香附藥材指紋圖譜的構(gòu)建方法及其檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及分析檢測技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種香附藥材指紋圖譜的構(gòu)建方法及 其檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 香附為莎草科植物莎草的干燥根莖。性辛，微苦，微甘，平。氣香，味微苦。具有疏 肝解郁，理氣寬中，調(diào)經(jīng)止痛之功效。用于肝郁氣滯，胸肋脹痛，疝氣疼痛，乳房脹痛，脾胃氣 滯，脘腹痞悶，脹滿疼痛，月經(jīng)不調(diào)，閉經(jīng)痛經(jīng)等癥。
[0003] 香附為干燥根莖入藥，目前存在著多種根莖入藥的香附已混淆品，例如水香附、竹 節(jié)香附等，而現(xiàn)有技術(shù)中對于檢測香附真?zhèn)蔚姆椒ㄝ^為復(fù)雜，且結(jié)果誤差較大。因此，有必 要建立一種全面、直觀、快速的檢測方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 基于此，本發(fā)明提供了一種香附藥材指紋圖譜的構(gòu)建方法。
[0005] 具體的技術(shù)方案：
[0006] 一種香附藥材指紋圖譜的構(gòu)建方法，包括如下步驟：
[0007] ⑴對照品溶液的制備：
[0008] 精密稱取α -香附酮對照品，加甲醇稀釋，得對照品溶液；
[0009] (2)供試品溶液的配制：
[0010] 精密稱取香附藥材粉末，加入甲醇，超聲提取或回流提取20-40min，過濾，即得所 述供試品溶液；
[0011] ⑶測定：
[0012] 分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液，注入高效液相色譜儀中進行測定，得到 由16個共有特征峰構(gòu)成的香附藥材指紋圖譜。
[0013] 在其中一個實施例中，步驟（3)中，高效液相色譜儀的條件為：色譜柱為C18色譜 柱；流動相：甲醇為流動相A，水為流動相B，采用梯度洗脫方式；流速為0. 8-1. 2ml/min ;檢 測波長為252-256nm ;柱溫23-27°C。
[0014] 在其中一個實施例中，所述梯度洗脫方式為：0_45min，流動相A的體積百分數(shù)由 40%變化至80% ;45-60min，流動相A的體積百分數(shù)維持80%。
[0015] 在其中一個實施例中，檢測波長為254nm，柱溫為25°C。
[0016] 本發(fā)明的另一目的是提供一種香附藥材指紋圖譜的檢測方法。
[0017] 具體的技術(shù)方案如下：
[0018] 一種香附藥材指紋圖譜的檢測方法，包括如下步驟：
[0019] (1)對照品洛液的制備：
[0020] 精密稱取α -香附酮對照品，加甲醇稀釋，得對照品溶液；
[0021] (2)供試品溶液的配制：
[0022] 精密稱取香附藥材粉末，加入甲醇，超聲提取或回流提取20_40min，過濾，即得所 述供試品溶液；
[0023] (3)測定：
[0024] 分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液，注入高效液相色譜儀中進行測定，即得。
[0025] 在其中一個實施例中，步驟（3)中，高效液相色譜儀的條件為：色譜柱為C18色譜 柱；流動相：甲醇為流動相A，水為流動相B，采用梯度洗脫方式；流速為0. 8-1. 2ml/min ;檢 測波長為252-256nm ;柱溫23-27°C。
[0026] 在其中一個實施例中，所述梯度洗脫方式為：0_45min，流動相A的體積百分數(shù)由 40%變化至80% ;45-60min，流動相A的體積百分數(shù)維持80%。
[0027] 在其中一個實施例中，步驟（3)中，高效液相色譜儀的條件為：色譜柱為C18色 譜柱；流動相：甲醇為流動相A，水為流動相B，采用梯度洗脫方式，所述梯度洗脫方式為： 0-45min，流動相A的體積百分數(shù)由40%變化至80% ;45-60min，流動相A的體積百分數(shù)維 持80%。；流速為1.0 ml/min ;檢測波長為254nm ;柱溫25°C。
[0028] 本發(fā)明的有益效果如下：
[0029] 本發(fā)明經(jīng)發(fā)明人的大量實驗和研宄，確定了制備供試品溶液和對照品溶液的方 法，及高效液相色譜儀的色譜條件的最優(yōu)參數(shù)，由此構(gòu)建出香附藥材的指紋圖譜。采用本申 請方法構(gòu)建的指紋圖譜以及檢測方法可以準確地鑒定香附藥材，精密度高，且節(jié)約試劑。
【附圖說明】
[0030] 圖Ia為溶劑峰比較圖；
[0031] 圖Ib為標準品α -香附酮HPLC圖；
[0032] 圖2為不同流動相HPLC圖；
[0033] 圖3為流動相不同起始梯度HPLC圖；
[0034] 圖4為流動相不同梯度HPLC圖；
[0035] 圖5為不同流速HPLC圖；
[0036] 圖6為不同柱溫HPLC圖；
[0037] 圖7為不同波長HPLC圖；
[0038] 圖8為不同色譜柱HPLC圖；
[0039] 圖9為六種提取溶劑HPLC圖；
[0040] 圖10為不同提取體積HPLC圖；
[0041] 圖11為不同種提取方法HPLC圖；
[0042] 圖12為不同提取時間HPLC圖；
[0043] 圖13為香附樣品導(dǎo)出HPLC圖譜；
[0044] 圖14為香附藥材指紋圖譜的對照譜圖；
[0045] 圖15為實施例2待測藥材的HPLC譜圖。
【具體實施方式】
[0046] 以下通過實施例對本申請做進一步闡述。
[0047] 實施例1香附藥材指紋圖譜的構(gòu)建方法
[0048] 一、儀器、試藥與材料
[0049] 1、儀器
[0050] KQ - 100B型超聲波清洗器（昆山超聲儀器有限公司）；T-214型電子分析天平 (Denver公司）；Waters e2695高效液相色譜系統(tǒng)，Empower工作站，含四元梯度泵、自動進 樣器、紫外檢測器（Waters公司）。
[0051] 2、試劑
[0052] 冰乙酸（色譜純，天津市化學(xué)試劑研宄所）；甲醇、乙腈（色譜純，Honeywell公 司）；水為超純水。
[0053] 對照品為α-香附酮對照品（供鑒別用，中國藥品生物制品檢定所，批號 110748200507)
[0054] 3、材料
[0055] 香附藥材（廣州白云山星群（藥業(yè)）股份有限公司提供，共8批，批號為 父61405-01、父61307-01、父61104-01、父61111-02、20110501、20111201、廣西、廣東）
[0056] 二、方法與結(jié)果
[0057] 1、色譜條件
[0058] 色譜柱：Kromasil 100-C18, 250X4. 6mm，以甲醇（A)-水⑶為流動相系統(tǒng)梯度洗 脫（0_45min，40 % - 80 % A ;45_60min，80 % A)，流速為 1.0 mT, · mirf1，檢測波長 254nm ;柱 溫25°C，進樣量10yL。
[0059] 2、對照品溶液的制備
[0060] 用微量進樣器吸取α -香附酮對照品約50 μ 1，加甲醇適量，配制每1ml含10 μ 1 的溶液，作為對照品溶液。
[0061] 3、供試品溶液的制備
[0062] 取香附藥材粉末（過60目篩）約lg，精密稱定，置100mL具塞錐形瓶中，精密加入 甲醇10ml，密塞，稱重，超聲處理（功率160W，頻率59kHz) 30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲 醇補足減失的重量，搖勻，〇. 22 μ m微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。
[0063] 4、方法學(xué)考察
[0064] 4. 1溶劑峰的考察
[0065] 取香附藥材粉末（過60目篩）約lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇 10ml，密塞，稱重，超聲處理（功率160W，頻率59kHz) 30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補 足減失的重量，搖勻，0.22 μπι微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，HPLC分析香附藥材樣品和甲醇溶 劑空白，得圖1。
[0066] 由圖Ia可知，通過比較甲醇和香附藥材圖譜，可以發(fā)現(xiàn)，溶劑對主要的色譜峰無 太大影響。
[0067] 圖Ib為α -香附酮對照品的標準HPLC譜圖。
[0068] 4. 2流動相組成的選擇
[0069] 取香附藥材粉末（過60目篩）約lg，精密稱定，置100mL具塞錐形瓶中，精密加入 甲醇10ml，密塞，稱重，超聲處理（功率160W，頻率59kHz) 30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲 醇補足減失的重量，搖勻，〇. 22 μ m微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液HPLC分析，流動相組成及梯度 見表1，得圖2。
[0070] 表1四種流動相組成信息
[0071]
【主權(quán)項】
1. 一種香附藥材指紋圖譜的構(gòu)建方法，其特征在于，包括如下步驟： (1) 對照品洛液的制備： 精密稱取a-香附酮對照品，加甲醇稀釋，得對照品溶液； (2) 供試品溶液的配制： 精密稱取香附藥材粉末，加入甲醇，超聲提取或回流提取20-40min，過濾，即得所述供 試品溶液； (3) 測定： 分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液，注入高效液相色譜儀中進行測定，得到由16 個共有特征峰構(gòu)成的香附藥材指紋圖譜。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的香附藥材指紋圖譜的構(gòu)建方法，其特征在于，步驟（3)中，高 效液相色譜儀的條件為：色譜柱為C18色譜柱；流動相：甲醇為流動相A，水為流動相B，采 用梯度洗脫方式；流速為〇. 8-1. 2ml/min;檢測波長為252-256nm;柱溫23-27°C。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的香附藥材指紋圖譜的構(gòu)建方法，其特征在于，所述梯度洗脫 方式為：〇-45min，流動相A的體積百分數(shù)由40%變化至80% ;45-60min，流動相A的體積百 分數(shù)維持80%。
4. 根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的香附藥材指紋圖譜的構(gòu)建方法，其特征在于，檢測波長為 254nm，柱溫為 25°C。
5. -種香附藥材指紋圖譜的檢測方法，其特征在于，包括如下步驟： (1) 對照品洛液的制備： 精密稱取a-香附酮對照品，加甲醇稀釋，得對照品溶液； (2) 供試品溶液的配制： 精密稱取香附藥材粉末，加入甲醇，超聲提取或回流提取20-40min，過濾，即得所述供 試品溶液； (3) 測定： 分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液，注入高效液相色譜儀中進行測定，即得。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的香附藥材指紋圖譜的檢測方法，其特征在于，步驟（3)中，高 效液相色譜儀的條件為：色譜柱為C18色譜柱；流動相：甲醇為流動相A，水為流動相B，采 用梯度洗脫方式；流速為〇. 8-1. 2ml/min;檢測波長為252-256nm;柱溫23-27°C。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的香附藥材指紋圖譜的檢測方法，其特征在于，所述梯度洗脫 方式為：〇-45min，流動相A的體積百分數(shù)由40%變化至80% ;45-60min，流動相A的體積百 分數(shù)維持80%。
8. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的香附藥材指紋圖譜的檢測方法，其特征在于，步驟（3)中， 高效液相色譜儀的條件為：色譜柱為C18色譜柱；流動相：甲醇為流動相A，水為流動相B， 采用梯度洗脫方式，所述梯度洗脫方式為：〇-45min，流動相A的體積百分數(shù)由40%變化至 80% ;45-60min，流動相A的體積百分數(shù)維持80%。；流速為I.Oml/min;檢測波長為254nm; 柱溫25°C。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種香附藥材指紋圖譜的構(gòu)建方法及其檢測方法，包括如下步驟：(1)對照品溶液的制備；(2)供試品溶液的配制；(3)測定：分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液，注入高效液相色譜儀中進行測定，得到由16個共有特征峰構(gòu)成的香附藥材指紋圖譜。本發(fā)明經(jīng)大量實驗和研究，確定了制備供試品溶液和對照品溶液的方法，及高效液相色譜儀的色譜條件的最優(yōu)參數(shù)，由此構(gòu)建出香附藥材的指紋圖譜。采用本申請方法構(gòu)建的指紋圖譜以及檢測方法可以準確地鑒定香附藥材，精密度高，且節(jié)約試劑。
【IPC分類】G01N30-02, G01N30-06
【公開號】CN104777255
【申請?zhí)枴緾N201510188904
【發(fā)明人】姚江雄, 許招懂, 蔣莉娟, 方鐵錚
【申請人】廣州白云山星群(藥業(yè))股份有限公司
【公開日】2015年7月15日
【申請日】2015年4月20日