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一種基于量子點的免疫熒光檢測三聚氰胺的方法及專用試劑盒的制作方法

文檔序號:6013411閱讀:260來源:國知局
專利名稱:一種基于量子點的免疫熒光檢測三聚氰胺的方法及專用試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及一種基于量子點的免疫熒光檢測三聚氰胺的方法及專用試劑盒。
背景技術(shù)
三聚氰胺(Melamine,M EL),俗稱密胺、蛋白精,是一種三嗪類含氮雜環(huán)有機化合物,被用作化工原料。三聚氰胺對身體有害,不可用于食品加工或食品添加物。2008年10月 8日,衛(wèi)生部、工業(yè)和信息化部、農(nóng)業(yè)部、國家工商行政管理總局和國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局聯(lián)合發(fā)布公告,制定三聚氰胺在乳與乳制品中的臨時管理值嬰幼兒配方乳粉中三聚氰胺的限量值為1. Omg/kg液態(tài)奶(包括原料乳)、奶粉、其它配方乳粉中三聚氰胺的限量值為 2. 5mg/kg(L)。含乳15%以上的其它食品中三聚氰胺的限量值為2. 5mg/kg(L),高于以上限量值的產(chǎn)品一律不得銷售。目前,用于三聚氰胺殘留物定量檢測的金標準是色譜/質(zhì)譜法, 但其樣品前處理過程繁瑣費時,檢測費用高?;诟偁幮悦嘎?lián)免疫反應(yīng)原理的ELISA方法不需進行復雜的樣品前處理過程,檢測時間相對短,但其精度不夠,只能用于定性篩查,無法用于定量確證。當前奶產(chǎn)品中檢測三聚氰胺殘留及其污染狀況調(diào)查的樣品數(shù)量大,任務(wù)重,花費高,檢測周期過長。因此,急需檢測結(jié)果穩(wěn)定、快速、經(jīng)濟的標準方法。量子點(Quantum Dots, QDs)標記材料是近年來發(fā)展起來的一類新型材料,包括 II-VI族和III-V族半導體納米晶。由于量子點突出的發(fā)光和吸收特性,使其具有熒光壽命長、寬激發(fā)光譜、窄發(fā)射光譜、可精確調(diào)諧的發(fā)射波長、很高的光化學穩(wěn)定性、可進行多色標記等優(yōu)越特性,采用其作為標記材料,可實現(xiàn)對靶標分子的超微量檢測。由于適用于免疫診斷試劑的量子點標記材料必須滿足量子產(chǎn)率高、熒光強、生物相容性好、高度穩(wěn)定及成本低等要求,而現(xiàn)行國外商業(yè)化的量子點其量子產(chǎn)率多在40%以下,其尺寸偏小,需要用激光光學儀器來照射激發(fā),目前僅能應(yīng)用在細胞免疫熒光檢測和流式細胞檢測和分選等方面,因此國際市場上還沒有量子點免疫檢測試劑問世。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個目的是提供一種用于檢測三聚氰胺的免疫熒光檢測試劑盒。本發(fā)明所提供的用于檢測三聚氰胺的免疫熒光檢測試劑盒,包括三聚氰胺包被原和量子點標記的三聚氰胺抗體。上述試劑盒中,所述三聚氰胺抗體為抗體效價為IO6以上(具體為IO6)、抗體親和常數(shù)為IO6 IO8M-1或IO7 IO8M-1或IO8M-1的三聚氰胺單克隆抗體;具體為抗體效價為106、 抗體親和常數(shù)為IO8M-1的三聚氰胺單克隆抗體,所述三聚氰胺單克隆抗體購自廣州市江森生物科技有限公司,產(chǎn)品目錄號為JS-23-0004。所述量子點為表面羧基含量為IX 10_3 9X 10-3mmol/mg或1 X 10_3 6X 10_3mmol/mg或5X 10_3mmol/mg的水溶性CdSe/ZnS核殼結(jié)構(gòu)的量子點;所述量子點的量子產(chǎn)率為40 70%或50 70%或60% ;所述量子點的激發(fā)光波長為345nm,發(fā)射波長是620nmo上述任一所述試劑盒中,所述量子點的粒徑為10 20nm,所述粒徑具體為13 20nm,所述粒徑尤其優(yōu)選為20nm ;其粒徑的偏差(CV)在10 30%之間,具體為10 20% 之間,再具體為15% ;上述任一所述試劑盒中,所述量子點標記的三聚氰胺抗體中,所述量子點上的羧基與所述三聚氰胺抗體上的氨基形成肽鍵,進而使所述量子點與所述三聚氰胺抗體連接。 上述任一所述試劑盒中,所述三聚氰胺包被原為三聚氰胺與載體蛋白的偶聯(lián)物, 其中所述三聚氰胺與所述載體蛋白通過三聚氰胺中引入的羧基與載體蛋白中的氨基形成的肽鍵而連接;所述載體蛋白為牛血清白蛋白、人血清白蛋白、鑰孔血藍蛋白、甲狀腺球蛋白、兔血清白蛋白、卵清蛋白、纖維蛋白原和兔和雞的丙種球蛋白中的任一種。上述任一所述試劑盒中,所述試劑盒中還包括三聚氰胺標準品、稀釋液、洗滌液、 含有孔的聚苯乙烯板、包被緩沖液和封閉液;所述三聚氰胺標準品為2,4,6-三氨基-1,3,5-三嗪;所述稀釋液為PBS緩沖液;具體為0. 02M、pH7. 4的PBS緩沖液。所述洗滌液為PBST緩沖液;具體按照如下方法制備取0. 2ml TWeen20及0. Ig的 NaN3溶于所述稀釋液中,溶解后用稀釋液定容至1L。所述包被緩沖液為碳酸鹽緩沖液;具體為0. 05M、pH9. 6的碳酸鹽緩沖液。所述封閉液為含有用于包被的蛋白的PBS緩沖液;所述用于包被的蛋白為BSAjP 清蛋白和血藍蛋白中的任一種。具體按照如下方法制備將IOg BSA和0. 2mlTween20溶于上述稀釋液中,溶解后用稀釋液定容至1L。上述任一所述試劑盒中,所述標準品為如下溶液形式的標準品用所述稀釋液將所述2,4,6-三氨基-1,3,5-三嗪稀釋成如下各個濃度的溶液0. 001,0. 005,0. 01,0. 05、 0.1、0.5、l、5、10ug/L。上述任一所述試劑盒中,所述三聚氰胺包被原包被在所述含有孔的聚苯乙烯板上,包被方法為用所述包被緩沖液稀釋所述三聚氰胺包被原得到10μ g/ml的包被液,每孔中加100 μ 1。上述任一所述試劑盒中,所述量子點標記的三聚氰胺抗體以如下溶液形式存在于試劑盒中將每25ug所述量子點標記的三聚氰胺抗體用5ml所述稀釋液稀釋得到的溶液。本發(fā)明的另一個目的是提供一種檢測樣品中三聚氰胺的方法。本發(fā)明所提供的檢測樣品中三聚氰胺的方法,包括如下步驟用上述任一所述的試劑盒對待測樣品進行檢測,所述待測樣品為奶粉或牛奶。本發(fā)明檢測方法的原理采用量子點作為熒光信號標記分子,將三聚氰胺抗原直接包被在聚苯乙烯板的微孔中,加入三聚氰胺標準品或檢測樣品,以及量子點標記的三聚氰胺抗體,使其形成抗原-抗體二元發(fā)光免疫復合物,用熒光檢測儀激發(fā)并檢測該免疫熒光復合物的熒光強度,通過與測定形成的標準曲線對比獲得待測三聚氰胺的濃度??乖?抗體二元發(fā)光免疫復合物的形成是加入量子點標記的三聚氰胺抗體后,包被的三聚氰胺抗原與檢測樣品中的三聚氰胺競爭性地結(jié)合三聚氰胺抗體,通過抗原-抗體的特異性結(jié)合形成抗原_抗體二元免疫復合物??乖璤抗體二元發(fā)光免疫復合物的形成是同時加入量子點標記的三聚氰胺抗體及檢測樣品后,包被在聚苯乙烯微孔中的三聚氰胺抗原與檢測樣品中的三聚氰胺競爭性地與三聚氰胺抗體結(jié)合,其中與檢測樣品結(jié)合剩余的三聚氰胺抗體與包被在微孔板中的三聚氰胺抗原發(fā)生特異結(jié)合后形成固定在微孔板中的抗原-抗體二元免疫復合物。本發(fā)明的三聚氰胺免疫熒光檢測試劑與量子點標記的免疫熒光檢測技術(shù)相關(guān),是采用量子點作為熒光信號標記材料,進行免疫熒光定量測定的一類方法,該技術(shù)整合了熒光量子點納米材料化學 合成、表面修飾及標記技術(shù)、間接競爭式免疫檢測技術(shù)等相關(guān)領(lǐng)域的研究。本發(fā)明之所以能檢測三聚氰胺,在于采用了一種基于量子點標記的免疫熒光定量測定的方法,即將三聚氰胺抗原直接包被在聚苯乙烯板的微孔中,基于量子點標記的間接競爭免疫熒光檢測法的測定原理,在加入三聚氰胺標準品或檢測樣品,以及量子點標記的三聚氰胺抗體后,通過檢測結(jié)合到聚苯乙烯板微孔中的抗原-抗體二元免疫復合物的熒光強度來實現(xiàn)對三聚氰胺的檢測結(jié)合到聚苯乙烯板微孔的量子點標記抗體的數(shù)量不同,所產(chǎn)生的熒光強度也不同。在一定濃度范圍內(nèi)熒光強度值的高低與樣品中的三聚氰胺的含量成反比。通過添加不同濃度的三聚氰胺標準品可制成標準曲線,根據(jù)此標準曲線查詢各檢測樣品的熒光強度值可得到對應(yīng)的三聚氰胺藥物的濃度值。其具體的技術(shù)步驟包括(一 )熒光量子點標記探針的制備采用適合的水溶性熒光量子點,活化其表面的羧基后,采用化學偶聯(lián)的方式將三聚氰胺抗體定向連接到量子點表面。(二)包被抗原采用與牛血清白蛋白偶聯(lián)的三聚氰胺抗原作為包被抗原,通過物理吸附的方法將此抗原直接包被于聚苯乙烯板微孔中。(三)抗原-抗體熒光免疫復合物的形成于上述包被好的聚苯乙烯板微孔中加入三聚氰胺標準品或檢測樣品,以及量子點標記的三聚氰胺抗體,吸附在孔內(nèi)的三聚氰胺抗原與標準或樣品中的三聚氰胺競爭性的與三聚氰胺抗體相結(jié)合,通過抗原-抗體的特異性結(jié)合形成抗原_抗體二元發(fā)光免疫復合物。(四)定量熒光檢測采用熒光酶標儀激發(fā)并檢測上述所形成的抗原_抗體熒光免疫復合物的熒光強度;激發(fā)波長345nm ;發(fā)射波長620nm ;通過測定系列對應(yīng)標準品的熒光強度形成標準曲線,通過與測定形成的標準曲線對比獲得待測三聚氰胺的濃度。所述抗原_抗體二元發(fā)光免疫復合物的形成是加入量子點標記的三聚氰胺抗體后,包被的三聚氰胺抗原與標準或樣品中的三聚氰胺競爭性地結(jié)合三聚氰胺抗體,通過抗原_抗體的特異性結(jié)合形成抗原_抗體二元免疫復合物,其上標記的量子點經(jīng)激發(fā)后可發(fā)熒光,本發(fā)明使用的激發(fā)光波長是345nm,發(fā)射波長是620nm,得到發(fā)紅光的抗原-抗體免疫復合物。所述熒光強度的檢測是用熒光酶標儀激發(fā)并檢測所形成的抗原_抗體二元發(fā)光免疫復合物的熒光強度,由于所采用的抗體是固定濃度的,通常待測樣品中的三聚氰胺藥物的濃度越高,被抗體捕獲的藥物量越多,與包被的三聚氰胺抗原結(jié)合的抗體越少,測得的熒光強度值越低。由于量子點在與抗體進行偶聯(lián)中要用超速離心進行分離純化,粒徑太小的量子點如Snm和IOnm的無法離心,偶聯(lián)后無法純化,使用效果較差;粒徑太大的量子點如60nm以上的比較容易聚集,用在試劑盒上均一性較差。
所述量子點的粒徑為10 20nm,所述粒徑具體為13 20nm,所述粒徑尤其優(yōu)選為20nm ;其粒徑的偏差(CV)在10 30%之間,較好為10 20%之間,優(yōu)選15%。 量子點的熒光量子產(chǎn)率及其熒光強度直接決定了檢測靈敏度及其準確性的高低, 傳統(tǒng)方法制備的量子點的熒光量子產(chǎn)率通常都低于40%,熒光強度較弱。為提高其靈敏度及準確性,所述量子點的量子產(chǎn)率為40 70%,所述量子點的熒光量子產(chǎn)率具體為50 70%,所述量子點的熒光量子產(chǎn)品尤其優(yōu)選為60%。為用于三聚氰胺殘留物檢測,量子點表面需帶有易于與三聚氰胺抗體偶聯(lián)的基團,這些基團可以是羧基、氨基等基團,優(yōu)化的基團是帶羧基的表面官能團,通常采用化學方法連接抗體,即用EDC和NHS活化量子點后,再與抗體發(fā)生羧合反應(yīng)而完成偶聯(lián)反應(yīng)。在將三聚氰胺抗體和量子點以肽鍵共價結(jié)合形成的聚合體前,還包括活化所述量子點表面官能團的步驟。量子點表面的羧基含量不同會影響到檢測的靈敏度,為提高靈敏度,所述官能團具體為羧基,所述羧基的含量為ι χ IO-3 9 X 10-3mmol/mg,所述羧基的含量具體為1 X 10_3 6 X lirtimol/mg,所述羧基的含量尤其優(yōu)選為5 X lO^mmol/mg.在免疫檢測中,抗體的性能指標對于檢測的準確性至關(guān)重要,通常而言,特異性強、親和力高的抗體,可以顯著地提高檢測的準確性。研究發(fā)現(xiàn),為提高靈敏度,所述三聚氰胺抗體親和常數(shù)為IO6 IO8M-1 ;所述三聚氰胺抗體親和常數(shù)具體為IO7 IO8M-1 ;所述三聚氰胺抗體親和常數(shù)尤其優(yōu)選為IO8MA由于三聚氰胺是小分子物質(zhì),其分子表面特性不利于與聚苯乙烯微孔板的直接結(jié)合,需要將其與載體蛋白進行偶聯(lián)后才能借助于載體蛋白的表面特性而達成與聚苯乙烯微孔板的良好結(jié)合??捎米鬏d體蛋白的有各種動物的血清白蛋白,如牛血清白蛋白 (Bovine Serum Albumin,BSA)、人血清白蛋白(Human Serum Albumin,HSA),還有鑰孔血藍蛋白(Keyhole Limpet Hemocyanin,KLH)、甲狀腺球蛋白、兔血清白蛋白(RSA)、卵清蛋白 (Ovalbumin,0VA)、纖維蛋白原或兔和雞的丙種球蛋白。研究發(fā)現(xiàn),BSA理化性質(zhì)穩(wěn)定,賴氨酸含量高,自由氨基多,在不同的PH和離子強度下均有較大的溶解度,在含有有機溶劑(如吡啶、DMF等)的情況下均可和半抗原進行偶聯(lián),且在偶聯(lián)后仍保持可溶狀態(tài),是作為載體蛋白的極佳選擇,故本發(fā)明選用BSA作為偶聯(lián)蛋白。本發(fā)明通過對熒光量子點、三聚氰胺抗原和三聚氰胺抗體分子特性的研究,通過對各種水溶性熒光量子點制備、包覆及表面修飾條件的優(yōu)化,選擇適合的水溶性熒光量子點與特異性的抗體進行定向共價化學偶聯(lián),獲得功能性的熒光量子點標記探針,并通過優(yōu)化競爭性免疫反應(yīng)的各種條件,達到對三聚氰胺殘留藥物的快速和高靈敏定量測定。實驗證明,本發(fā)明試劑盒的靈敏度高、特異性好、準確度高。本發(fā)明方法能實現(xiàn)對三聚氰胺殘留藥物的定量檢測,并且檢測限低、檢測靈敏度高、特異性好,還適用于多種樣品的檢測。因此,本發(fā)明在三聚氰胺的檢測領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。


圖1水溶性CdSe/ZnS熒光量子點電鏡(TEM)照片。圖2用量子點標記的間接競爭免疫熒光法檢測三聚氰胺的標準曲線。
具體實施方式
下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明,均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的材料、試劑等,如無特殊說明,均可從商業(yè)途徑得到。實施例1、檢測試劑盒的組成及制備三聚氰胺購自北京恒元啟天化工技術(shù)研究院,產(chǎn)品目錄號為 29921CDCT-C14861400。其化學名稱為 2,4,6-三氨基-1,3,5-三嗪。1、三聚氰胺包被原 三聚氰胺-BSA的合成采用先將三聚氰胺分子轉(zhuǎn)化為中間體,引入羧基,再與BSA 進行偶聯(lián)。具體步驟為1)取63mg (0. 5mmol)三聚氰胺于玻璃瓶中,加入50mg琥珀酸酐和5ml吡啶使之完全溶解,在室溫(25°C)下攪拌反應(yīng)6h,通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去吡啶,用氮氣吹干殘余吡啶后得到三聚氰胺中間體;取制備好的三聚氰胺中間體82mg (約0. 2mmol)溶解于5ml DMF中使之充分溶解,得到三聚氰胺中間體溶液;2)將5ml步驟1)得到的三聚氰胺中間體溶液加入20. 6mg DCC (N, N-二環(huán)己基碳化二亞胺)(約0. Immol)在室溫(25°C )下活化15min,加入NHS (N-羥基丁二酰亞胺)28. 6mg (約0. 2mmol)在室溫下反應(yīng)lh,之后轉(zhuǎn)入4°C下反應(yīng)1. 5h,得到活化后的三聚氰胺中間體溶液;3)取IOOmg BSA溶解于IOml 0. lmol/L, pH為8. 5的硼酸鈉溶液中,得到BSA硼
酸溶液;4°C下保存待用;4)將5ml活化的三聚氰胺-DMF在冰浴下通過分液漏斗緩慢逐滴加入IOml BSA溶液中4°C反應(yīng)3. 5h;5)產(chǎn)物于0. 02mol/L,pH = 7. 5PBS中透析24小時,每6h換次透析液。所得產(chǎn)品用凍干機凍干,于_20°C保存,得到三聚氰胺抗原。2、三聚氰胺包被原的包被采用包被緩沖液將三聚氰胺包被原稀釋為濃度10 μ g/ml的包被液,在96孔聚苯乙烯微孔板條中每孔各加100 μ 1,于4°C冰箱放置過夜。第二天棄去包被液、用洗滌液沖洗各板孔3次后,各孔加入200 μ 1封閉液,于37°C封閉處理2h。之后棄去封閉液、用洗滌液沖洗各板孔3次后,進行真空抽干、用鋁箔袋密封后放置于-20°C保存。3、量子點標記的三聚氰胺抗體三聚氰胺抗體為效價為106、親和常數(shù)為IO8M-1的三聚氰胺單克隆抗體,其購自廣州市江森生物科技有限公司,產(chǎn)品目錄號為JS-23-0004。量子點購自深圳市泰勒斯科技有限公司,產(chǎn)品目錄號為TLS LumiQD 20。該量子點的表征如下粒徑為20nm、粒徑的CV為15%,量子產(chǎn)率為60%,表面羧基含量為 5X 10-3mmol/mg,水溶性,CdSe/ZnS核殼結(jié)構(gòu),激發(fā)光波長為345nm,發(fā)射波長是620nm ;紅色熒光量子點。量子點的掃描圖如圖2所示。所述量子點標記的三聚氰胺抗體中,所述量子點上的羧基與所述三聚氰胺抗體上的氨基形成肽鍵,進而使所述量子點與所述三聚氰胺抗體連接。量子點標記方法是1)取2. 5mg的上述量子點用0. IM的MES緩沖液(稱取1. 066g MES,0. 45g NaCl溶于50ml純水,調(diào)pH至4. 7)洗滌并用20000rpm離心富集去上清后,用Iml濃度為0. 1M、 PH值為4. 7的MES緩沖液重懸,加入0. 96mg (終濃度為5mM)的1-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳二亞胺(EDC)和1. 15mg (終濃度為IOmM) N-羥基丁二酰亞胺(NHS)于其中。反應(yīng)溫度為37°C,反應(yīng)半小時后,得到活化后的量子點;2)用50mM pH = 8. 5的硼砂緩沖液洗滌,取0. 15mg三聚氰胺單克隆抗體和2. 5mg 活化后量子點混合到0. 8ml 50mM pH = 8. 5的硼砂緩沖液(稱取1. 9g Na2B4O7. IOH2O溶于 IOOml純水,調(diào)pH至8. 5)中充分混勻。室溫(25°C )下反應(yīng)3. 5小時,讓抗體和量子點形成穩(wěn)定的肽鍵共價結(jié)合,得到含有偶聯(lián)后量子點的反應(yīng)液;3)反應(yīng)結(jié)束后,向步驟2)得到的反應(yīng)液中加入終濃度為5% (質(zhì)量百分含量)的 BSA(Sigma-Aldrich,85041C)對剩余活性氨基位點進行封閉,反應(yīng)在37°C下進行0. 5小時, 得到含有封閉后量子點的反應(yīng)液;完成后,用pH = 7. 4的0. 02M PBS緩沖液(稱取2. 3g Na2HP04、0. 524g NaH2PO4. H20,8. 77g NaCL 溶于 IL 純水,調(diào) pH 至 7. 4)洗滌,20000rpm 離心富集去上清,重懸后4°C保存待用,得到量子點標記三聚氰胺抗體。4、三聚氰胺標準品用稀釋液將三聚氰胺稀釋成如下各個濃度的溶液0. 001、 0. 005、0. 0U0. 05、0· 1、0. 5、l、5、10ug/L ;5、稀釋液0· 02M、ρΗ7· 4 的 PBS 緩沖液;配制稱取2. 3g Na2HP04、0. 524g NaH2PO4. H2O 和 8. 77g NaCL 溶于 IL 純水,調(diào) pH 至 7. 4。6、洗滌液PBST緩沖液;取0. 2ml Tween20及0. Ig的NaN3溶于上述PBS緩沖液中,溶解后用上述PBS緩沖液定容至1L。7、包被緩沖液0. 05M、pH9. 6的碳酸鹽緩沖液。8、封閉液將IOg BSA和0. 2ml Tween20溶于上述PBS緩沖液中,溶解后用PBS緩沖液定容至1L。實施例2、標準曲線的制備方法在制備好的三聚氰胺微孔板條中加入濃度為0,0. 001,0. 005,0. 01,0. 05,0. 1、 0.5、l、5、10ug/L的三聚氰胺標準溶液,50ul/孔,將量子點標記ENR抗體用PBS-T稀釋液 1 50稀釋[即25ug標記抗體5ml稀釋液],每個微孔中加入50ul,室溫振蕩1小時,洗滌液洗3次后用熒光酶標儀檢測其熒光強度數(shù)值。熒光酶標儀設(shè)置為激發(fā)波長345nm,發(fā)射波長620nm。將競爭檢測的檢測限定為Β0/Β = 1. 2時(B0為0標準樣檢測值,B為待測樣檢測值)的競爭藥物的質(zhì)量濃度,根據(jù)曲線回歸方程確定檢測體系的靈敏度。檢測結(jié)果如下表 1所示,將檢出限定為0. 5ug/L。 表1三聚氰胺不同濃度樣品的量子點試劑盒檢測值
權(quán)利要求
1.一種用于檢測三聚氰胺的免疫熒光檢測試劑盒,包括三聚氰胺包被原和量子點標記的三聚氰胺抗體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒,其特征在于所述三聚氰胺抗體為抗體效價為IO6以上、抗體親和常數(shù)為IO6 IO8M-1的三聚氰胺單克隆抗體;所述量子點為表面羧基含量為1 X 10_3 9X 10_3mmol/mg的水溶性CdSe/ZnS核殼結(jié)構(gòu)的量子點;所述量子點的量子產(chǎn)率為40 70%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的試劑盒,其特征在于所述量子點的粒徑為10 20nm,其粒徑的偏差在10 30%之間;所述三聚氰胺包被原為三聚氰胺與載體蛋白的偶聯(lián)物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一所述的試劑盒,其特征在于所述試劑盒中還包括三聚氰胺標準品、稀釋液、洗滌液、含有孔的聚苯乙烯板、包被緩沖液和封閉液;所述三聚氰胺標準品為2,4,6-三氨基-1,3,5-三嗪;所述稀釋液為PBS緩沖液;所述洗滌液為PBST緩沖液;所述包被緩沖液為碳酸鹽緩沖液;所述封閉液為含有用于包被的蛋白的PBS緩沖液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一所述的試劑盒,其特征在于所述標準品為如下溶液形式的標準品用所述稀釋液將所述2,4,6-三氨基-1,3,5-三嗪稀釋成如下各個濃度的溶液 0. 001、0. 005、0. 0U0. 05、0· 1、0· 5、1、5、10ug/L。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一所述的試劑盒,其特征在于所述三聚氰胺包被原包被在所述含有孔的聚苯乙烯板上,包被方法為用所述包被緩沖液稀釋所述三聚氰胺包被原得到 10 μ g/ml的包被液,每孔中加100 μ 1。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一所述的試劑盒,其特征在于所述量子點標記的三聚氰胺抗體以如下溶液形式存在于試劑盒中將每25ug所述量子點標記的三聚氰胺抗體用5ml所述稀釋液稀釋得到的溶液。
8.—種檢測樣品中三聚氰胺的方法,包括如下步驟用權(quán)利要求1-7中任一所述的試劑盒對待測樣品進行檢測,所述待測樣品為奶粉或牛奶。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種基于量子點的免疫熒光檢測三聚氰胺的方法及專用試劑盒。本發(fā)明提供的用于檢測三聚氰胺的免疫熒光檢測試劑盒,包括三聚氰胺包被原和量子點標記的三聚氰胺抗體。本發(fā)明方法能實現(xiàn)對三聚氰胺殘留藥物的定量檢測,并且檢測限低、檢測靈敏度高、特異性好,還適用于多種樣品的檢測。因此,本發(fā)明在三聚氰胺的檢測領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。
文檔編號G01N33/577GK102288764SQ20111018841
公開日2011年12月21日 申請日期2011年7月7日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月7日
發(fā)明者吳峰, 袁航, 馬嵐 申請人:清華大學深圳研究生院
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