五倍子藥材的雙重指紋圖譜質(zhì)量控制方法
【專利摘要】五倍子藥材的雙重指紋圖譜質(zhì)量控制方法，包括：步驟1、采用ICP-MS法測定每一來源的五倍子藥材的無機元素，得到ICP-MS分析數(shù)據(jù)，建立五倍子藥材無機元素的指紋圖譜；步驟2、采用HPLC法測定每一來源的五倍子藥材的有機成分，得到HPLC分析數(shù)據(jù)，建立五倍子藥材有機成分的色譜指紋圖譜；步驟3、所述步驟1中無機元素ICP-MS分析數(shù)據(jù)進行系統(tǒng)聚類分析；步驟4、所述步驟2中有機成分的HPLC分析數(shù)據(jù)進行系統(tǒng)聚類分析；步驟5、綜合分析所述五倍子藥材無機元素的指紋圖譜及聚類分析與所述五倍子藥材有機成分的色譜指紋圖譜及聚類分析，評價五倍子藥材的質(zhì)量。本發(fā)明可為全面控制五倍子藥材的質(zhì)量提供依據(jù)，有效避免單一分析評價五倍子藥材質(zhì)量的片面性。
【專利說明】五倍子藥材的雙重指紋圖譜質(zhì)量控制方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及中藥藥材的質(zhì)量控制方法，尤其涉及一種五倍子藥材的雙重指紋圖譜質(zhì)量控制方法。

【背景技術(shù)】
[0002]五倍子(Gallachinensis)為漆樹科植物鹽膚木(TPAw1S chinensis Mill.)、青麩1? {Rhus po tan in i i Maxim.)或紅麩楊(TPAw1S pun jabensis Stew.var.sinica (Diels)Rehd.et Wils.)葉上的蟲瘦，主要由五倍子蟲牙(ife7a/7Ai5.chinensis (Bell) Baker)寄生而形成，其化學(xué)成分有五倍子鞣質(zhì)、沒食子酸、脂肪、樹脂、蠟質(zhì)及無機鹽等。秋季采摘，置沸水中略煮或蒸至表面呈灰色，殺死蚜蟲，取出，干燥；按外形不同，分為“肚倍”和“角倍”。
[0003]中藥指紋圖譜指某種中藥材或中成藥中所共有的、具有特征性的某類或數(shù)類成分的色譜或光譜的圖譜。在現(xiàn)階段，中藥的有效成分絕大多數(shù)沒有明確的情況下，中藥指紋圖譜對于有效控制中藥材或中成藥的質(zhì)量具有重要的意義。
[0004]中藥作用的物質(zhì)基礎(chǔ)主要包括兩部分，一是有機成分，二是無機元素。無機元素是指存在于人、植物和動物機體中含量極低的，除碳、氫、氧和氮主要以有機化合物形式存在夕卜，其余的元素的總稱，統(tǒng)稱為無機鹽(礦物質(zhì)或灰分)。雖然無機元素的含量極低，但在有機體內(nèi)的生命過程中起著特別重要的作用。有機成分和無機元素在人體內(nèi)起著互相協(xié)調(diào)、互相制約的作用，并參與體內(nèi)各種生化反應(yīng)，促進機體的自身調(diào)節(jié)，趨于新的陰陽平衡，從而達(dá)到治療的目的。
[0005]目前，廣大學(xué)者對五倍子的研究主要集中于其有機成分，對其無機元素的研究較少，且單一的從有機成分角度或者無機元素角度評價五倍子藥材的質(zhì)量，這使得五倍子藥材的質(zhì)量控制并不全面。因此，為了給五倍子藥材的深入研究提供依據(jù)，解決五倍子藥材質(zhì)量控制不全面的問題，對五倍子藥材質(zhì)量的全面控制方法有待于開發(fā)建立。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]針對上述問題，本發(fā)明提供一種五倍子藥材的雙重指紋圖譜質(zhì)量控制方法，可為全面控制五倍子藥材的質(zhì)量提供依據(jù)，有效避免了單一分析評價五倍子藥材質(zhì)量的片面性。
[0007]為實現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案，具體步驟為。
[0008]步驟1、米用 ICP-MS法(Inductively coupled plasma mass spectrometry,電感耦合等離子體質(zhì)譜)測定每一來源的五倍子藥材的無機元素，得到ICP-MS分析數(shù)據(jù)，建立五倍子藥材無機元素的指紋圖譜。
[0009]步驟2、米用 HPLC 法(High Performance Liquid Chromatography,高效液相色譜法)測定每一來源的五倍子藥材的有機成分，得到HPLC分析數(shù)據(jù)，建立五倍子藥材有機成分的色譜指紋圖譜。
[0010]步驟3、所述步驟I中五倍子藥材無機元素的ICP-MS分析數(shù)據(jù)進行系統(tǒng)聚類分析。
[0011]步驟4、所述步驟2中五倍子藥材有機成分的HPLC分析數(shù)據(jù)進行系統(tǒng)聚類分析。
[0012]步驟5、綜合分析所述五倍子藥材無機元素的指紋圖譜及聚類分析與所述五倍子藥材有機成分的色譜指紋圖譜及聚類分析，評價五倍子藥材的質(zhì)量。
[0013]所述步驟I包括。
[0014](I)樣品預(yù)備:將每一來源的五倍子藥材敲開，去除內(nèi)部蟲卵后，充分粉碎，過80目篩，備用。
[0015](2)微波消解。
[0016]①、取每一來源的五倍子藥材粉末樣品0.2g，精密稱定(精確至0.0OOOlg)，放入微波消解儀中。
[0017]②、按照每Ig五倍子藥材樣品中加入20_40mL濃硝酸的比例，進行樣品消化。
[0018]③、采用壓力主控的微波消解方法，確定微波消解條件如下。

【權(quán)利要求】
1.五倍子藥材的雙重指紋圖譜質(zhì)量控制方法，包括: 步驟1、采用ICP-MS法測定每一來源的五倍子藥材的無機元素，建立五倍子藥材無機元素的指紋圖譜，具體步驟為: .(1)樣品預(yù)備:將每一來源的五倍子藥材敲開，去除內(nèi)部蟲卵后，充分粉碎，過80目篩，備用; .(2)微波消解: .①、取每一來源的五倍子藥材粉末樣品0.2g，精確至0.0OOOlg，放入微波消解儀中； .②、按照每Ig五倍子藥材樣品中加入20-40濃硝酸的比例，進行樣品消化； .③、采用壓力主控的微波消解方法，確定微波消解條件如下: 壓力0.3 MPa,時間4 min,功率800W ； 壓力0.6 MPa,時間4 min,功率800W ； 壓力1.0 MPa,時間4 min,功率800W ； 壓力1.5 MPa,時間8 min,功率800W ； .④、樣品消解完成后，取下冷卻至室溫，將微波消解儀中的消解液轉(zhuǎn)移至塑料容量瓶中，得到微波消解液樣品，待測； .⑤、相同方法處理空白溶劑進行空白試驗，即:在未加五倍子藥材粉末樣品的空白微波消解儀中，按照上述步驟②中相同的濃硝酸用量，進行樣品消化，其他步驟同上述步驟③、④，最終定容溶液為空白溶液； .(3)ICP-MS測定每一來源的五倍子藥材中的無機元素:依次將單元素標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液、空白溶液、及上述步驟(2)中的每一來源的五倍子藥材的微波消解液樣品引入儀器，在線加入內(nèi)標(biāo)液，進行無機元素ICP-MS半定量分析測定，得到ICP-MS分析數(shù)據(jù)； 具體的ICP-MS測定條件為:RF功率1300W，等離子體流速15.0L.mirT1，載氣流速1.13L采樣深8.2，霧化室溫度2度，分析時間/質(zhì)量0.3 ;所述單元素標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液為K、Ca、Na、Mg、Fe、Al、Cr、As,該單元素標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液濃度為1000 μ g?mL_1 ;所述內(nèi)標(biāo)液為 L1、Sc、Ge、Y、In、Tb、Bi，該內(nèi)標(biāo)液濃度為 10 μ g.mL-1 ； .(4)、五倍子藥材無機元素指紋圖譜的建立:所述ICP-MS分析數(shù)據(jù)經(jīng)歸納整理后，繪制五倍子藥材無機元素的指紋圖譜； 所述ICP-MS測定的無機元素為16種，分別為:B、Mg、Al、K、Ca、V、Cr、Mn、Fe、Co、Cu、Zn、Ga、Rb、Sr、Ba、Ce、Pb ； 步驟2、采用HPLC法測定每一來源的五倍子藥材的有機成分，建立五倍子藥材有機成分的色譜指紋圖譜，具體步驟為: .(1)樣品預(yù)備:將每一來源的五倍子藥材敲開，去除內(nèi)部蟲卵后，充分粉碎，過80目篩，備用; .(2)供試品溶液的制備:取五倍子藥材粉末0.lg，精確至0.0OOOlg，用1mL甲醇超聲提取半小時，放至室溫，過濾，濾液置容量瓶中，所述濾液用甲醇稀釋并定容至刻度，制成每毫升含5mg五倍子藥材的溶液，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，備用； .(3)對照品溶液的制備:以沒食子酸為內(nèi)參照物，取沒食子酸對照品9.7mg，精確至0.0OOOlg,用甲醇溶解稀釋，濾過，制成0.097 mg-mr1的對照品溶液； .(4)HPLC法測定每一來源的五倍子藥材有機成分: .①、色譜條件:采用色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，采用梯度洗脫，流動相A為甲醇-乙腈(r:r=3:l)及 B 為 0.2% 磷酸水溶液，0-16min，1%A-2%A ；16-43min,10%A-11%A43-65min, 18%A ;65_125min，20%A_25%A ;柱溫為 27°C ;流速為 0.8mL.mirT1 ;進樣量 10 μ L ；檢測波長280nm ； .②、測定:取供試品溶液，在上述色譜條件下進樣分析，得到HPLC分析數(shù)據(jù)； .(5)五倍子藥材有機成分色譜指紋圖譜的建立:所述HPLC分析數(shù)據(jù)經(jīng)歸納整理后，繪制五倍子藥材有機成分的色譜指紋圖譜； 步驟3、采用SPSS軟件對所述步驟(I)中五倍子藥材無機元素的ICP-MS分析數(shù)據(jù)進行系統(tǒng)聚類分析，采用鏈內(nèi)平均鏈鎖法，利用歐式距離平方為測度； 步驟4、采用SPSS軟件對所述步驟(2)中五倍子藥材有機成分的HPLC分析數(shù)據(jù)進行系統(tǒng)聚類分析，采用鏈內(nèi)平均鏈鎖法，利用歐式距離平方為測度； 步驟5、綜合分析所述五倍子藥材無機元素的指紋圖譜及聚類分析與所述五倍子藥材有機成分的色譜指紋圖譜及聚類分析，評價五倍子藥材的質(zhì)量。
【文檔編號】G01N27/62GK104198574SQ201410492599
【公開日】2014年12月10日 申請日期:2014年9月24日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月24日
【發(fā)明者】郭小瑞, 李里, 孟憲生, 包永睿, 馬福敏, 郭乃菲, 徐美玲, 王帥 申請人:遼寧中醫(yī)藥大學(xué)