檢測血清淀粉樣蛋白a含量的試劑盒、方法及用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于檢測血清淀粉樣蛋白A含量的技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種檢測血清淀粉 樣蛋白A含量的試劑盒、方法及用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 血清淀粉樣蛋白A(SAA)是一個高度異質(zhì)性蛋白，代表一個相對分子量為12000的 家族。SAA基因位于第11號染色體，已經(jīng)獲得人類SAA完整的氨基酸序列，其mRNAs和蛋白在 脊椎動物中的表達(dá)均高度保守，表明它有重要的生物學(xué)機能。SAA主要由肝細(xì)胞產(chǎn)生，但肝 外細(xì)胞有SAA的體質(zhì)性表達(dá)。SAA家族包含有不同表達(dá)形式的載脂蛋白、急性相蛋白A(A-SAAs)和結(jié)構(gòu)型SAAK-SAAshA-SAAs是主要的急性反應(yīng)蛋白，在炎癥反應(yīng)中其濃度可以增 加 1000倍之多。相比之下，C-SAAs僅在人和鼠類中被發(fā)現(xiàn)，很少被誘導(dǎo)增多。A-SAAs由104個 氨基酸構(gòu)成，其前端76個氨基酸被酶切后為淀粉樣蛋白A。
[0003] SAA是一個非常敏感的急性相反應(yīng)物，在炎癥反應(yīng)中SAA這種急性反應(yīng)物的濃度會 比正常時增加 1000倍。另一方面，SAA不僅能結(jié)合HDL，也能與低密度脂蛋白（LDL)片段結(jié)合 一項通過檢測血中SAA/LDL復(fù)合體的前瞻性研究發(fā)現(xiàn)，與傳統(tǒng)冠心病危險因素(載脂蛋白、 炎癥因子CRP、SAA)相比，SAA/LDL復(fù)合體水平的高低與穩(wěn)定性冠心病病人的預(yù)后獨立正相 關(guān)。作為炎性標(biāo)志物的CRP和SAA在急性冠脈綜合征(ACS)的診斷和危險分層中的作用亦為 許多研究所證實。有研究表明：ACS患者血漿CRP和SAA水平均明顯增高，且在起病后數(shù)日內(nèi) 呈顯著升高趨勢。
[0004] SAA目前常用檢測方法有:酶聯(lián)免疫法、透射比濁法和散射比濁法。在上述方法中， 酶聯(lián)免疫法具有酶催化的擴(kuò)大效應(yīng)，但定量不夠準(zhǔn)確，靈敏度較低;免疫散射比濁法須用特 制的特種蛋白儀、試劑成本高、測試速度慢。膠乳增強透射比濁法的儀器投資成本低、不需 要另配專用的特種蛋白儀、試劑開啟后穩(wěn)定成本低、校準(zhǔn)周期較長、患者的費用低，可與生 化樣本合并，可降低采血成本、測試速度快、結(jié)果穩(wěn)定、線性范圍廣、重復(fù)性好，適合進(jìn)行臨 床推廣應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明實施例的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，提供一種檢測血清淀粉樣蛋 白A含量的試劑盒，可以簡潔快速地檢測樣本中血清淀粉樣蛋白A的含量，具有較高的準(zhǔn)確 度和很好的特異性。
[0006] 本發(fā)明實施例的另一目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，提供一種上述的檢測血 清淀粉樣蛋白A含量的試劑盒的在檢測血清淀粉樣蛋白A含量中的用途，可用于簡潔快速地 檢測樣本中血清淀粉樣蛋白A的含量，具有較高的準(zhǔn)確度和很好的特異性。
[0007] 本發(fā)明實施例的再一目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，提供一種采用上述的檢 測血清淀粉樣蛋白A含量的試劑盒檢測血清淀粉樣蛋白A含量的方法，可以簡潔快速地檢測 樣本中血清淀粉樣蛋白A的含量，具有較高的準(zhǔn)確度和很好的特異性。
[0008] 為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明實施例的技術(shù)方案如下：
[0009] -種檢測血清淀粉樣蛋白A含量的試劑盒，包括:試劑R1、試劑R2和血清淀粉樣蛋 白A校準(zhǔn)品；所述試劑R1包括:第一緩沖液10~500mmol/L、第一電解質(zhì)5~50g/L、表面活性 劑0.5~50g/L、第一穩(wěn)定劑0.5~10g/L、高分子促進(jìn)劑1~100g/L和第一防腐劑1~10g/L; 所述試劑R2包括:第二緩沖液10~500mmol/L、抗人血清淀粉樣蛋白A抗體包被膠乳顆粒5~ 50%*八、第二電解質(zhì)5~5(^/1^、第二穩(wěn)定劑0.5~1(^/1^和第二防腐劑1~1(^/1^所述血清 淀粉樣蛋白A校準(zhǔn)品包括:第三緩沖液10~500mmol/L、第三穩(wěn)定劑5~50g/L、第三防腐劑1 ~10g/L、抗氧化劑0.01~10g/L和血清淀粉樣蛋白A抗原。
[0010] 進(jìn)一步，所述抗人血清淀粉樣蛋白A抗體包被膠乳顆粒的制備過程如下:在交聯(lián)緩 沖液中，通過化學(xué)交聯(lián)劑將抗人血清淀粉樣蛋白A多克隆抗體包被到膠乳顆粒的表面。 [0011]進(jìn)一步:所述交聯(lián)緩沖液選自不含氨基的緩沖液、2-(N-嗎啡啉）乙磺酸MES緩沖 液、3-嗎啉-2-羥基丙磺酸M0PS0緩沖液、3-( N-嗎啉)丙磺酸MOPS緩沖液、4-羥乙基哌嗪乙磺 酸HEPES緩沖液或者磷酸緩沖液，所述交聯(lián)緩沖液的pH值為6.0~8.0;所述化學(xué)交聯(lián)劑選自 碳化亞胺、N-羥基琥珀酰亞胺、N-羥基硫代琥珀酰亞胺、酰肼和異氰酸酯中的一種或幾種； 所述抗人血清淀粉樣蛋白A抗體選自鼠抗人、雞抗人、兔抗人、羊抗人或?？谷搜宓矸蹣?蛋白A抗體;所述膠乳顆粒為聚苯乙烯膠乳顆粒。
[0012] 進(jìn)一步：所述膠乳顆粒的濃度為0.5~5mg/mL，所述膠乳顆粒的直徑為100~ 300nm〇
[0013] 進(jìn)一步:所述膠乳顆粒的表面連有功能團(tuán)，所述功能團(tuán)選自羧基、氨基、羥基、酰肼 或氯甲基。
[0014] 進(jìn)一步:所述試劑R1的pH為6~9,所述試劑R2的pH為6~9。
[0015] 進(jìn)一步:所述第一緩沖液、所述第二緩沖液和所述第三緩沖液均選自醋酸鹽緩沖 液、氯化銨緩沖液、磷酸鹽緩沖液、三羥甲基氨基甲烷TRIS緩沖液、硼砂-氫氧化鈉緩沖液、 甘氨酸緩沖液、3-(N-嗎啉）丙磺酸MOPS緩沖液、3-(環(huán)己胺）-2-羥基-1-丙磺酸CAPS0緩沖 液、4-羥乙基哌嗪乙磺酸HEPES緩沖液中的一種或幾種；和/或，所述第一穩(wěn)定劑、所述第二 穩(wěn)定劑和所述第三穩(wěn)定劑均選自亞氨基二乙酸、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸鈉、乙二胺四乙酸 二鈉、二乙烯三胺五乙酸鈉、1，2_環(huán)己二醇縮水甘油、甘露糖、葡萄糖、殼聚糖、山梨醇和牛 血清蛋白中的一種或幾種;和/或，所述第一防腐劑、所述第二防腐劑和所述第三防腐劑均 選自疊氮鈉、苯酚、對羥基苯甲酸、對羥基苯甲酸乙酯和乙基汞硫代硫酸鈉中的一種或幾 種;和/或，所述第一電解質(zhì)和所述第二電解質(zhì)均選自氯化鈉、硫酸鎂、氯化鎂和氯化鉀中的 一種或幾種；和/或，所述表面活性劑選自Triton系列表面活性劑、Tween系列表面活性劑、 月桂醚、聚氧乙烯烷基苯基醚、聚氧乙烯壬基苯基醚和聚氧乙烯辛基苯醚中的一種或幾種； 和/或，所述高分子促進(jìn)劑選自脂肪醇聚氧乙烯醚、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸鈉、乙二醇聚 氧乙烯醚、羥丙基甲基纖維素和羥甲基纖維素鈉中的一種或幾種;和/或，所述抗氧化劑選 自丁基羥基茴香醚、沒食子酸丙酯、二丁基羥基甲苯、苯多酚、磷脂、甘草抗氧化物、硫代二 丙酸二月桂酯、特丁基對苯二酚和維生素系列中的一種或幾種。
[0016] 進(jìn)一步:所述第一緩沖液和所述第二緩沖液的成分相同。
[0017] -種如上所述的檢測血清淀粉樣蛋白A含量的試劑盒的在檢測血清淀粉樣蛋白A 含量中的用途。
[0018] 以及，一種采用如上所述的檢測血清淀粉樣蛋白A含量的試劑盒檢測血清淀粉樣 蛋白A含量的方法，其特征在于，包括:按待測樣品和所述試劑R1的體積比為1~10:250,向 所述待測樣品中加入所述試劑R1，得到第一混合液，并得到所述第一混合液的吸光度0D1; 按所述試劑R2與所述試劑R1體積比為1:1~7,向所述第一混合液中加入所述試劑R2,得到 第二混合液，并得到所述第二混合液的吸光度0D2;使用所述血清淀粉樣蛋白A校準(zhǔn)品得到 標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)所述吸光度0D1和所述吸光度0D2在所述標(biāo)準(zhǔn)曲線上得到所述待測樣品中血 清淀粉樣蛋白A的含量。
[0019] 本發(fā)明實施例的有益效果如下：
[0020] 1、本發(fā)明實施例的檢測血清淀粉樣蛋白A含量的試劑盒，使用簡便快速，可簡潔快 速地檢測樣本中血清淀粉樣蛋白A的含量。
[0021] 2、本發(fā)明實施例的檢測血清淀粉樣蛋白A含量的試劑盒，與進(jìn)口對比試劑實驗表 明，本發(fā)明的試劑盒中的試劑具有較高的準(zhǔn)確度和很好的特異性，能夠滿足臨床快速高通 量檢測樣本的要求，檢測效率明顯提高。
[0022] 3、本發(fā)明實施例的檢測血清淀粉樣蛋白A含量的試劑盒，使用了經(jīng)過篩選后的最 優(yōu)化的試劑組合，使得試劑的穩(wěn)定性大大提高，在2~8°C的環(huán)境下，可以穩(wěn)定存放一年以 上，因此在臨床應(yīng)用上具有廣闊的前景。
[0023] 4、本發(fā)明實施例的檢測血清淀粉樣蛋白A含量的試劑盒中的抗體原料可以自制， 降低了試劑成本，易于產(chǎn)業(yè)化。
[0024] 5、本發(fā)明實施例的檢測血清淀粉樣蛋白A含量的試劑盒，還具有靈敏度高，可自動 化檢測等特點。
[0025] 6、本發(fā)明實施例的檢測血清淀粉樣蛋白A含量的試劑盒使其具有檢測免疫球蛋白 E的用途。
[0026] 7、本發(fā)明實施例的采樣檢測血清淀粉樣蛋白A含量的試劑盒檢測血清淀粉樣蛋白 A含量的方法，簡潔快速地檢測樣本中血清淀粉樣蛋白A的含量，檢測效率較高，在臨床應(yīng)用 上具有廣闊的前景。
【附圖說明】
[0027] 圖1是本發(fā)明實施例的檢測血清淀粉樣蛋白A含量的方法的流程圖；
[0028] 圖2是本發(fā)明的實施例1的血清淀粉樣蛋白A含量的