一種使用薄層色譜板檢測(cè)黃酒中生物胺的方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種使用薄層色譜板檢測(cè)黃酒中生物胺的方法，屬于黃酒成分分析檢測(cè)【技術(shù)領(lǐng)域】。本發(fā)明將生物胺標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)黃酒樣品用衍生試劑衍生，利用液液萃取富集生物胺，于薄層板上點(diǎn)樣，將薄層板置于裝有一定比例展開(kāi)劑的層析缸中展開(kāi)。于紫外燈下顯色、觀(guān)察，定性檢測(cè)目標(biāo)生物胺。最后采用薄層色譜儀對(duì)黃酒中生物胺進(jìn)行定量測(cè)定。本方法中生物胺的檢測(cè)限范圍是0.5μg/mL-5μg/mL，平均加標(biāo)回收率88.5％-110.3％，標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.8％-12.5％，一塊20*20的薄層玻璃板上最多可同時(shí)檢測(cè)13個(gè)樣品。與其他分析方法相比，本方法不但實(shí)現(xiàn)了黃酒生物胺的定性、定量分析，且操作簡(jiǎn)便、費(fèi)用低，可同時(shí)檢測(cè)多個(gè)樣品。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種使用薄層色譜板檢測(cè)黃酒中生物胺的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種使用薄層色譜板檢測(cè)黃酒中生物胺的方法，尤其是一種使用薄層色譜法定性、定量檢測(cè)黃酒中生物胺的種類(lèi)及含量的方法，屬于黃酒成分分析檢測(cè)【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]黃酒是我國(guó)特有的發(fā)酵酒，堪稱(chēng)東方釀造界的典型代表。但其發(fā)酵過(guò)程復(fù)雜且難以控制，因此黃酒酒液中含有豐富而復(fù)雜的成分，包括水分、乙醇、糖類(lèi)、有機(jī)酸、含氮化合物、總固形物、不揮發(fā)酯、揮發(fā)性成分(包括醇、酸、酯、羥基化合物)、有機(jī)成分等。其中含有的氨基酸種類(lèi)高達(dá)18種，總含量是其他酒種(啤酒、葡萄酒、白酒)氨基酸含量的一倍至數(shù)倍。氨基酸可被微生物代謝形成生物胺等潛在的有害成分，使得黃酒的安全性受到質(zhì)疑。黃酒中的生物胺(尤其是組胺)越來(lái)越多的受到消費(fèi)者、制造商和研究者的關(guān)注，因此加強(qiáng)黃酒中生物胺的監(jiān)測(cè)對(duì)提高黃酒品質(zhì)和安全性具有重要意義。
[0003]一些研究已經(jīng)確認(rèn)來(lái)自不同地區(qū)的黃酒中存在生物胺，并對(duì)黃酒中生物胺的種類(lèi)及含量進(jìn)行了檢測(cè)分析。目前，黃酒中的生物胺主要是通過(guò)高效液相色譜法進(jìn)行檢測(cè)。高效液相色譜法技術(shù)雖然精確、靈敏，但既昂貴又費(fèi)時(shí)，且一次只能完成I種樣品的檢測(cè)，遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿(mǎn)足實(shí)際生產(chǎn)中高通量、便宜、簡(jiǎn)便、快速的檢測(cè)要求。在原有分析檢測(cè)方法的基礎(chǔ)上，亟需發(fā)明一種費(fèi)用低、操作簡(jiǎn)單、可同時(shí)實(shí)現(xiàn)多個(gè)樣品檢測(cè)的方法。
[0004]薄層色譜法(thin-layer chromatography, TLC)是一種基于視覺(jué)光斑強(qiáng)弱的簡(jiǎn)單、半定量的方法，不需要重型或昂貴的設(shè)備，且允許對(duì)多個(gè)樣品進(jìn)行同時(shí)分析。本發(fā)明首次成功地應(yīng)用薄層色譜法定性和定量地分析了黃酒中的生物胺，并對(duì)方法的準(zhǔn)確性和精確性進(jìn)行了驗(yàn)證，表明該方法是一個(gè)有效替代HPLC的檢測(cè)分析方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是在于提供一種使用薄層色譜板檢測(cè)黃酒中生物胺的方法，尤其是一種運(yùn)用薄層色譜法定性、定量檢測(cè)黃酒中生物胺種類(lèi)及含量的方法。由于生物胺分子中缺少發(fā)色基團(tuán)，本身既無(wú)紫外吸收、又無(wú)熒光及電化學(xué)活性，使得各類(lèi)生物胺的分離及測(cè)定非常困難，所以本發(fā)明方法利用衍生化試劑對(duì)黃酒樣品中的生物胺進(jìn)行衍生，使其帶上發(fā)光基團(tuán)，然后在薄層色譜硅膠板上點(diǎn)樣，用一定比例的展開(kāi)劑展開(kāi)，從而可在紫外或者熒光燈下定性檢測(cè)，采用薄層色譜分析儀對(duì)相應(yīng)的生物胺進(jìn)行定量。
[0006]本發(fā)明的技術(shù)方案主要包括以下步驟:
[0007](I)稱(chēng)取適量生物胺標(biāo)品用0.lmol/L的鹽酸定容，制成母液備用；稱(chēng)取適量丹磺酰氯溶于丙酮制備成1-lOmg/mL的衍生化試劑備用；
[0008]所述生物胺包括尸胺、組胺、酪胺、亞精胺、精胺、腐胺、色胺等；
[0009](2)不同濃度的生物胺標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制:10-400μ g/mL酪胺、亞精胺標(biāo)準(zhǔn)溶液；
5.0-200 μ g/mL精胺標(biāo)準(zhǔn)溶液；20_800 μ g/mL組胺、腐胺標(biāo)準(zhǔn)溶液；40_1000 μ g/mL尸胺標(biāo)準(zhǔn)溶液；
[0010](3)衍生:分別取等體積的待衍生標(biāo)準(zhǔn)溶液及黃酒樣于不同的塑料離心管中，在每個(gè)離心管中加入一定體積的飽和NaHCO3溶液使之呈堿性，再加入1-5倍樣品溶液體積的衍生化試劑，在渦流混合器上渦旋混勻，置于黑暗恒溫水浴鍋中衍生，取出；在室溫下放置幾分鐘后，加入1/2樣品溶液體積的飽和NaCl溶液，再加入與樣品溶液等體積的有機(jī)溶劑萃取，待分層后取上層有機(jī)相在薄層硅膠板上點(diǎn)樣；所述衍生溫度為25°C?60°C，衍生時(shí)間為10?60min ；
[0011](4)點(diǎn)樣、分離:在硅膠薄層玻璃板上進(jìn)行衍生樣品的分離，樣品從距板的底部IOmm處開(kāi)始點(diǎn)樣，試樣之間的距離至少15mm ；
[0012](5)展開(kāi):在分析之前，層析缸需要用展開(kāi)劑混合物飽和，然后將點(diǎn)樣后的硅膠薄層玻璃板置于裝有展開(kāi)劑的薄層室中展開(kāi)，混合物從盤(pán)的底部升到約19cm處停止，干燥；
[0013](6)顯色:在紫外燈下顯色，與混合標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行比對(duì)，定性分析黃酒樣品中的生物胺種類(lèi)。
[0014](7)定量分析:采用薄層色譜儀在254nm條件下對(duì)色譜板進(jìn)行掃描，根據(jù)樣品中斑點(diǎn)對(duì)應(yīng)的的峰面積定量計(jì)算黃酒中各生物胺含量及黃酒中生物胺的總量。
[0015]所述步驟(3)中有機(jī)萃取劑優(yōu)選異己烷、乙醚、乙酸乙酯等。
[0016]所述步驟(3)中加入飽和堿性溶液是讓衍生在堿性條件下進(jìn)行，更利于衍生反應(yīng)使生物胺帶上發(fā)光基團(tuán)并有效降低該檢測(cè)法的檢測(cè)限。步驟(3)中加入飽和鹽溶液的目的是為了提高靈敏度，促進(jìn)生物胺進(jìn)入有機(jī)相，使得萃取效率最佳。
[0017]所述步驟(5)中的展開(kāi)劑比例優(yōu)選展開(kāi)速度最快、展開(kāi)時(shí)間最短、展開(kāi)效果最佳的比例。
[0018]所述步驟(5)中展開(kāi)劑優(yōu)選按體積比2:1?6:1混合的氯仿:三乙胺或按體積比2:1:1?6:4:1混合的氯仿:乙醚:三乙胺，最佳比例根據(jù)展開(kāi)時(shí)間的長(zhǎng)短、生物胺的分離效果而定；展開(kāi)時(shí)間優(yōu)選I?2h。
[0019]本發(fā)明對(duì)傳統(tǒng)方法進(jìn)行了改進(jìn)，優(yōu)化了樣品的前處理方法、衍生試劑的比例、衍生條件，生物胺萃取劑以及展開(kāi)劑的比例。這些修飾可以最大限度地縮短檢測(cè)時(shí)間，從而實(shí)現(xiàn)快速檢測(cè)。本發(fā)明方法是一種簡(jiǎn)便、高通量的分析方法，標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的線(xiàn)性良好，檢測(cè)下限范圍是0.5μ g/mL-5y g/mL，平均加標(biāo)回收率88.5% -110.3%，標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.8% -12.5%,該方法可在l_2h內(nèi)同時(shí)測(cè)定13個(gè)黃酒樣品。與現(xiàn)代檢測(cè)食品中生物胺通常使用的分析方法:高效液相色譜法和毛細(xì)管電泳法相比，本發(fā)明無(wú)需昂貴的分析儀器，費(fèi)用低，操作簡(jiǎn)便、快捷，對(duì)黃酒中生物胺的定性與定量測(cè)定，可有效降低檢測(cè)成本。
【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0020]圖1:不同濃度的生物胺混合標(biāo)準(zhǔn)溶液薄層色譜圖；圖中從左向右各加樣孔生物胺濃度分別為:80、40、20、10、5.0,2.0、1.0,0.5 μ g/mL
[0021]圖2:不同濃度的酪胺標(biāo)準(zhǔn)溶液薄層色譜圖；圖中從左向右各加樣孔酪胺濃度分別為:10、20、40、80、160、320μ g/mL
[0022]圖3:不同濃度的酪胺標(biāo)準(zhǔn)溶液薄層色譜標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)
[0023]圖4:不同濃度的組胺標(biāo)準(zhǔn)溶液薄層色譜圖；圖中從左向右各加樣孔組胺濃度分別為:20、40、80、160、320、640μ g/mL
[0024]圖5:不同濃度的組胺標(biāo)準(zhǔn)溶液薄層色譜標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)
[0025]圖6:不同濃度的亞精胺標(biāo)準(zhǔn)溶液薄層色譜圖；圖中從左向右各加樣孔亞精胺濃度分別為:10、20、40、80、160、320 μ g/mL
[0026]圖7:不同濃度的亞精胺標(biāo)準(zhǔn)溶液薄層色譜標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)
[0027]圖8:不同濃度的尸胺標(biāo)準(zhǔn)溶液薄層色譜圖；圖中從左向右各加樣孔尸胺濃度分別為:40、80、160、320、640、1000μ g/mL
[0028]圖9:不同濃度的尸胺標(biāo)準(zhǔn)溶液薄層色譜標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)
[0029]圖10:不同濃度的腐胺標(biāo)準(zhǔn)溶液薄層色譜圖；圖中從左向右各加樣孔腐胺濃度分別為:20、40、80、160、320、640μ g/mL
[0030]圖11:不同濃度的腐胺標(biāo)準(zhǔn)溶液薄層色譜標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)圖
[0031]圖12:不同生產(chǎn)階段黃酒中生物胺的薄層色譜圖；圖中從左向右各加樣孔樣品所處生產(chǎn)階段分別為:浸米第2天、浸米第3天、前酵第I天、前酵第2天、前酵第3天、混合標(biāo)準(zhǔn)品、后酵第5天、后酵第10天、原酒、沉淀酒、混合標(biāo)準(zhǔn)品
[0032]圖13:不同年份黃酒樣品中生物胺的薄層色譜圖；圖中從左向右各加樣孔樣品的年份分別為:2014 年、2013 年、2012 年、2011 年、2010 年、2009 年、2004 年、1988 年
【具體實(shí)施方式】
[0033]以下結(jié)合具體的實(shí)例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。
[0034]實(shí)施例1不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制作方法
[0035]薄層色譜法制作不同生物胺的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，包括以下步驟:
[0036](I)不同濃度的生物胺標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制:10_400μ g/mL酪胺、亞精胺標(biāo)準(zhǔn)溶液；
5.0-200 μ g/mL精胺標(biāo)準(zhǔn)溶液；20_800 μ g/mL組胺、腐胺標(biāo)準(zhǔn)溶液；40_1000 μ g/mL尸胺標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別取不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液于不同的塑料離心管中，先加入與標(biāo)準(zhǔn)品溶液等體積的飽和NaHCO3溶液使之呈堿性，再加入1-5倍標(biāo)準(zhǔn)品溶液體積的丹磺酰氯衍生溶液(1-lOmg/mL丙酮)，在渦流混合器上渦旋混勻Imin后，分別置于黑暗30°C -60°C恒溫水浴鍋中衍生10-60min時(shí)間后,取出，在室溫下放置幾分鐘后,加入1/2標(biāo)準(zhǔn)品溶液體積的飽和NaCl溶液，再加入與標(biāo)準(zhǔn)品溶液等的體積有機(jī)溶劑萃取，待分層后用進(jìn)樣針取上層有機(jī)相在娃膠玻璃板上點(diǎn)樣；
[0037](2)在硅膠薄玻璃板上進(jìn)行衍生樣品的分離，樣品從距板的底部IOmm開(kāi)始點(diǎn)樣，且等分試樣之間的距離需要至少是15mm ；
[0038](3)在分析之前，層析缸需要用展開(kāi)劑混合物飽和，展開(kāi)劑混合物為:2:1-6:1 (V/V)的氯仿:三乙胺。然后將硅膠薄玻璃板置于層析缸中展開(kāi)，混合物從盤(pán)的底部升到一定高度(整體遷移約17.5cm)后，將硅膠薄玻璃板在通風(fēng)櫥中干燥；
[0039](4)顯色:在凝膠電泳分析成像系統(tǒng)的紫外光下進(jìn)行顯色，找到不同濃度單標(biāo)準(zhǔn)品溶液中生物胺顯色的斑點(diǎn)。
[0040](5)定量:采用薄層色譜掃描儀在254nm條件下對(duì)色譜板進(jìn)行掃描，得到不同濃度單標(biāo)準(zhǔn)品溶液中生物胺顯色斑點(diǎn)的峰值，每個(gè)斑點(diǎn)的峰值對(duì)應(yīng)一定的含量，從而可直接得到各標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。[0041]實(shí)施例2檢測(cè)不同衍生溫度下衍生的黃酒樣中的生物胺
[0042]薄層色譜法定性、定量檢測(cè)不同衍生溫度下衍生的黃酒樣中的生物胺，包括以下步驟:
[0043](I)分別取黃酒樣于不同的塑料離心管中，先加入與黃酒樣溶液等體積的飽和NaHCO3溶液使之呈堿性，再加入1-5倍樣品溶液體積的丹磺酰氯衍生溶液(Ι-lOmg/mL丙酮)，在渦流混合器上渦旋混勻Imin后，分別置于黑暗的常溫、35°C、45°C、50°C、55°C、60°C恒溫水浴鍋中衍生30min時(shí)間后，取出，在室溫下放置幾分鐘后，加入1/2樣品溶液體積的飽和NaCl溶液，再加入與樣品溶液等的體積有機(jī)溶劑萃取，待分層后用進(jìn)樣針取上層有機(jī)相在娃膠玻璃板上點(diǎn)樣；
[0044](2)在硅膠薄玻璃板上進(jìn)行衍生樣品的分離，樣品從距板的底部IOmm開(kāi)始點(diǎn)樣且等分試樣之間的距離需要至少是15mm ；
[0045](3)在分析之前，層析缸需要用展開(kāi)劑混合物飽和，展開(kāi)劑混合物為2:1-6:1(V/V)的氯仿:三乙胺。然后將硅膠薄玻璃板置于層析缸中展開(kāi)，混合物從盤(pán)的底部升到一定高度(整體遷移約17.5cm)后，將硅膠薄玻璃板在通風(fēng)櫥中干燥；
[0046](4)顯色:在凝膠電泳分析成像系統(tǒng)的紫外光下進(jìn)行顯色，找到黃酒樣中目標(biāo)生物胺顯色的斑點(diǎn)，定性分析黃酒樣中生物胺的種類(lèi)。
[0047](5)定量:采用薄層色譜掃描儀在254nm條件下對(duì)色譜板進(jìn)行掃描，得到不同衍生溫度下黃酒樣中各生物胺斑點(diǎn)的峰值，將其帶入不同生物胺的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，即可算出不同衍生溫度下黃酒樣中各生物胺的含量及生物胺的總量。
[0048](6)總結(jié):根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，衍生溫度為60°C最佳，在該溫度下能檢測(cè)到最高的生物胺含量。
[0049]實(shí)施例3檢測(cè)不同衍生時(shí)間后黃酒中的生物胺
[0050]用薄層色譜法檢測(cè)衍生不同時(shí)間后黃酒中生物胺的方法，包括以下步驟:
[0051](I)分別取不同濃度的黃酒樣于不同的塑料離心管中，先加入與黃酒樣品溶液等體積的飽和NaHCO3溶液使之呈堿性，再加入1-5倍樣品溶液體積的丹磺酰氯衍生溶液(Ι-lOmg/mL丙酮)，在渦流混合器上渦旋混勻Imin后，分別置于黑暗60°C恒溫水浴鍋中分別衍生10min、20min、30min、40min、50min、60min后，取出，在室溫下放置幾分鐘后,加入1/2樣品溶液體積的飽和NaCl溶液，再加入與樣品溶液等的體積有機(jī)溶劑萃取，待分層后用進(jìn)樣針取上層有機(jī)相在硅膠玻璃板上點(diǎn)樣；
[0052](2)在硅膠薄玻璃板上進(jìn)行衍生樣品的分離，樣品從距板的底部IOmm開(kāi)始點(diǎn)樣且等分試樣之間的距離需要至少是15mm ；
[0053](3)在分析之前，層析缸需要用展開(kāi)劑混合物飽和，展開(kāi)劑混合物為4:1 (V/V)的氯仿:三乙胺。然后將硅膠薄玻璃板置于層析缸中展開(kāi)，混合物從盤(pán)的底部升到一定高度(整體遷移約17.5cm)后，將硅膠薄玻璃板在通風(fēng)櫥中干燥；
[0054](4)顯色:在凝膠電泳分析成像系統(tǒng)的紫外光下進(jìn)行顯色，找到黃酒樣中目標(biāo)生物胺顯色的斑點(diǎn)，定性分析黃酒樣中生物胺的種類(lèi)。
[0055](5)定量:采用薄層色譜掃描儀在254nm條件下對(duì)色譜板進(jìn)行掃描，得到不同衍生時(shí)間下黃酒樣中各生物胺斑點(diǎn)的峰值，將其帶入不同生物胺的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，即可算出不同衍生時(shí)間下黃酒樣中各生物胺的含量及生物胺的總量。[0056](6)總結(jié):根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，衍生時(shí)間為30min最佳，在該時(shí)間下能檢測(cè)到最高的生物胺含量。
[0057]實(shí)施例4檢測(cè)不同比例展開(kāi)劑展開(kāi)后黃酒中的生物胺
[0058]用薄層色譜法檢測(cè)不同比例展開(kāi)劑展開(kāi)后黃酒中生物胺的方法，包括以下步驟:
[0059](I)分別取不同濃度的黃酒樣于不同的塑料離心管中，先加入與樣品溶液等體積的飽和NaHCO3溶液使之呈堿性，再加入1-5倍樣品溶液體積的丹磺酰氯衍生溶液(1-1Omg/mL丙酮)，在渦流混合器上渦旋混勻Imin后，分別置于黑暗30°C -60°C恒溫水浴鍋中衍生10-60min時(shí)間后，取出，在室溫下放置幾分鐘后，加入1/2樣品溶液體積的飽和NaCl溶液，再加入與樣品溶液等的體積有機(jī)溶劑萃取，待分層后用進(jìn)樣針取上層有機(jī)相在硅膠玻璃板上點(diǎn)樣；
[0060](2)在硅膠薄玻璃板上進(jìn)行衍生樣品的分離，樣品從距板的底部IOmm開(kāi)始點(diǎn)樣且等分試樣之間的距離需要至少是15mm ；
[0061](3)在分析之前，層析缸需要用展開(kāi)劑混合物飽和，展開(kāi)劑混合物分別為2:1(V/V)的氯仿:三乙胺、6:1:1的氯仿:乙醚:三乙胺和6:1(V/V)的氯仿:三乙胺。然后將硅膠薄玻璃板置于層析缸中展開(kāi)，混合物從盤(pán)的底部升到一定高度(整體遷移約17.5cm)后，將硅膠薄玻璃板在通風(fēng)櫥中干燥；
[0062](4)顯色:在凝膠電泳分析成像系統(tǒng)的紫外光下進(jìn)行顯色，找到黃酒樣中目標(biāo)生物胺顯色的斑點(diǎn)，定性分析黃酒樣中生物胺的種類(lèi)。
[0063](5)定量:采用薄層色譜掃描儀在254nm條件下對(duì)色譜板進(jìn)行掃描，得到不同比例展開(kāi)劑展開(kāi)后黃酒樣中各生物胺斑點(diǎn)的峰值，將其帶入不同生物胺的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，即可算出不同比例展開(kāi)劑展開(kāi)后黃酒樣中各生物胺的含量及生物胺的總量。
[0064](6)總結(jié):根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，6:1(V/V)的氯仿:三乙胺展開(kāi)的效果最佳，在該比例展開(kāi)劑的條件下能檢測(cè)到最高的生物胺含量。
[0065]雖然本發(fā)明已以較佳實(shí)施例公開(kāi)如上，但其并非用以限定本發(fā)明，任何熟悉此技術(shù)的人，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)，都可做各種的改動(dòng)與修飾，因此本發(fā)明的保護(hù)范圍應(yīng)該以權(quán)利要求書(shū)所界定的為準(zhǔn)。
【權(quán)利要求】
1.一種使用薄層色譜板檢測(cè)黃酒中生物胺的方法，其特征在于，是利用衍生化試劑對(duì)黃酒樣品中的生物胺進(jìn)行衍生化處理，使其帶上發(fā)光基團(tuán)，然后采用薄層色譜分析儀對(duì)生物胺進(jìn)行分析。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述衍生化是將黃酒樣置于離心管中，再向離心管中加入飽和NaHCO3溶液使之呈堿性，再加入衍生化試劑，在渦流混合器上渦旋混勻，于黑暗恒溫條件下衍生，然后取出在室溫下放置幾分鐘后，加入1/2樣品溶液體積的飽和NaCl溶液，再加入與樣品溶液等體積的有機(jī)溶劑萃取，待分層后取上層有機(jī)相用于分析；所述衍生化試劑是丹磺酰氯，溶解于丙酮，濃度為I?10mg/mL，用量為1_5倍樣品溶液體積，衍生溫度為25°C?60°C,衍生時(shí)間為IOmin?60min。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述生物胺包括尸胺、組胺、酪胺、亞精胺、精胺、腐胺、色胺。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，采用薄層色譜分析儀對(duì)生物胺進(jìn)行分析時(shí)，展開(kāi)劑為按體積比2:1?6:1混合的氯仿:三乙胺或按體積比2:1:1?6:4:1混合的氯仿:乙醚:三乙胺。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，主要包括以下步驟: (1)衍生:分別取一定量的待衍生標(biāo)準(zhǔn)溶液或黃酒樣于塑料離心管中，在每個(gè)離心管中加入一定體積的飽和NaHCO3溶液使之呈堿性，再加入1-5倍樣品溶液體積的衍生化試齊U，在渦流混合器上渦旋混勻，置于黑暗25°C?60°C衍生IOmin?60min，取出；在室溫下放置幾分鐘后，加入1/2樣品溶液體積的飽和NaCl溶液，再加入與樣品溶液等體積的有機(jī)溶劑萃取，待分層后取上層有機(jī)相在薄層硅膠板上點(diǎn)樣； (2)點(diǎn)樣、分離:在硅膠薄層玻璃板上進(jìn)行衍生樣品的分離，樣品從距板的底部IOmm處開(kāi)始點(diǎn)樣，試樣之間的距離至少15_ ； (3)展開(kāi):在分析之前，層析缸需要用展開(kāi)劑混合物飽和，然后將點(diǎn)樣后的硅膠薄層玻璃板置于裝有展開(kāi)劑的薄層室中展開(kāi)，混合物從盤(pán)的底部升到約19cm處停止，干燥； (4)顯色:在紫外燈下顯色，與混合標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行比對(duì)，定性分析黃酒樣品中的生物胺種類(lèi)。 (5)定量分析:采用薄層色譜儀在254nm條件下對(duì)色譜板進(jìn)行掃描，根據(jù)樣品中斑點(diǎn)對(duì)應(yīng)的的峰面積定量計(jì)算黃酒中各生物胺含量及黃酒中生物胺的總量。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述步驟(I)中有機(jī)溶劑為異己烷、乙醚或乙酸乙酯。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述步驟(3)中展開(kāi)劑為按體積比2:1?6:1混合的氯仿:三乙胺或按體積比2:1:1?6:4:1混合的氯仿:乙醚:三乙胺。
8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述步驟(3)中展開(kāi)時(shí)間為I?2h。
【文檔編號(hào)】G01N30/90GK103983733SQ201410217792
【公開(kāi)日】2014年8月13日 申請(qǐng)日期:2014年5月21日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月21日
【發(fā)明者】毛健, 黃桂東, 魏曉璐 申請(qǐng)人:江南大學(xué)