两个人的电影免费视频_国产精品久久久久久久久成人_97视频在线观看播放_久久这里只有精品777_亚洲熟女少妇二三区_4438x8成人网亚洲av_内谢国产内射夫妻免费视频_人妻精品久久久久中国字幕

全液體型酶法結合膽紅素測定試劑盒的制作方法

文檔序號:5881446閱讀:394來源:國知局
專利名稱:全液體型酶法結合膽紅素測定試劑盒的制作方法
技術領域
本發(fā)明涉及一種體外診斷試劑,具體涉及全液體型酶法結合膽紅素測定試劑盒。
背景技術
人血清(漿)中的膽紅素包括游離膽紅素(UB)、結合膽紅素(CB)和δ-膽紅素(δB),統(tǒng)稱為總膽紅素。在肝膽分泌障礙的發(fā)生、發(fā)展和恢復過程中,血清CB濃度隨病程進展而迅速升降,血清CB測定因此成為監(jiān)測肝膽分泌功能的重要指標。以往常規(guī)測定血清膽紅素的方法,不能區(qū)分CB和δB。雖然高效液相層析可以分離CB、δB,但無法常規(guī)使用;干化學法嶄露了CB測定的應用前景,但還是因為方法的局限性而難以普及。因此長期來,臨床上一直以直接膽紅素(DB)作為反映CB水平的替代指標。從而在一定程度上出現(xiàn)了DB和CB概念的混淆。實際上DB中還包含了δB的極大部分。對于肝膽分泌功能障礙病人來說,血清中CB迅速升高,δB形成滯后;δB一旦形成后,在血液循環(huán)中的潴留時間又遠遠長于CB;當這些病人的肝膽分泌功能恢復后,血清中CB很快下降,δB下降卻相對緩慢。如果用DB代替CB進行臨床監(jiān)護,由于受到δB的干撫,在肝膽分泌障礙的發(fā)生、發(fā)展和恢復過程中,不能靈敏地反映出血清中真實CB水平的即時改變,不能對病程的進展及時作出判斷,降低了實驗室檢查對疾病診斷、監(jiān)護的及時性和敏感性。
在這種情況下,迫切需要創(chuàng)建一種能消除δB干擾、反映血清CB真實水平的常規(guī)測定方法,也由此成了眾多學者關注的熱點。目前用膽紅素氧化酶(BO)為工具酶的若干測定方法(酶法)已逐漸有報道,但尚無商品試劑盒可供使用。
本發(fā)明人曾于2003年研制了酶法結合膽紅素測定試劑盒,采用凍干技術,該技術是在臨用前加水復溶重組后再使用。

發(fā)明內容
本發(fā)明所要解決的問題在于保持凍干型酶法結合膽紅素測定的基本技術性能,解決試劑在液態(tài)條件下的穩(wěn)定性,制成全液體型酶法結合膽紅素測定試劑盒,省去制備凍干型試劑盒所需的昂貴的凍干設備,消除由于分裝凍干引入的瓶間誤差,簡化生產(chǎn)工藝流程,減少能源和人力消耗,免除須在臨用前加水復溶重組的步驟,提高試劑盒的實用性和可普及性。
本發(fā)明人根據(jù)下列原則對反應體系進行選擇1.提高液態(tài)條件下試劑的穩(wěn)定性,使全液體型酶法真實結合膽紅素測定試劑盒4℃保存的穩(wěn)定期達到一年;2.用濃度約為150μmol/L的CB校準品[用二牛磺酸膽紅素(DTB)配制]作樣品,在方法規(guī)定的反應條件下經(jīng)BO作用300秒,吸光度的下降值不小于最大下降值的90%,即在此條件下DTB的氧化率≥90%;3.使UB的干擾盡可能小。
本發(fā)明提供了一種全液體型酶法結合膽紅素測定試劑盒。該試劑盒包括試劑1和試劑2組成。
在試劑中的各組份及其濃度范圍如下試劑1(R1)[由試劑1a(R1a)和試劑1b(R1b)組成]R1a苯二鉀酸氫鉀(PHP) 50~200mmol/L乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-Na2) 0.05~0.2mmol/L對甲基苯磺酸(PTS) 10~100mmol/L氟化鈉(NaF)1~5mmol/L
N-乙酰半胱氨酸(NAC)0.5~5mmol/LR1b抗壞血酸氧化酶(ASOD) 20~1000kU/L甘油 10~50%(V/V)或乙二醇 10~40%(V/V)試劑2(R2)膽紅素氧化酶(BO) 0.5kU~20kU/L甘油 10~50%(V/V)或乙二醇 10~40%(V/V)用本發(fā)明的全液體型酶法結合膽紅素測定試劑盒能通過下列方法測定CB(結合膽紅素)溫度 37℃光徑1cm 波長450nm或460nm樣品 132μl R13000μl R2300μl水校零 吸光度變化方向下降樣品(校準管以校準品作樣品)加R1孵育300秒,加R2再孵育300秒(也可在60~300秒之間選擇);加R2前讀取吸光度記為A1,加R2后在達到選定的再孵育時間時讀取吸光度記為A2計算CB(μmol/L)=[(測定A1-測定A2)/(校準A1-校準A2)]×校準品濃度本發(fā)明的試劑盒具有下列特點1.研制成功了以BO作工具酶的液體型酶法結合膽紅素測定試劑盒;通過熱穩(wěn)定性試驗,經(jīng)Arrhenius公式計算,本試劑盒4℃保存的穩(wěn)定期達一年以上;2.用146.04μmol/L的CB校準品作樣品,37℃與R1作用300秒,加R2再孵育300秒時吸光度的下降值達最大下降值的95%以上,即DTB的氧化率已達到≥90%的預期效果;3.消除了δB對結果的干擾;UB對結果的干擾<5%~<10%;對溶血、脂濁以及樣品中抗壞血酸具有較好的抗干擾能力。
4.最低檢測限0.07μmol/L批內精密度CV=1.23%(x=146.04μmol/L;s=1.80;n=10)天間精密度CV=4.45%(x=146.04μmol/L;s=6.50;n=8)線性范圍 0~342μmol/L參考范圍 0~3.42mol/L;5.比較試驗本試劑盒測定結果與Doumas報道的CB測定法的結果進行比較,兩者顯著相關r=0.987;y=0.985X+3.1y為本試劑盒測定結果,x為Doumas法結果,均以μmol/L計算。
6.本試劑盒可用于有恒溫裝置的分光光度計和自動生化分析儀,或類似儀器。
7、本試劑盒筒化了生產(chǎn)工藝流程,降低了成本,并免除了在臨用前加水復溶重組的步驟,提高試劑盒的實用性和普及性。
七.實施例例一試劑1(R1)[臨用前由R1a∶R1b以100∶1混合組成]R1a苯二鉀酸氫鉀(PHP) 80mmol/L乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-Na2) 0.1mmol/L對甲基苯磺酸(PTS) 20mmol/L
氟化鈉(NaF) 1.5mmol/LN-乙酰半胱氨酸(NAC) 3.5mmol/LR1b抗壞血酸氧化酶(ASOD)1000kU/L甘油500ml/L(V/V)試劑2(R2)膽紅素氧化酶(BO)5kU/L甘油500ml/L(V/V)例二試劑1(R1)[臨用前由R1a∶R1b以20∶1混合組成]R1a苯二鉀酸氫鉀(PHP) 80mmol/L乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-Na2) 0.1mmol/L對甲基苯磺酸(PTS) 20mmol/L氟化鈉(NaF) 1.5mmol/LN-乙酰半胱氨酸(NAC) 3.5mmol/LR1b抗壞血酸氧化酶(ASOD)40kU/L乙二醇 200ml/L試劑2(R2)膽紅素氧化酶(BO)10kU/L乙二醇 200ml/L
例三試劑1(R1)[臨用前由R1a∶R1b以100∶1混合組成]R1a苯二鉀酸氫鉀(PHP) 120mmol/L乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-Na2)0.15mmol/L對甲基苯磺酸(PTS) 100mmol/L氟化鈉(NaF)3mmol/LN-乙酰半胱氨酸(NAC)2mmol/LR1b抗壞血酸氧化酶(ASOD) 500kU/L甘油 400ml/L試劑2(R2)膽紅素氧化酶(BO) 12kU/L甘油 400ml/L例四試劑1(R1)[臨用前由R1a∶R1b以20∶1混合組成]R1a苯二鉀酸氫鉀(PHP) 120mmol/L乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-Na2)0.15mmol/L對甲基苯磺酸(PTS) 50mmol/L氟化鈉(NaF)3mmol/LN-乙酰半胱氨酸(NAC)2mmol/L
R1b抗壞血酸氧化酶(ASOD) 40kU/L乙二醇 300ml/L試劑2(R2)膽紅素氧化酶(BO) 10kU/L乙二醇 300ml/L
權利要求
1.一種全液體型酶法結合膽紅素測定試劑盒,其特征在于該試劑盒由試劑1和試劑2組成,它們的各組份和濃度為試劑1由試劑1a和試劑1b組成試劑1a苯二鉀酸氫鉀 50~200mmol/L乙二胺四乙酸二鈉 0.05~0.2mmol/L對甲基苯磺酸 10~100mmol/L氟化鈉 1~5mmol/LN-乙酰半胱氨酸0.5~5mmol/L試劑1b抗壞血酸氧化酶20~1000kU/L甘油 10~50%(V/V)或 乙二醇 10~40%(V/V)試劑2膽紅素氧化酶 0.5kU~20kU/L甘油 10~50%(V/V)或 乙二醇 10~40%(V/V)。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種全液體型酶法結合膽紅素測定試劑盒,其特征在于試劑盒中所述的試劑1由試劑1a和試劑1b混合而組成的,它們的混合配比為20~100∶1。
3.根據(jù)權利要求2所述由試劑1a和試劑1b混合而組成的試劑1,其特征在于其中所述試劑1a和試劑1b的混合是在測定臨用前進行的。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種體外診斷試劑。它是一種全液體型酶法結合膽紅素測定試劑盒。消除了δ B對結果的干擾。該試劑盒由試劑1(R
文檔編號G01N33/72GK1687786SQ20051002555
公開日2005年10月26日 申請日期2005年4月29日 優(yōu)先權日2005年4月29日
發(fā)明者張抗 申請人:張抗
網(wǎng)友詢問留言 已有0條留言
  • 還沒有人留言評論。精彩留言會獲得點贊!
1
长垣县| 株洲市| 长子县| 惠安县| 二连浩特市| 泸定县| 安乡县| 淮阳县| 中方县| 汕头市| 绍兴县| 正镶白旗| 固镇县| 隆化县| 原平市| 天津市| 报价| 卢龙县| 顺义区| 高雄市| 杂多县| 元谋县| 武陟县| 博客| 扎兰屯市| 读书| 县级市| 光山县| 双流县| 育儿| 荣昌县| 北票市| 西畴县| 宽甸| 卢氏县| 镇原县| 修武县| 昌吉市| 富阳市| 湾仔区| 中西区|