有機骨架材料熒光傳感器檢測尿素的方法,包括下列步驟:步驟1:制備鋯金屬有機骨架材料UiO?66?NH2;步驟2:將上述鋯金屬有機骨架材料UiO?66?NH2均勻研磨,稱取研磨后的粉末超聲振蕩分散在蒸餾水中,得到UiO?66?NH2材料溶液,避光貯存在4℃下備用;步驟3:取脲酶溶于羥乙基哌嗪乙硫磺酸緩沖溶液中,制得脲酶溶液,避光貯存在4℃下備用;步驟4:分別取UiO?66?NH2材料溶液和脲酶溶液,將兩溶液充分混合后,于37℃下保持10分鐘,檢測熒光信號;步驟5:加入不同濃度的尿素,于37℃下孵育30分鐘,檢測不同濃度尿素存在下的熒光信號;步驟6:根據(jù)熒光信號和工作曲線對樣品中尿素進行定性、定量分析。本發(fā)明是一種快速、準確可靠、靈敏、特異性高的尿素檢測方法。
【專利說明】
一種基于金屬有機骨架材料熒光傳感器檢測尿素的方法
技術領域
[0001] 本發(fā)明涉及食品安全、水質監(jiān)控等分析檢測領域,尤其涉及利用金屬有機骨架材 料熒光特性檢測尿素的方法。
【背景技術】
[0002] 尿素是氨基酸代謝的最終產(chǎn)物,當尿素的含量超過自身的吸收能力之后,將會對 機體的肝、腎、肺泡等造成危害。近年來在牛奶、豆芽等食品加工生產(chǎn)中為增產(chǎn)增收而非法 添加尿素的問題層出不窮,在牛、羊等家畜飼料中非法添加尿素造成牲畜死亡的事件也時 有發(fā)生,同時環(huán)境中也存在尿素超標的問題,海濱浴場和游泳池中尿素濃度偏高也會影響 人們健康。因此,尿素的檢測在臨床診斷、食品科學和水質監(jiān)控等方面具有重要的意義。
[0003] 目前尿素常用檢測技術主要有直接比色法、間接比色法、色譜法、中紅外光譜法 等。(1)直接比色法即用某種特殊試劑與尿素直接反應(41^15^;^3〇1;[111;^3 4(^3,2007, 591(2) :239),產(chǎn)生顯色物質,在特定波長下測定其吸光度,再換算為尿素濃度。該法成本 低,易操作,但靈敏度不高,適合常量尿素的檢測,在檢測尿素濃度較低的樣品時有一定局 限性,所用試劑有些具有毒性和腐蝕性,易污染環(huán)境。(2)間接比色法是基于脲酶水解尿素 (Trends in Analytical Chemistry,2002,21(5):389),產(chǎn)生二氧化碳和銨離子,通過銨離 子與多種化學試劑反應產(chǎn)生顏色等參數(shù)變化,利用分光光度法間接測定尿素的含量的方 法。與直接比色法相比,間接比色法特異性高、快速、結果準確精密,但所用試劑價格昂貴, 脲酶的活性受樣品中共存物質的干擾較大。采用比色法測定,樣品溶液的顏色和渾濁易造 成假陽性。(3)高效液相色譜法與熒光法或質譜法聯(lián)用檢測尿素(色譜,2015,33(1):80;分 析測試學報,2012,31(5):593),具有高速、高效、高靈敏等特點,但有些需要對尿素進行復 雜的衍生化處理,且色譜設備昂貴,操作復雜,對分析人員要求較高,不適合現(xiàn)場檢測。(4) 中紅外光譜法檢測尿素(Food Chemistry,2013,138(l): 19),無需對樣品進行預處理,試樣 用量少,但準確度方面有較大缺陷,只能定性或半定量檢測。也有酶電極法(Journal of Biochemical and Biophysical Methods,2008,70(6): 1145),基于尿素和脈酶反應使溶液 電導率發(fā)生改變,對尿素進行定量分析。這種方法需要將脲酶固定在傳感材料上,酶電極 的重現(xiàn)性和穩(wěn)定性較難控制。另有專利技術(中國專利,申請?zhí)?201510091353.1)利用石墨 烯量子點檢測尿素,由于邊緣狀態(tài)和量子局限,石墨烯量子點的形狀和大小將決定它們的 電學、光學、磁性和化學特性,獲取特定邊緣形狀和均勻尺寸的石墨烯量子點是個難題。
[0004] 金屬有機骨架材料是由金屬離子或金屬簇和有機配體通過自組裝而形成的一類 新型納微結構功能材料,具有結構可設計性與可調控性、低晶體密度以及高比表面積等特 征,其中,鑭系金屬、鎘、鋅、鉿、釔、鋯等金屬有機骨架材料具有優(yōu)越的熒光性質,多應用在 氣體儲存、手性分離和催化、分子磁體、光電材料等領域,金屬有機骨架材料在分子傳感以 及臨床診斷、環(huán)境污染、食品安全分析中的應用有待進一步深入研究。

【發(fā)明內容】

[0005] 本發(fā)明要解決的技術問題在于:克服現(xiàn)有尿素檢測技術共存物質干擾大、靈敏度 低、操作煩瑣耗時、假陽性率高等不足,將金屬有機骨架材料應用于食品安全及水質監(jiān)控等 分析領域,利用金屬有機骨架材料的熒光隨酸度改變的特性,結合蛋白質脲酶的特異性識 別能力,提供一種快速、準確可靠、靈敏、特異性高的尿素檢測方法。
[0006] 為了解決上述技術問題,本發(fā)明提出以下技術方案:一種基于金屬有機骨架材料 熒光傳感器檢測尿素的方法,其包括下列步驟:
[0007] 步驟1:制備鋯金屬有機骨架材料Ui〇-66-NH2,包括下列步驟la和步驟lb:
[0008] 步驟la:Ui〇-66-NH2的合成:在室溫下,將0.322g~1.29g即lmmol~4mmol的八水 氧氯化錯Zr0Cl2 · 8H2〇,0.181g~0.724g即lmmol~4mmol的2-氨基-1,4_苯二甲酸二甲酯 BDC-NH2,1 · 221g~9 · 77g即 lOmmol ~80mmol 的苯甲酸和0 · 174mL~0 · 70mL 濃度為 12mol/L 的 濃鹽酸超聲溶解在17mL~68mL的N,N-二甲基甲酰胺中,溶解后,將溶液轉移到100mL聚四氟 乙烯內襯的高壓反應釜中,將其放入烘箱中,在1 〇〇°C~150°C溫度下反應16小時~24小時, 再冷卻至室溫,將產(chǎn)物過濾,得到黃色粉末狀產(chǎn)物,分別用10mL~40mL的N,N-二甲基甲酰胺 和1 OmL~40mL的丙酮淋洗三次,80 °C~120 °C烘干,備用;
[0009] 步驟lb,Ui〇-66_NH2材料的活化:采用溶劑交換法,將步驟la得到的固體粉末放在 10mL~50mL的N,N-二甲基甲酰胺中離心浸洗12小時,每4小時更換一次溶劑,除去殘留在材 料孔道及表面沒有反應的配體和金屬離子,接著用10mL~40mL乙醇浸泡1天~2天,每8小時 更換一次溶劑,然后在真空干燥箱中于80 °C~120°C下干燥18小時~36小時,除去低沸點的 溶劑及水分,即得到活化后的Ui〇-66-NH2材料;
[0010] 步驟2:將上述制得的鋯金屬有機骨架材料Ui〇-66-NH2均勻研磨,稱取研磨后的粉 末超聲振蕩分散在蒸餾水中,得到Ui〇-66-NH 2材料溶液,避光貯存在4°C下備用;
[0011] 步驟3:取脲酶溶于羥乙基哌嗪乙硫磺酸緩沖溶液中,制得脲酶溶液,避光貯存在4 °(:下備用;
[0012] 步驟4:分別取Ui〇-66-NH2材料溶液和脲酶溶液,將兩溶液充分混合后,于37°C下 保持10分鐘,檢測熒光信號;
[0013] 步驟5:在上述混合溶液中加入不同濃度的尿素,于37°C下孵育30分鐘,檢測不同 濃度尿素存在下的焚光信號。
[0014] 步驟6:上述步驟5中所測的熒光信號與尿素濃度在一定范圍內成線性,根據(jù)熒光 信號和工作曲線可以對樣品中尿素進行定性、定量分析。
[0015] 本發(fā)明中,當體系中沒有目標物尿素時,體系的pH不發(fā)生改變,只能測到金屬有機 骨架材料的背景熒光;當體系中存在目標物尿素時,尿素與脲酶發(fā)生反應生成銨離子,使溶 液的pH增大,金屬有機骨架材料分子發(fā)生聚集導致熒光信號增強,據(jù)此實現(xiàn)對尿素的分析 檢測。以Ui〇-66-NH 2材料為例,檢測原理如圖1所示。
[0016] 上述基于金屬有機骨架材料熒光傳感器檢測尿素的方法中,所述的金屬有機骨架 材料不僅能夠發(fā)射熒光,而且其熒光與體系pH具有較強的依賴性,可通過溶劑熱法、微波 法、超聲法、固相合成及電化學合成等方法制備得到。
[0017] 本發(fā)明所述的金屬有機骨架材料并不僅限于上述步驟中制得的鋯金屬有機骨架 材料Ui〇-66_NH2,也包含鑭系金屬、鎘、鋅、鉿、釔等金屬有機骨架材料,在本發(fā)明技術構思 范圍內的金屬有機骨架材料均屬于本發(fā)明的保護范圍。
[0018] 與現(xiàn)有尿素檢測技術相比,本發(fā)明的顯著優(yōu)點為:
[0019] (1)利用金屬有機骨架材料熒光隨酸度改變的特性,將金屬有機骨架材料應用于 食品安全、水質監(jiān)控、臨床診斷等分析領域,結合蛋白質脲酶的特異性識別能力,為尿素的 快速檢測與鑒定提供有效手段,有望形成新的分子傳感分析方法。
[0020] (2)本發(fā)明方法是一種共性的檢測方法,不僅可廣泛用于尿素的檢測,還可應用于 生物大分子(核酸、蛋白質)和小分子(食品和環(huán)境中化學污染物等)的檢測。
[0021] (3)本發(fā)明基于金屬有機骨架材料熒光傳感器檢測尿素的方法,利用金屬有機骨 架材料熒光隨酸度改變的特性,結合蛋白質脲酶的特異性識別能力,提供一種快速、準確可 靠、靈敏、特異性高的尿素檢測方法。當體系中沒有目標物尿素時,體系的pH不發(fā)生改變,只 能測到金屬有機骨架材料的背景熒光;當體系中存在目標物尿素時,尿素與脲酶發(fā)生反應 生成銨離子,使溶液的pH增大,金屬有機骨架材料分子發(fā)生聚集導致熒光增強,基于此構建 了對尿素快速檢測的傳感器。以鋯金屬有機骨架材料Ui〇-66-NH 2為例,Ui〇-66-NH2熒光強度 與尿素濃度在0.4~8.0mg/L范圍內呈良好的線性關系,檢出限達0.3173mg/L(S/N = 3),加 標實驗的相對標準偏差(RSD)介于2.0%~5.4%,回收率在93.3%~106.7%范圍內。本發(fā) 明用于尿素的檢測具有準確、靈敏、特異性高等優(yōu)點。
【附圖說明】
[0022]圖1基于金屬有機骨架材料Ui〇-66_NH2熒光傳感器檢測尿素的示意圖。
[0023]圖2A和圖2B分別是金屬有機骨架材料Ui〇-66-NH2熒光傳感器不同濃度尿素的熒 光光譜圖及工作曲線圖,其中尿素濃度a~h分別是:0 · 4mg/mL,0 · 6mg/mL,1 · Omg/mL,1 · 2mg/ mL,2·Omg/mL,4·Omg/mL,6·Omg/mL,8·Omg/mL 〇
[0024] 圖3金屬有機骨架材料Ui〇-66-NH2熒光傳感器檢測尿素及其它常見共存物質的信 號對比圖,其中尿素的濃度為6.0mg/L,其它物質的濃度均為300mg/L。
【具體實施方式】
[0025] 本發(fā)明提出一種基于金屬有機骨架材料熒光傳感器檢測尿素的方法,其包括下列 步驟:
[0026] 步驟1:制備鋯金屬有機骨架材料Ui〇-66_NH2,包括下列步驟la、lb:
[0027] 步驟la:Ui〇-66-NH2的合成:在室溫下,將八水氧氯化鋯(ZrOCl 2 · 8H20,0.322g~ 1 · 29g,lmmol~4mmol)、2_氛基-1,4_苯二甲酸二甲酯(BDC-NH2,0 · 181g~0 · 724g,1 mmol ~ 4mmo 1)、苯甲酸(1 · 221g~9 · 77g,lOmmol~80mmol)和濃鹽酸(12mol/L,0 · 174mL~0 · 70mL) 超聲溶解在17mL~68mL N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中,溶解后,將溶液轉移到100mL聚四氟乙 烯內襯的高壓反應釜中,將其放入烘箱中,在1 〇〇 °C~150 °C溫度下反應16小時~24小時,再 冷卻至室溫,將產(chǎn)物過濾,得到黃色粉末狀產(chǎn)物,分別用10mL~40mL DMF和10mL~40mL丙酮 淋洗三次,80 °C~120 °C烘干,備用。
[0028] 步驟lb,Ui〇-66_NH2材料的活化:采用溶劑交換法,將步驟la得到的固體粉末放在 10mL~50mL的DMF中離心浸洗12小時(每4小時更換一次溶劑),除去殘留在材料孔道及表面 沒有反應的配體和金屬離子,接著用10mL~40mL乙醇浸泡1天~2天(每8小時更換一次溶 劑),然后在真空干燥箱中于80°C~120 °C下干燥18小時~36小時,除去低沸點的溶劑及水 分,即得到活化后的Ui〇-66-NH2材料;
[0029]步驟2:將上述制得的鋯金屬有機骨架材料Ui〇-66-NH2均勻研磨,稱取研磨后的粉 末超聲振蕩分散在蒸餾水中,得到Ui〇-66-NH2材料溶液,避光貯存在4°C下備用;
[0030] 步驟3:取脲酶溶于HEPES(羥乙基哌嗪乙硫磺酸)緩沖溶液中,制得脲酶溶液,避光 貯存在4°C下備用;
[0031] 步驟4:分別取Ui〇-66-NH2材料溶液和脲酶溶液,將兩溶液充分混合后,于37°C下 保持10分鐘,檢測熒光信號;
[0032] 步驟5:在上述混合溶液中加入不同濃度的尿素,于37°C下孵育30分鐘,檢測不同 濃度尿素存在下的焚光信號。
[0033] 步驟6:上述步驟5中所測的熒光信號與尿素濃度在一定范圍內成線性,根據(jù)熒光 信號和工作曲線可以對樣品中尿素進行定性、定量分析。
[0034]實施例1(本發(fā)明方法檢測尿素)
[0035]先合成含鋯有機骨架材料Ui〇-66_NH2,流程如下:
[0036]步驟 1:將 ZrOCl2 · 2.5出0(0.6458,2111111〇1)、80(:-冊2(0.3628,2111111〇1)、苯甲酸 (4.885g,40mmo)和濃鹽酸(12mol/L,0.347mL)超聲溶解在34mL DMF中,溶解后,將溶液轉移 到lOOmL聚四氟乙烯內襯的高壓反應釜中,將其放入烘箱中,在120°C下反應24小時,再冷卻 至室溫,將產(chǎn)物過濾,得到黃色粉末狀產(chǎn)物,分別用20mL DMF和10mL丙酮淋洗三次,80 °C °C 烘干,備用。
[0037]步驟2:將步驟1得到的固體粉末放在20mL DMF中離心浸洗12小時(每4小時更換一 次溶劑),接著用10mL乙醇浸泡1天(每8小時更換一次溶劑),然后在真空干燥箱中于80°C下 干燥20小時,即得到活化后的Ui〇-66-NH 2材料。
[0038]將上述制得的含鋯有機骨架材料Ui〇-66-NH2均勻研磨,稱取研磨后的粉末5.0mg 超聲振蕩分散在100.0 mL蒸餾水中,得到0.05mg/mL Ui〇-66-NH2材料溶液,避光貯存在4°C 下備用。
[0039] 取脲酶10 · Omg溶于1 · OmL HEPES(羥乙基哌嗪乙硫磺酸,20mmo 1 /L,pH7 · 4)緩沖溶 液中,制得濃度為10mg/mL脲酶溶液,避光貯存在4°C下備用。
[0040]分別取3 · 0mL(0 · 05mg/mL)Ui0-66-NH2材料溶液和0 · lmL( 10mg/mL)脲酶溶液,將兩 溶液充分混合后中,于37 °C下保持10分鐘,檢測熒光信號。
[0041 ] 在上述混合溶液中加入10yL不同濃度的尿素,于37°C下孵育30分鐘,檢測不同濃 度尿素存在下的焚光信號。
[0042]結果顯示,當尿素濃度在0.4~8.0mg/L濃度范圍時,體系熒光強度與濃度呈線性 相關(7 = 74.12義+136.55,1? = 0.9987),檢出限達0.317311^/1(5/^=3),如圖2所示。
[0043] 實施例2(本發(fā)明方法在檢測尿素及其它常見共存物質中的應用)
[0044] 為評價本發(fā)明方法的特異性,選取食品中常見的共存物質如鈣離子Ca2+、鉀離子K +、鈉離子Na+、谷氨酸Glu、牛血清蛋白BSA、乳糖Lac和酪蛋白Casein,按照實施例1所述的檢 測步驟對這些物質進行測定,記錄各自的熒光信號并加以對比,結果如圖3所示。由于脲酶 的目標物是尿素,因此尿素(6.0mg/L)的熒光信號最強,而其它共存物質(300mg/L)濃度50 倍于尿素的情況下,熒光強度是尿素信號的三分之一甚至更低。該結果表明基于金屬有機 骨架材料Ui〇-66-NH 2熒光傳感器檢測尿素的方法具有高度特異性和選擇性。
[0045] 實施例3(本發(fā)明方法應用于白酒中尿素的檢測)
[0046] 五份白酒樣品購自當?shù)爻?,分別取五份酒樣25mL加入五個圓底燒瓶中,置于旋 轉蒸發(fā)儀上,于溫度80 °C,轉速70~80r/min條件下蒸干,將燒瓶中酒樣完全蒸發(fā)干后,取下 燒瓶,冷卻至室溫,加入5mL蒸餾水,充分振蕩將殘留物洗出,洗出液通過0.22μπι水相濾膜過 濾,得到處理后樣液五份。每個樣品平行檢測三次。
[0047]按照實施例1所述的分析步驟分別檢測五份處理后的白酒樣液,五份白酒樣品均 檢出尿素,結果如表1所示。
[0048]向五份白酒樣液中分別添加不同濃度(0. lmg/L~0.3mg/L)尿素,按照實施例1所 述的分析步驟再檢測五份白酒樣液,檢測結果如表1所示,加標實驗的相對標準偏差(RSD) 介于2.0%~5.4%,回收率在93.3%~106.7%范圍內。由此可見,本發(fā)明方法具有較高的 準確度和精密度,適合實際樣品分析。
[0049] 表1含鋯有機骨架材料Ui〇-66_NH2熒光傳感器檢測白酒中尿素
[0051] a.平行測定三次取平均值;
[0052] b.平均值土標準偏差,n = 3。
【主權項】
1. 一種基于金屬有機骨架材料熒光傳感器檢測尿素的方法,其特征在于,其包括下列 步驟: 步驟1:制備鋯金屬有機骨架材料Ui〇-66-NH2,包括下列步驟la和步驟lb: 步驟la:Ui〇-66-NH2的合成:在室溫下,將0.322g ~ 1.29g即lmmol~4mmol的八水氧氯 化錯ZrOCl2· 8H2〇,0 · 181g ~0 · 724gBP lmmol ~4mmol 的2-氛基-1,4_苯二甲酸二甲酯 BDC-NH2,1.221g ~9.77g即lOmmol ~80mmol的苯甲酸和0.174mL ~0.70mL濃度為 12mol/ L的濃鹽酸超聲溶解在17mL~68mL的N,N-二甲基甲酰胺中,溶解后,將溶液轉移到100mL 聚四氟乙烯內襯的高壓反應釜中,將其放入烘箱中,在100°0 150°C溫度下反應16小時~ 24小時,再冷卻至室溫,將產(chǎn)物過濾,得到黃色粉末狀產(chǎn)物,分別用10mL~40mL的N,N-二 甲基甲酰胺和10mL~40mL的丙酮淋洗三次,80°〇 120°C烘干,備用; 步驟lb,Ui〇-66-NH2材料的活化:采用溶劑交換法,將步驟la得到的固體粉末放在10mL ~50mL的N,N-二甲基甲酰胺中離心浸洗12小時,每4小時更換一次溶劑,除去殘留在材料 孔道及表面沒有反應的配體和金屬離子,接著用10mL~40mL乙醇浸泡1天~2天,每8小時 更換一次溶劑,然后在真空干燥箱中于80°〇 120°C下干燥18小時~36小時,除去低沸點 的溶劑及水分,即得到活化后的Ui〇-66-NH2材料; 步驟2:將上述制得的鋯金屬有機骨架材料Ui〇-66-NH2均勻研磨,稱取研磨后的粉末超 聲振蕩分散在蒸餾水中,得到Ui〇-66-NH2材料溶液,避光貯存在4°C下備用; 步驟3:取脲酶溶于羥乙基哌嗪乙硫磺酸緩沖溶液中,制得脲酶溶液,避光貯存在4 °C下 備用; 步驟4:分別取Ui〇-66-NH2材料溶液和脲酶溶液,將兩溶液充分混合后,于37°C下保持10 分鐘,檢測焚光信號; 步驟5:在上述混合溶液中加入不同濃度的尿素,于37°C下孵育30分鐘,檢測不同濃度 尿素存在下的焚光信號; 步驟6:上述步驟5中所測的熒光信號與尿素濃度在一定范圍內成線性,根據(jù)熒光信號 和工作曲線可以對樣品中尿素進行定性、定量分析。2. 根據(jù)權利要求1所述的基于金屬有機骨架材料熒光傳感器檢測尿素的方法,其特征 在于, 上述步驟1:制備鋯金屬有機骨架材料Ui〇-66-NH2,包括下列步驟la、lb: 步驟la:將0.645g即2mmol 的ZrOCl2' 2.5出0,0.36288口2臟〇1的80(:-順2,4.8858即 40mmol苯甲酸和0 · 347mL濃度為12mo 1/L的濃鹽酸超聲溶解在34mL N,N-二甲基甲酰胺中, 溶解后,將溶液轉移到l〇〇mL聚四氟乙烯內襯的高壓反應釜中,將其放入烘箱中,在120°C下 反應24小時,再冷卻至室溫,將產(chǎn)物過濾,得到黃色粉末狀產(chǎn)物,分別用20mL N,N-二甲基甲 酰胺和1 OmL丙酮淋洗三次,80 °C °C烘干,備用; 步驟lb:將步驟la得到的固體粉末放在20mL N,N-二甲基甲酰胺中離心浸洗12小時,每 4小時更換一次溶劑,接著用10mL乙醇浸泡1天,每8小時更換一次溶劑,然后在真空干燥箱 中于80°C下干燥20小時,即得到活化后的仍0-66-順 2材料; 上述步驟2中,將上述制得的含鋯有機骨架材料Ui〇-66-NH2均勻研磨,稱取研磨后的粉 末5.Omg超聲振蕩分散在100.OmL蒸餾水中,得到0.05mg/mL Ui〇-66-NH2材料溶液,避光貯 存在4°C下備用; 上述步驟3中,取脲酶10.Omg溶于1 .OmL羥乙基哌嗪乙硫磺酸緩沖溶液中,該羥乙基哌 嗪乙硫磺酸緩沖溶液的濃度是20mmol/L、pH值7.4,制得濃度為10mg/mL脲酶溶液,避光貯存 在4°C下備用; 上述步驟4中,分別取3. OmL濃度為0.05 mg/mL的Ui〇-66-NH2材料溶液和0. lmL濃度為 10mg/mL的脲酶溶液,將兩溶液充分混合后中,于37°C下保持10分鐘,檢測熒光信號; 上述步驟5中,在上述混合溶液中加入lOyL不同濃度的尿素,于37°C下孵育30分鐘,檢 測不同濃度尿素存在下的熒光信號; 步驟6:上述步驟5中所測的熒光信號與尿素濃度在一定范圍內成線性,根據(jù)熒光信號 和工作曲線可以對樣品中尿素進行定性、定量分析。
【文檔編號】G01N21/64GK106018360SQ201610319801
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年5月13日
【發(fā)明人】蔣曉華, 丁文捷
【申請人】深圳職業(yè)技術學院
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