Berlin, Germany。 可選地，也可通過(guò)合成或重組P-NT 1-117或其片段來(lái)校準(zhǔn)測(cè)定（同樣參見(jiàn)Ernst et al, 2006)〇
[0137] 可用于確定神經(jīng)降壓素原或其片段水平的結(jié)合劑顯示對(duì)神經(jīng)降壓素原或其片 段的親和常數(shù)為至少l〇 7M'優(yōu)選108M'優(yōu)選親和常數(shù)大于10，1;最優(yōu)選大于10、' 本領(lǐng)域技術(shù)人員知道，可以考慮通過(guò)應(yīng)用較高劑量的化合物來(lái)補(bǔ)償較低的親和力，并且 這一措施不會(huì)導(dǎo)致超出本發(fā)明的范圍?？墒褂肂iacore法確定結(jié)合親和力，其在例如 Biaffin, Kassel, Germany (http://www. biaffin. com/de/)提供服務(wù)分析，同樣參見(jiàn)上文。
[0138] 根據(jù)本發(fā)明的方法，用于確定受試者患癌癥的風(fēng)險(xiǎn)或者診斷受試者癌癥（特別是 女性受試者的乳腺癌）的閾值為約78pmol/l PNT或78pmol/l PNT以上，優(yōu)選約lOOpmol/ 1或100pmol/l以上，更優(yōu)選約150pmol/l或150pmol/l以上。在具體的實(shí)施方案中，所述 閾值為約l〇〇pmol/l或100pmol/l以上。這些閾值與下文所述的校準(zhǔn)方法相關(guān)。PNT值大 于所述閾值意味著所述受試者具有患癌癥的風(fēng)險(xiǎn)增加或者已患有癌癥。
[0139] 除了確定獲自所述受試者的體液中包含物質(zhì)P和神經(jīng)激肽的PTA、其剪接變體 或其至少5個(gè)氨基酸的片段的水平；和/或確定獲自所述受試者的體液中神經(jīng)降壓素原 (PNT)或其至少5個(gè)氨基酸的片段的水平；還可以測(cè)量獲自所述受試者的體液中腦啡肽原 (PENK)或其至少5個(gè)氨基酸的片段。必須理解，除了確定PTA、其剪接變體或其至少5個(gè)氨 基酸的片段的水平外，還可測(cè)量獲自所述受試者的體液中腦啡肽原（PENK)或其至少5個(gè)氨 基酸的片段。這意味著測(cè)量單獨(dú)的PTA或者與PENK或PNT組合的水平，或者組合確定PTA 和PNT和PENK并與所述風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)聯(lián)。
[0140] 根據(jù)本發(fā)明方法的更具體的實(shí)施方案中，除了確定神經(jīng)降壓素原1-117的水平， 以及確定PTA、其剪接變體或其片段外，還確定了腦啡肽原（PENK)或其至少5個(gè)氨基酸的水 平。
[0141] 因此，本發(fā)明的主題還有用于預(yù)測(cè)未患癌癥的受試者患癌癥的風(fēng)險(xiǎn)或者診斷受試 者癌癥的方法，其包括：
[0142] 確定獲自所述受試者的體液中包含物質(zhì)P和神經(jīng)激肽的PTA、其剪接變體或其 至少5個(gè)氨基酸的片段的水平；以及
[0143] 確定獲自所述受試者的體液中神經(jīng)降壓素原或其至少5個(gè)氨基酸的片段的水 平；和/或
[0144] 確定獲自所述受試者的體液中腦啡肽原或其至少5個(gè)氨基酸的片段的水平；以 及
[0145] 將所述PTA、其剪接變體或其片段的水平以及神經(jīng)降壓素原或其至少5個(gè)氨基 酸的片段和/或腦啡肽原或其至少5個(gè)氨基酸的片段的水平與患癌癥的風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)聯(lián)，
[0146] 其中PTA、其剪接變體或其片段水平降低預(yù)示患癌癥的風(fēng)險(xiǎn)增加，或者診斷癌癥， 其中PTA、其剪接變體或其片段水平降低與癌癥的診斷相關(guān)聯(lián)，并且其中神經(jīng)降壓素原及其 片段水平增加預(yù)示患癌癥的風(fēng)險(xiǎn)增加，或者診斷癌癥，其中神經(jīng)降壓素原及其片段水平增 加與癌癥診斷相關(guān)，其中腦啡肽原或其片段水平降低預(yù)示患癌癥的風(fēng)險(xiǎn)增加，或者診斷癌 癥，其中腦啡肽原或其片段水平降低與癌癥診斷相關(guān)。
[0147] 特別地，所述受試者可為女性，并且所述癌癥為乳腺癌。上述生物標(biāo)志物及生物標(biāo) 志物組合與女性乳腺癌發(fā)生之間的關(guān)聯(lián)特別顯著，且為所有根據(jù)本發(fā)明方法的具體實(shí)施方 案。
[0148] 腦啡肽原和片段可具有以下序列：
[0149] SEQ ID N0. 23 (腦啡肽原（1-243)
[0150] ECSQDCATCSYRLVRPADINFLACVMECEGKLPSLKIWETCKELLQLSKPELPQDGTSTLRENSKPEES HLLAKRYGGFMKRYGGFMKKMDELYPMEPEEEANGSEILAKRYGGFMKKDAEEDDSLANSSDLLKELLETCDNRERS HHQDGSDNEEEVSKRYGGFMRGLKRSPQLEDEAKELQKRYGGFMRRVGRPEWWMDYQKRYGGFLKRFAEALPSDEEG ESYSKEVPEMEKRYGGF MRF
[0151] 可在體液中確定的腦啡肽原片段可以，例如選自以下片段：
[0152] SEQIDN0. 24 (合成-腦啡肽，腦啡肽原1-73)
[0153] ECSQDCATCSYRLVRPADENFLACVMECEGKLPSLKIWETCKELLQLSKPELPQDGTSTLRENSKPEES HLLA
[0154] SEQ ID N0. 25 (Met-腦啡肽）
[0155] YGGFM
[0156] SEQ ID NO. 26 (Leu-腦啡肽）
[0157] YGGFL
[0158] SEQ ID NO. 27 (腦啡肽原 90-109)
[0159] MDELYPMEPEEEANGSEILA
[0160] SEQ ID NO. 28 (腦啡肽原119-159,中間區(qū)域的腦啡肽原-片段，MRPENK)
[0161] DAEEDDSLANSSDLLKELLETCDNRERSHHQDGSDNEEEVS
[0162] SEQ ID NO. 29 (Met-腦啡肽-Arg-Gly-Leu)
[0163] YGGFMRGL
[0164] SEQ ID NO. 30 (腦啡肽原 172-183)
[0165] SPQLEDEAKELQ
[0166] SEQ ID NO. 9 (腦啡肽原 193-203)
[0167] VGRPEWWMDYQ
[0168] SEQ ID NO. 31 (腦啡肽原 213-234)
[0169] FAEALPSDEEGESYSKEVPEME
[0170] SEQ ID NO. 32 (腦啡肽原 213-241)
[0171] FAEALPSDEEGESYSKEVPEMEKRYGGFM
[0172] SEQ ID NO. 33 (Met-腦啡肽-Arg-Phe)
[0173] YGGFMRF
[0174] 確定包含Leu-腦啡肽和Met-腦啡肽的腦啡肽原或其片段的水平可意指確定針對(duì) 包含Leu-腦啡肽和Met-腦啡肽的腦啡肽原或其片段的免疫反應(yīng)性。用于確定依賴(lài)于結(jié)合 區(qū)的包含Leu-腦啡肽和Met-腦啡肽的腦啡肽原或其片段的結(jié)合劑可與多于一種如上所示 的分子相結(jié)合。這對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見(jiàn)的。
[0175] 根據(jù)本發(fā)明方法的更具體的實(shí)施方案中，確定了 MRPENK(SEQ ID N0. 28:(腦啡肽 原119-159，中間區(qū)域的腦啡肽原片段，MRPENK)的水平，其為DAEEDDSLANSSDLLKELLETCDN RERSHHQDGSDNEEEVS。
[0176] 在具體實(shí)施方案中，利用免疫測(cè)定法，使用與腦啡肽原或其片段相結(jié)合的抗體或 抗體片段測(cè)量了腦啡肽原或其片段的水平?？捎糜诖_定腦啡肽原或其至少5個(gè)氨基酸的片 段水平的免疫測(cè)定法可包括實(shí)施例4中所示的步驟。所有閾值和值必須根據(jù)實(shí)施例4使用 的測(cè)試和校準(zhǔn)來(lái)理解。本領(lǐng)域技術(shù)人員知道，閾值的絕對(duì)值可受所用的校準(zhǔn)影響。這意味 著本文給出的所有值和閾值應(yīng)在本文使用的校準(zhǔn)背景下理解（實(shí)施例4)。
[0177] 根據(jù)本發(fā)明，腦啡肽原（和/或神經(jīng)降壓素原及其片段）的診斷結(jié)合劑選自：抗 體，如IgG( -種典型的全長(zhǎng)免疫球蛋白），或包含重鏈和/或輕鏈的至少F-可變域的抗體 片段，如化學(xué)偶聯(lián)的抗體（抗原結(jié)合片段），包括但不限于Fab-片段，包括Fab小體、單鏈 Fab抗體、具表位標(biāo)記的單價(jià)Fab抗體，例如Fab_V5Sx2;以CH3結(jié)構(gòu)域二聚化的二價(jià)Fab (小 抗體）；二價(jià)Fab或多價(jià)Fab，例如通過(guò)在異源結(jié)構(gòu)域的幫助下多聚化而形成的，如經(jīng)dHLX 結(jié)構(gòu)域的二聚化，例如Fab-dHLX-FSx2 ;F (ab'）2-片段、scFv-片段、多聚化的多價(jià)或/和多 特異性scFv-片段、二價(jià)和/或雙特異性雙體抗體、BITE? (雙特異性T-細(xì)胞連接物）、 三功能抗體、多價(jià)抗體，例如，來(lái)自不同于G的類(lèi)別；單結(jié)構(gòu)域抗體，如來(lái)源于駱駝或魚(yú)免疫 球蛋白的納米抗體。
[0178] 在具體實(shí)施方案中，利用使用選自以下更詳細(xì)描述的與腦啡肽原或其片段相結(jié)合 的適體、非_Ig支架的結(jié)合劑的測(cè)定法，測(cè)量了腦啡肽原或其片段（和/或神經(jīng)降壓素及其 片段）的水平。
[0179] 可用于確定腦啡肽原或其片段（和/或神經(jīng)降壓素原及其片段）水平的結(jié)合劑 顯示與腦啡肽原（和/或神經(jīng)降壓素原及其片段）的親和常數(shù)為至少10 7M'優(yōu)選108M' 優(yōu)選親和常數(shù)大于109m'最優(yōu)選大于kTm'本領(lǐng)域技術(shù)人員知道，可以考慮通過(guò)應(yīng)用 較高劑量的化合物來(lái)補(bǔ)償較低的親和力，并且這一措施不會(huì)導(dǎo)致超出本發(fā)明的范圍?？墒?用 Biacore 法確定結(jié)合親和力，其在例如 Biaffin, Kassel, Germany (http: //www. biaffin. com/de/)提供服務(wù)分析，參見(jiàn)上文。
[0180]人腦啡肽原對(duì)照人樣品可獲自 ICI-Diagnostics, Berlin, Germany http://www. ici-diagnostics. com/。該測(cè)定法也可通過(guò)合成（在我們的實(shí)驗(yàn)中，我們使用了合成的 MRPENK，SEQ ID N0. 28)或重組腦啡肽原或其片段來(lái)進(jìn)行校準(zhǔn)。
[0181] 根據(jù)本發(fā)明的方法，用于確定受試者患癌癥的風(fēng)險(xiǎn)（特別是乳腺癌癥風(fēng)險(xiǎn)）或者 診斷受試者癌癥（特別是乳腺癌）的腦啡肽原（PENK)閾值為約100pm 〇l/l或lOOpmol/ 1以下，優(yōu)選約75pmol/L或75pmol/L以下，優(yōu)選約50pmol/L或50pmol/L以下，優(yōu)選約 40. 4pmol/L。在具體的實(shí)施方案中，所述閾值為約40. 4pmol/l。這些閾值與下文所述的校 準(zhǔn)方法相關(guān)。PENK值在所述閾值以下意味著所述受試者具有增加的患癌風(fēng)險(xiǎn)或者已患有癌 癥。
[0182] 在本發(fā)明的一實(shí)施方案中，實(shí)施所述方法多于一次，以監(jiān)測(cè)受試者患癌癥，特別是 女性受試者患乳腺癌的風(fēng)險(xiǎn)，或者監(jiān)測(cè)治療進(jìn)程。在一具體的實(shí)施方案中，進(jìn)行所述監(jiān)測(cè)是 為了評(píng)估所述受試者對(duì)采用預(yù)防性和/或治療性措施的反應(yīng)。
[0183] 在本發(fā)明的一實(shí)施方案中，使用所述方法是為了將所述受試者，特別是女性受試 者分級(jí)為風(fēng)險(xiǎn)組。
[0184] 根據(jù)任何前述實(shí)施方案，本發(fā)明的主題還有預(yù)測(cè)受試者患癌癥（特別是女性受試 者患乳腺癌）的風(fēng)險(xiǎn)，或者確定受試者（特別是女性受試者）具有患癌癥（特別是乳腺癌） 的風(fēng)險(xiǎn)增加的方法，其中可通過(guò)選自以下供選擇的方法，將獲自所述受試者的體液中速激 肽原、其剪接變體或其至少5個(gè)氨基酸的片段水平單獨(dú)或組合其他預(yù)測(cè)性的實(shí)驗(yàn)或臨床參 數(shù)用于預(yù)測(cè)受試者患癌癥的風(fēng)險(xiǎn)：
[0185] 在獲自"健康的"或"表面上健康的"受試者群體中的預(yù)定樣品總體中，比較所 述受試者的體液中速激肽原、其剪接變體或其至少5個(gè)氨基酸的片段水平的中值，
[0186] 在獲自"健康的"或"表面上健康的"受試者群體中的預(yù)定樣品總體中，比較所 述受試者的體液中速激肽原、其剪接變體或其至少5個(gè)氨基酸的片段的水平的四分位數(shù)，
[0187] 基于Cox比例風(fēng)險(xiǎn)分析或通過(guò)使用風(fēng)險(xiǎn)指數(shù)計(jì)算如NRI (凈重新分類(lèi)指數(shù)）或 IDI (綜合鑒別指數(shù)）進(jìn)行計(jì)算。
[0188] 在本發(fā)明一實(shí)施方案中，為了監(jiān)測(cè)受試者患癌癥，特別是女性受試者患乳腺癌的 風(fēng)險(xiǎn)，或者監(jiān)測(cè)治療進(jìn)程，實(shí)施所述方法多于一次。在一具體實(shí)施方案中，進(jìn)行所述監(jiān)測(cè)是 為了評(píng)估所述受試者對(duì)采用的預(yù)防性和/或治療性措施的反應(yīng)。
[0189] 在本發(fā)明的一實(shí)施方案中，使用所述方法是為了將所述受試者分級(jí)為風(fēng)險(xiǎn)組。
[0190] 在本發(fā)明的一實(shí)施方案中，所述癌癥選自乳腺癌和肺癌。
[0191] 圖片說(shuō)明
[0192] 圖1:示出了典型的PTA劑量/信號(hào)曲線(xiàn)。標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)PTA。
[0193] 圖2:Kaplan Meier圖，示出了女性乳腺癌診斷累積四分位數(shù)（Q) 1 (45. 6pmol/l 以下）、四分位數(shù)2 (45. 6-55. 3pmol/l)、四分位數(shù)3 (55. 4-65. 9pmol/l)、四分位數(shù) 4(65. 9pmol/l以上）。PTA降低指示長(zhǎng)期乳腺癌發(fā)展風(fēng)險(xiǎn)增加。因?yàn)榕懦巳魏卧诨€(xiàn)（采 血）當(dāng)天具有癌癥史的女性，PTA對(duì)于未來(lái)乳腺癌發(fā)展具有高度預(yù)測(cè)性?？傊瑏?lái)自Q1的 女性相比來(lái)自Q4的女性具有2. 1倍以上更高的發(fā)展乳腺癌的風(fēng)險(xiǎn)。
[0194] 圖3:示出了典型的PNT劑量/信號(hào)曲線(xiàn)。標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)PNT
[0195] 圖4:示出了典型的MR PENK劑量/信號(hào)曲線(xiàn)。標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)MR PENK
[0196] 圖5:示出了如表9中所定義的乳腺癌預(yù)測(cè)風(fēng)險(xiǎn)組的PTA與PNT的聯(lián)組合分析的 示例性實(shí)例。 實(shí)施例
[0197]實(shí)施例1PTA-免痔測(cè)宙
[0198]抗PTA抗體的開(kāi)發(fā)
[0199]用于免痔的肽/綴合物:
[0200] 合成了用于免疫的肽（JPT Technologies, Berl