一種α-淀粉酶檢測(cè)試劑及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種a-淀粉酶檢測(cè)試劑及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] a-淀粉酶學(xué)名為1，4_a-D-匍聚糖_4_匍聚糖水解酶，是由唾液腺和膜腺內(nèi)具有 分泌功能的上皮細(xì)胞合成的酶。a-淀粉酶是檢測(cè)急性胰腺炎的一個(gè)重要的生化標(biāo)志物。 因此，測(cè)定a-淀粉酶的濃度具有重要的臨床意義。
[0003] 據(jù)統(tǒng)計(jì)，a_淀粉酶的測(cè)定方法大概有200多種，主要分為粘度測(cè)定法、碘量法、比 濁法、糖化法、染料釋放法和熒光法等六大類(lèi)測(cè)定方法。隨著對(duì)a-淀粉酶測(cè)定方法不斷地 深入研究，出現(xiàn)了許多新的測(cè)定方法。目前，應(yīng)用最為方法的是亞乙基-4-NP-麥芽庚糖苷 (EPS)法或直接測(cè)定法。由于亞乙基-4-NP-麥芽庚糖苷（EPS)法存在試劑工作液穩(wěn)定性較 差，需要a-葡萄糖苷酶工具酶的缺點(diǎn)而逐漸被具有不需要添加工具酶，延遲時(shí)間短，試劑 穩(wěn)定的直接測(cè)定法所取代。
[0004] 中國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)201310103140. 7公開(kāi)了一種穩(wěn)定的a-淀粉酶檢測(cè)試劑及應(yīng)用，所 述a-淀粉酶檢測(cè)試劑包括體積比為4:1的緩沖液和底物液，所述緩沖液由MES緩沖液、 NaCl、CaCl2、十二烷基苯磺酸鈉和防腐劑NaN3按一定配比配制而成；所述底物液由MES 緩沖液、2-氯-4-硝基苯-麥芽糖苷（Gal-G2-CNP)、十二烷基苯磺酸鈉和防腐劑NaN3按 一定配比配制而成。該a-淀粉酶檢測(cè)試劑使用2-氯-4-硝基苯-麥芽糖苷作為底物不 需要加工具酶，同時(shí)用半乳糖修飾麥芽寡糖苷的非還原端殘基，阻止底物的非特異性水解， 可以顯著提高底物的穩(wěn)定性，從而避免可內(nèi)源性葡萄糖苷酶影響檢測(cè)結(jié)果；但是，試劑中的 NaN3對(duì)a-淀粉酶有異構(gòu)作用，在測(cè)定過(guò)程中會(huì)引起a-淀粉酶的變構(gòu)，導(dǎo)致a-淀粉酶的 測(cè)定存在較大的誤差，測(cè)定結(jié)果重復(fù)性較差，從而影響急性胰腺炎診斷的準(zhǔn)確性。
[0005] 因此，研究發(fā)開(kāi)出一種不需要加入工具酶，延遲時(shí)間短，試劑穩(wěn)定，測(cè)定結(jié)果誤差 小，重復(fù)性好的a-淀粉酶檢測(cè)試劑是目前亟需解決的難題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 為了克服現(xiàn)有技術(shù)a_淀粉酶檢測(cè)試劑存在測(cè)定結(jié)果誤差較大，測(cè)定結(jié)果重復(fù)性 差的缺點(diǎn)，本發(fā)明的目的是提供一種a-淀粉酶檢測(cè)試劑及其應(yīng)用，以解決上述的問(wèn)題。
[0007] 本發(fā)明提供的一種a_淀粉酶檢測(cè)試劑，該試劑包括試劑R1和試劑R2,所述試劑 R1包括以下組分： MES緩沖液 40-100mmol/L、NH4C1 80-160mmol/L、CaCl2 5-30mmol/L、表面活性齊IJ2-12g/L和防腐劑 2-8g/L; 所述試劑R2包括以下組分： MES緩沖液40-100mmol/L、2-氯-4-硝基苯-麥芽三糖10-80mmol/L和防腐劑2-8g/L〇
[0008] 優(yōu)選地，本發(fā)明提供的a-淀粉酶檢測(cè)試劑包括試劑R1和試劑R2,所述試劑R1包 括以下組分： MES緩沖液 80mmol/L、NH4Cl120mmol/L、CaCl2 10mm〇l/L、表面活性劑 5g/L和防腐劑 6g/L； 所述試劑R2包括以下組分： MES緩沖液80mmol/L、2-氯-4-硝基苯-麥芽三糖30mmol/L和防腐劑5g/L。
[0009]進(jìn)一步地，本發(fā)明提供的MES緩沖液的pH值為5. 5-6. 5，MES緩沖液的pH值優(yōu)選 為 6.0。
[0010] 進(jìn)一步地，本發(fā)明提供的表面活性劑為聚乙二醇。聚乙二醇是一種無(wú)毒、無(wú)刺激 性，具有良好的水溶性的表面活性劑，可以增加試劑的穩(wěn)定性。
[0011] 進(jìn)一步地，本發(fā)明提供的防腐劑為對(duì)羥基苯甲酸酯。由于對(duì)羥基苯甲酸酯具有酚 羥基結(jié)構(gòu)，具有顯著的抗菌作用，可以有效的延長(zhǎng)產(chǎn)品保質(zhì)期。
[0012] 本發(fā)明提供的MES緩沖液是2-嗎啉乙磺酸（MES)緩沖液，2-嗎啉乙磺酸的分子式 為C6H13N04S，CAS號(hào)為 4432-31-9。
[0013] 本發(fā)明提供的a_淀粉酶檢測(cè)試劑不含有疊氮化鈉，在測(cè)定過(guò)程中不會(huì)導(dǎo)致 a_淀粉酶的變構(gòu)，可以減少測(cè)定結(jié)果的誤差；而且本發(fā)明提供的a_淀粉酶檢測(cè)試劑具 有試劑穩(wěn)定，不需要添加工具酶和延遲時(shí)間短的優(yōu)點(diǎn)，是一種操作簡(jiǎn)單，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確的 a_淀粉酶檢測(cè)試劑，有利于臨床的應(yīng)用。
[0014] 經(jīng)試驗(yàn)證明，本發(fā)明提供的a_淀粉酶檢測(cè)試劑的具有測(cè)定結(jié)果重復(fù)性好，穩(wěn)定 性好的優(yōu)點(diǎn)，是一種理想的測(cè)定a-淀粉酶濃度的檢測(cè)試劑。
[0015] 另外，本發(fā)明還提供了一種a_淀粉酶檢測(cè)試劑的檢測(cè)方法，包括以下步驟：將配 制好的試劑R1和試劑R2放置到全自動(dòng)生化分析儀對(duì)應(yīng)的試劑位上，在樣品盤(pán)的對(duì)應(yīng)位置 放置空白對(duì)照品、標(biāo)準(zhǔn)品和樣品，通過(guò)對(duì)照品和標(biāo)準(zhǔn)品獲得標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)的吸光度變化，再根 據(jù)全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定的樣品的吸光度，經(jīng)計(jì)算得到樣品的a_淀粉酶濃度。
[0016] 進(jìn)一步地，所述全自動(dòng)生化分析儀的溫度為35-40°C。
[0017] 進(jìn)一步地，所述全自動(dòng)生化分析儀的延遲時(shí)間是30-60S，讀數(shù)時(shí)間為120-150S。
[0018] 更進(jìn)一步地，所述全自動(dòng)生化分析儀的檢測(cè)波長(zhǎng)分別為主波長(zhǎng)405nm，副波長(zhǎng) 505nm〇
[0019] 本發(fā)明提供的a_淀粉酶檢測(cè)試劑的檢測(cè)原理是：以2_氯_4_硝基苯-麥芽二糖 作為a-淀粉酶的底物，a-淀粉酶水解2-氯-4-硝基苯-麥芽三糖的麥芽糖末端分子， 直接產(chǎn)生一種黃色顏料指示劑，在405nm處測(cè)定其吸光度的增加與樣品中a-淀粉酶濃度 成正比。
[0020] 總之，本發(fā)明提供的a-淀粉酶檢測(cè)試劑，與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)勢(shì)： 1) 本發(fā)明提供的a-淀粉酶檢測(cè)試劑不含有疊氮化鈉，在測(cè)定過(guò)程中不會(huì)導(dǎo)致a-淀 粉酶的變構(gòu)，可以減少測(cè)定結(jié)果的誤差； 2) 本發(fā)明提供的a_淀粉酶檢測(cè)試劑具有試劑穩(wěn)定，不需要添加工具酶和延遲時(shí)間短 的優(yōu)點(diǎn)； 3) 本發(fā)明提供的a_淀粉酶檢測(cè)試劑檢測(cè)結(jié)果重復(fù)性好，穩(wěn)定性好，是一種理想的測(cè) 定a-淀粉酶濃度的檢測(cè)試劑，有利于該a-淀粉酶檢測(cè)試劑的臨床應(yīng)用。
【附圖說(shuō)明】
[0021] 圖1為實(shí)施例2-試劑與GmbH公司-試劑的線(xiàn)性相關(guān)圖。
【具體實(shí)施方式】
[0022] 以下通過(guò)具體實(shí)施例進(jìn)一步描述本發(fā)明，本發(fā)明不僅僅限于以下實(shí)施例。在本發(fā) 明的范圍內(nèi)或者在不脫離本發(fā)明的內(nèi)容、精神和范圍內(nèi)，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行的變更、組合或替 換，對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是顯而易見(jiàn)的，且包含在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
[0023] 實(shí)施例1、a-淀粉酶檢測(cè)試劑 a_淀粉酶檢測(cè)試劑包括試劑R1和試劑R2,所述試劑R1包括以下組分：pH值為 5. 5 的MES緩沖液 40mmol/L、NH4C1 80mmol/L、CaCl2 5mmol/L、聚乙二醇 3g/ L、對(duì)羥基苯甲酸酯2g/L; 所述試劑R2包括以下組分： pH值為5. 5的MES緩沖液40mmol/L、2-氯-4-硝基苯-麥芽三糖10mmol/L、對(duì)羥基 苯甲酸酯2g/L。
[0024] 實(shí)施例2、a-淀粉酶檢測(cè)