檢測方法的流程示意圖；
[0029] 圖3是本發(fā)明的實施例1的檢測血清淀粉樣蛋白A含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
[0030] 圖4是本發(fā)明的實施例5的檢測血清淀粉樣蛋白A試劑盒與國外對比試劑盒的比較 結(jié)果示意圖。
【具體實施方式】
[0031] 為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點更加清楚明白，以下結(jié)合附圖和實施例，對 本發(fā)明進行進一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并 不用于限定本發(fā)明。
[0032] 本發(fā)明提供了一種檢測血清淀粉樣蛋白A含量的試劑盒。該試劑盒包括:試劑R1、 試劑R2和血清淀粉樣蛋白A校準(zhǔn)品。試劑R1提供適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)環(huán)境，使抗原保持天然構(gòu)象，并 控制反應(yīng)達到終點的時間和速率。試劑R2是一種含有抗人血清淀粉樣蛋白A多克隆抗體包 被膠乳顆粒、均一的乳白色液體。血清淀粉樣蛋白A校準(zhǔn)品用來與樣本比較進行結(jié)果計算。 [0033] 其中，試劑R1包括:第一緩沖液10~500mmol/L、第一電解質(zhì)5~50g/L、表面活性劑 0.5~50g/L、第一穩(wěn)定劑0.5~10g/L、高分子促進劑1~100g/L和第一防腐劑1~10g/L。 [0034]試劑R2包括:第二緩沖液10~500mmol/L、抗人血清淀粉樣蛋白A抗體包被膠乳顆 粒5~50 % w/v (相當(dāng)于抗人血清淀粉樣蛋白A抗體包被膠乳顆粒的濃度為50~500g/L)、第 二電解質(zhì)5~50g/L、第二穩(wěn)定劑0.5~10g/L和第二防腐劑1~10g/L。本發(fā)明中，w/v表示的 意思是單位體積的溶液中所含的溶質(zhì)質(zhì)量。
[0035] 血清淀粉樣蛋白A校準(zhǔn)品包括:第三緩沖液10~500mmol/L、第三穩(wěn)定劑5~50g/L、 第三防腐劑1~l〇g/L、抗氧化劑0.01~10g/L和血清淀粉樣蛋白A抗原。
[0036] 優(yōu)選的，試劑R1包括:第一緩沖液25~150mmol/L、第一電解質(zhì)5~50g/L、表面活性 劑0.5~50g/L、第一穩(wěn)定劑0.5~10g/L、高分子促進劑1~80g/L和第一防腐劑1~10g/L。 [0037]優(yōu)選的，試劑R2包括:第二緩沖液100~500mmol/L、抗人血清淀粉樣蛋白A抗體包 被膠乳顆粒5~50%w/v(相當(dāng)于抗人血清淀粉樣蛋白A抗體包被膠乳顆粒的濃度為50~ 500g/L)、第二電解質(zhì)5~50g/L、第二穩(wěn)定劑0.5~10g/L和第二防腐劑1~10g/L。本發(fā)明中， w/v表示的意思是單位體積的溶液中所含的溶質(zhì)質(zhì)量。其中，抗人血清淀粉樣蛋白A抗體通 過人血清淀粉樣蛋白A抗原親和純化而來。
[0038] 優(yōu)選的，血清淀粉樣蛋白A校準(zhǔn)品包括:第三緩沖液30~500mmol/L、第三穩(wěn)定劑5 ~50g/L、第三防腐劑1~10g/L、抗氧化劑0.01~10g/L和血清淀粉樣蛋白A抗原。
[0039]優(yōu)選的，試劑R1中，第一緩沖液選自醋酸鹽緩沖液、氯化銨緩沖液、磷酸鹽緩沖液、 三羥甲基氨基甲烷TRIS緩沖液、硼砂-氫氧化鈉緩沖液、甘氨酸緩沖液、3-(N-嗎啉)丙磺酸 MOPS緩沖液、3-(環(huán)己胺)-2-羥基-1-丙磺酸CAPS0緩沖液、4-羥乙基哌嗪乙磺酸HEPES緩沖 液中的一種或幾種。第一電解質(zhì)選自氯化鈉、硫酸鎂、氯化鎂和氯化鉀中的一種或幾種。表 面活性劑選自Triton系列表面活性劑、Tween系列表面活性劑、聚氧乙烯烷基苯基醚、月桂 醚、聚氧乙烯壬基苯基醚和聚氧乙烯辛基苯醚中的一種或幾種。第一穩(wěn)定劑選自亞氨基二 乙酸、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸鈉、乙二胺四乙酸二鈉、二乙烯三胺五乙酸鈉、1，2_環(huán)己二醇 縮水甘油、甘露糖、葡萄糖、殼聚糖、山梨醇和牛血清蛋白中的一種或幾種。高分子促進劑選 自脂肪醇聚氧乙烯醚、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸鈉、乙二醇聚氧乙烯醚、羥丙基甲基纖維 素和羥甲基纖維素鈉中的一種或幾種。第一防腐劑選自疊氮鈉、苯酚、對羥基苯甲酸、對羥 基苯甲酸乙酯和乙基汞硫代硫酸鈉中的一種或幾種。
[0040]優(yōu)選的，試劑R2中，第二緩沖液選自醋酸鹽緩沖液、氯化銨緩沖液、磷酸鹽緩沖液、 三羥甲基氨基甲烷TRIS緩沖液、硼砂-氫氧化鈉緩沖液、甘氨酸緩沖液、3-(N-嗎啉)丙磺酸 MOPS緩沖液、3-(環(huán)己胺)-2-羥基-1-丙磺酸CAPS0緩沖液、4-羥乙基哌嗪乙磺酸HEPES緩沖 液中的一種或幾種。第二電解質(zhì)選自氯化鈉、硫酸鎂、氯化鎂和氯化鉀中的一種或幾種。第 二穩(wěn)定劑選自亞氨基二乙酸、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸鈉、乙二胺四乙酸二鈉、二乙烯三胺五 乙酸鈉、1，2_環(huán)己二醇縮水甘油、甘露糖、葡萄糖、殼聚糖、山梨醇和牛血清蛋白中的一種或 幾種。第二防腐劑選自疊氮鈉、苯酚、對羥基苯甲酸、對羥基苯甲酸乙酯和乙基汞硫代硫酸 鈉中的一種或幾種。
[0041 ]優(yōu)選的，試劑R2中，抗體包被膠乳顆粒的制備過程如下：在交聯(lián)緩沖液中，通過化 學(xué)交聯(lián)劑將抗人血清淀粉樣蛋白A多克隆抗體包被到膠乳顆粒的表面。
[0042]其中，交聯(lián)緩沖液選自不含氨基的緩沖液、2-(N-嗎啡啉）乙磺酸MES緩沖液、3-嗎 啉-2-羥基丙磺酸M0PS0緩沖液、3-(N-嗎啉)丙磺酸MOPS緩沖液、4-羥乙基哌嗪乙磺酸HEPES 緩沖液或者磷酸緩沖液。交聯(lián)緩沖液的pH值為6.0~8.0。
[0043]化學(xué)交聯(lián)劑選自碳化亞胺、N-羥基琥珀酰亞胺、N-羥基硫代琥珀酰亞胺、酰肼和異 氰酸酯中的一種或幾種。
[0044]抗人血清淀粉樣蛋白A多克隆抗體選自鼠抗人、雞抗人、兔抗人、羊抗人或?？谷?血清淀粉樣蛋白A抗體。本發(fā)明所用的抗體，優(yōu)選哺乳動物所產(chǎn)生的抗體，產(chǎn)量大，特異性 高，能降低試劑成本。優(yōu)選的，抗人血清淀粉樣蛋白A多克隆抗體為?？谷搜宓矸蹣拥鞍譇 抗體。上述的抗人血清淀粉樣蛋白A多克隆抗體可自制或購買。
[0045]膠乳顆粒為聚苯乙烯膠乳顆粒。優(yōu)選的，膠乳顆粒的濃度為0.5~5mg/mL。膠乳顆 粒的直徑為100~300nm。更優(yōu)選的，膠乳顆粒的直徑為150~250nm。更優(yōu)選的，膠乳顆粒的 直徑為200nm〇
[0046]優(yōu)選的，膠乳顆粒的表面連有功能團。該功能團起修飾的作用。優(yōu)選的，該功能團 選自羧基、氨基、羥基、酰肼或氯甲基。更優(yōu)選的，該功能團為羧基。
[0047]優(yōu)選的，血清淀粉樣蛋白A校準(zhǔn)品中，第三緩沖液選自醋酸鹽緩沖液、氯化銨緩沖 液、磷酸鹽緩沖液、三羥甲基氨基甲烷TRIS緩沖液、硼砂-氫氧化鈉緩沖液、甘氨酸緩沖液、 3-(N-嗎啉）丙磺酸MOPS緩沖液、3-(環(huán)己胺)-2-羥基-1-丙磺酸CAPS0緩沖液和4-羥乙基哌 嗪乙磺酸HEPES緩沖液中的一種或幾種。第三穩(wěn)定劑選自亞氨基二乙酸、脂肪醇聚氧乙烯醚 硫酸鈉、乙二胺四乙酸二鈉、二乙烯三胺五乙酸鈉、1，2_環(huán)己二醇縮水甘油、甘露糖、葡萄 糖、殼聚糖、山梨醇和牛血清蛋白中的一種或幾種。第三防腐劑選自疊氮鈉、苯酚、對羥基苯 甲酸、對羥基苯甲酸乙酯和乙基汞硫代硫酸鈉中的一種或幾種?？寡趸瘎┻x自丁基羥基茴 香醚、沒食子酸丙酯、二丁基羥基甲苯、苯多酚、磷脂、甘草抗氧化物、硫代二丙酸二月桂酯、 特丁基對苯二酚和維生素系列中的一種或幾種。
[0048] 優(yōu)選的，試劑R1的pH為6~9。
[0049] 優(yōu)選的，試劑R2的pH為6~9。
[0050]更優(yōu)選的，試劑R1中的第一緩沖液和試劑R2中的第二緩沖液的成分相同。
[0051]更優(yōu)選的，第三緩沖液為甘氨酸緩沖液。
[0052]更優(yōu)選的，該試劑盒包括如下的成分：
[0053] 試劑R1包括:三羥甲基氨基甲烷Tris緩沖液或磷酸鹽緩沖液10~500mmol/L、氯化 鈉5~50g/L、Triton X 1000.5~50g/L、牛血清蛋白0.5~10g/L、乙二醇聚氧乙稀醚1~ 100g/L和疊氮鈉1~10g/L。試劑R1的pH為6~9。試劑R2包括:磷酸鹽緩沖液10~500mmol/L、 抗人血清淀粉樣蛋白A抗體包被膠乳顆粒5~50 %w/v(該膠乳顆粒的直徑為100~300nm)、 氯化鈉5~50g/L、牛血清蛋白0.5~10g/L和疊氮鈉1~10g/L。試劑R2的pH為6~9。血清淀粉 樣蛋白A校準(zhǔn)品包括:甘氨酸緩沖液10~500mmol/L、牛血清蛋白5~50g/L、疊氮鈉1~10g/ L、二丁基羥基甲苯0.01~10g/L和血清淀粉樣蛋白A抗原。
[0054]本發(fā)明實施例的檢測血清淀粉樣蛋白A含量的試劑盒使用簡便快速，可簡潔快速 地檢測樣本中血清淀粉樣蛋白A的含量;具有較高的準(zhǔn)確度和很好的特異性，能夠滿足臨床 快速尚通量檢測樣本的要求，檢測效率明顯提尚；試劑的穩(wěn)定性大大提尚，在2~8 °C的環(huán)境 下，可以穩(wěn)定存放一年以上，因此在臨床應(yīng)用上具有廣闊的前景;抗體原料可以自制，降低 了試劑成本，易于產(chǎn)業(yè)化;還具有靈敏度高，可自動化檢測等特點。
[0055] 本發(fā)明實施例還提供了一種上述的檢測血清淀粉樣蛋白A含量的試劑盒的在檢測 血清淀粉樣蛋白A含量中的用途，可以用于簡潔快速地檢測樣本中血清淀粉樣蛋白A的含 量，具有較高的準(zhǔn)確度和很好的特異性。
[0056] 本發(fā)明實施例還提供了一種采用上述的檢測血清淀