專利名稱：一種用于檢測(cè)血清中不規(guī)則抗體的試劑盒及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種體外診斷試劑，更具體地，本發(fā)明涉及酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(以下縮寫為 ELISA)試劑盒，它能同時(shí)檢測(cè)血清中是否含有針對(duì)Rh血型系統(tǒng)中D、 E、 e、 C、 c抗原的IgG 型不規(guī)則抗體。
背景技術(shù)：
血清中不規(guī)則抗體是指不符合ABO血型系統(tǒng)Landsteiner法則的血型抗體，也就是抗A、 抗B以外的血型抗體。ABO系中的亞型、變異型抗Al或某種抗B等抗體，也稱為不規(guī)則抗體， 其多為IgG類抗體。這些抗體主要是經(jīng)輸血或妊娠等免疫刺激產(chǎn)生，在鹽水介質(zhì)中不能凝集 而只能致敏相應(yīng)抗原的紅細(xì)胞，必須通過(guò)特殊方法(抗人球蛋白法、凝聚胺法等)檢測(cè)，才 能使致敏紅細(xì)胞出現(xiàn)凝集反應(yīng)。臨床上通常所稱的"同型血"實(shí)際上是指ABO血型系統(tǒng)和Rh 血型系統(tǒng)D抗原相同，其它紅細(xì)胞血型系統(tǒng)未必相同。如果交叉配血不仔細(xì)，或者只用鹽水 介質(zhì)配血，則有可能檢査不出AB0血型系統(tǒng)之外的不規(guī)則抗體，而此抗體與相應(yīng)抗原發(fā)生免 疫反應(yīng)，可導(dǎo)致溶血性輸血反應(yīng)的發(fā)生。
由于有臨床意義的不規(guī)則抗體會(huì)導(dǎo)致溶血性輸血反應(yīng)，破壞輸入的不配合的紅細(xì)胞或縮 短其壽命，產(chǎn)生溶血性輸血反應(yīng)，輕則影響治療效果，重則危機(jī)病人生命；此外，對(duì)孕婦而 言，不規(guī)則抗體會(huì)引起新生兒溶血病，影響新生兒臟器的發(fā)育，并使其智力發(fā)育受到傷害， 嚴(yán)重者則會(huì)危及新生兒的生命安全。因此，不規(guī)則抗體篩選是很必要而且必須的。其篩選的 i義主要在于三個(gè)方面
1、 獻(xiàn)血者的血清或血漿進(jìn)行抗體篩查，可以防止含有不規(guī)則抗體的血液輸注給病人，避免由 于獻(xiàn)血者血液中的不規(guī)則抗體引起病人紅細(xì)胞的破壞而引起的溶血性輸血反應(yīng)，同時(shí)可以減 少血液浪費(fèi)，可將有不規(guī)則抗體的血液制備成抗體血清，用于稀有血型的檢測(cè)。
2、 對(duì)需要輸血治療的患者，進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查，可以有助于血液選擇，從而有充分的時(shí)間 來(lái)選擇不含有針對(duì)某抗體的響應(yīng)抗原的血液，從而防止因?yàn)檩斪⒑心晨贵w相應(yīng)抗原的血液 而引起溶血性輸血反應(yīng)，保證輸血安全。
3、 孕婦進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查，可以盡早發(fā)現(xiàn)不規(guī)則抗體，可以在孕期進(jìn)行新生兒溶血病的預(yù) 防和治療，減少不規(guī)則抗體對(duì)胎兒或新生兒帶來(lái)的傷害，減少新生兒溶血病的性病程度，提 高胎兒或新生兒的身體素質(zhì)。
雖然不規(guī)則抗體篩選陽(yáng)性率僅為0. 37%，但是該項(xiàng)陽(yáng)性的患者一旦輸入具有相應(yīng)抗原的 紅細(xì)胞，抗原、抗體發(fā)生免疫性結(jié)合，在補(bǔ)體的參與下，使輸入的紅細(xì)胞發(fā)生溶解，即發(fā)生
溶血性輸血反應(yīng)。患者出現(xiàn)發(fā)熱、貧血、黃疸和血紅蛋白尿，嚴(yán)重時(shí)甚至危及其生命。因此， 在輸血中要經(jīng)常警惕這種輸血反應(yīng)發(fā)生的可能性。當(dāng)不規(guī)則抗體篩選陽(yáng)性時(shí)，必須進(jìn)一步作 抗體鑒定，確定其特異性后，再輸入無(wú)相應(yīng)抗原的紅細(xì)胞，才能達(dá)到安全輸血之目的。
新生兒溶血病(HDN)也是由于母親體內(nèi)存在著與其胎兒紅細(xì)胞不配合的IgG類的不規(guī)則 抗體，引起的同種被動(dòng)免疫性疾病。凡是以IgG性質(zhì)出現(xiàn)的不規(guī)則抗體，理論上都可以引起 HDN，因?yàn)镮gG性質(zhì)抗體能通過(guò)胎盤進(jìn)入胎兒血循環(huán)，破壞胎兒紅細(xì)胞，引發(fā)胎兒水腫、黃疸、 貧血和肝脾腫大，甚至并發(fā)核黃疸。因此對(duì)有輸血史或妊娠史的孕婦也應(yīng)作不規(guī)則抗體篩選， 若檢測(cè)出不規(guī)則抗體，應(yīng)做出相應(yīng)的預(yù)防和治療。Rh血型中D抗原的抗原性強(qiáng)于E抗原的抗 原性，因此產(chǎn)生抗一D抗體的幾率大于抗一E抗體。
不規(guī)則抗體產(chǎn)生大多為Rh血型系統(tǒng)，除抗一D外，其他如抗一E、抗一e、抗一C和抗一c 檢出率占處系統(tǒng)67.8%，提示Rh陽(yáng)性患者輸血也可引起溶血反應(yīng)，且機(jī)率較高。根據(jù)我國(guó) 漢族人群Rh抗原分布特點(diǎn)，E抗原陽(yáng)性比D抗原陽(yáng)性低，產(chǎn)生抗E抗體的機(jī)率高于抗D抗體， 故Rh血型系統(tǒng)D抗原陽(yáng)性E抗原陰性者輸血不容忽視。Rh陰性個(gè)體免疫后產(chǎn)生抗D的機(jī)率 為70.9%，產(chǎn)生的抗體其效價(jià)在體內(nèi)會(huì)逐漸下降，甚至常規(guī)試驗(yàn)會(huì)漏檢，若以后作為受血者 輸入Rh(D)陽(yáng)性血刺激時(shí)，會(huì)很快出現(xiàn)免疫性回憶反應(yīng)?？贵w效價(jià)會(huì)在1 2周內(nèi)達(dá)到高峰， 引起遲發(fā)性血管外溶血，且發(fā)生在輸血后幾天。造成的輸血無(wú)效以及溶血，易被臨床忽視。 溶血反應(yīng)的強(qiáng)度與抗體效價(jià)成正比關(guān)系，抗體產(chǎn)生的強(qiáng)度增加溶血反應(yīng)愈嚴(yán)重?？筂、抗L^、 抗P1均較少見，但抗Le-抗體可引起嚴(yán)重的溶血性輸血反應(yīng)，所以不能作為供血者，如為受 血者時(shí)應(yīng)給LE(a-b-)血液輸入?？挂籑抗體只有37t:或抗球蛋白試驗(yàn)出現(xiàn)陽(yáng)性時(shí)才具有臨床 意義?？筆l最理想的反應(yīng)溫度為4i:，偶可在37t:査出?？筆1抗體很少在體內(nèi)造成溶血， 幾乎總是IgM型抗體，所以不能通過(guò)胎盤，不會(huì)造成HDN。冷凝集素在配血時(shí)可忽略。自身 抗體在自身溶血性貧血時(shí)出現(xiàn)較多， 一直以來(lái)是輸血的一大難題，目前無(wú)法鑒定出自身抗體 以外的不規(guī)則抗體，輸血只能遵循選擇較弱凝集的血液輸注的輸血原則。
美國(guó)、日本、澳大利亞等國(guó)家均已將不規(guī)則抗體篩査列入常規(guī)檢測(cè)，而我國(guó)衛(wèi)生行政部 門目前尚未要求對(duì)獻(xiàn)血者進(jìn)行抗體篩選，在臨床也只有少數(shù)醫(yī)院對(duì)患者進(jìn)行抗體篩選。我國(guó) 目前大多數(shù)臨床醫(yī)院輸血科(或血庫(kù))的配血水平比較落后， 一直沿用室溫鹽水方法配血， 此方法只能檢出不配合的IgM類抗體，不能檢出不配合的IgG抗體，而ABO血型系統(tǒng)以外的 其他血型系統(tǒng)的絕大多數(shù)抗體是IgG性質(zhì)的抗體，因此，含有不規(guī)則抗體(抗一A、抗一B或 抗-AB以外的其他抗體，如抗-D)的血液給病人輸用后，此不規(guī)則抗體會(huì)引起急或遲發(fā)性輸 血反應(yīng)，往往給病人生命帶來(lái)危險(xiǎn)。為提高血液質(zhì)量，保證輸血患者的輸血安全，提高輸血 治療效果，避免患者輸用含有不規(guī)則抗體引起的輸血反應(yīng)，使我國(guó)輸血事業(yè)與世界接軌，應(yīng)
該對(duì)獻(xiàn)血者或輸血者進(jìn)行不規(guī)則抗體篩選。
目前檢測(cè)不規(guī)則抗體的主要方法為將O型紅細(xì)胞與待檢血漿(清)混合，用抗人球蛋白 法和凝聚胺法檢出，不足之處如下
1、 目前檢測(cè)血清中不規(guī)則抗體是利用標(biāo)準(zhǔn)譜細(xì)胞來(lái)完成的。由于譜細(xì)胞的保存期短，如果不 及時(shí)應(yīng)用，產(chǎn)品就會(huì)過(guò)期而浪費(fèi)；
2、 操作復(fù)雜，尤其對(duì)于樣本數(shù)較多時(shí)，工作量太大，結(jié)果判讀困難；
3、 由于譜細(xì)胞的細(xì)胞譜有限，目前的譜細(xì)胞不能完全區(qū)分紅細(xì)胞血型不規(guī)則抗體，所以無(wú)法 準(zhǔn)確檢出抗體；
4、 不能鑒定某些疾病(如自身免疫性溶血性貧血)體內(nèi)的不規(guī)則抗體組成；
5、 檢出結(jié)果無(wú)法保存，不利于實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)保存；
6、 檢出費(fèi)用過(guò)高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了克服上述缺點(diǎn)，提供一種能同時(shí)對(duì)血清中含有的針對(duì)D、 E、 e、 C、 c抗原的IgG型不規(guī)則抗體進(jìn)行檢測(cè)的，并且保存期長(zhǎng)的試劑盒。
本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供一種用于血清中不規(guī)則抗體的試劑盒的制備方法。 為達(dá)到上述目的，本發(fā)明包括
a) 、酶聯(lián)板，之上已經(jīng)包被了純化后的紅細(xì)胞表面D、 E、 e、 C、 c抗原；
b) 、不與上述抗原反應(yīng)的正常人血清，作為陰性對(duì)照；
c) 、作為陽(yáng)性對(duì)照的人血清，每一種與上述抗原之一特異性反應(yīng)。
本試劑盒可以進(jìn)一步包含清洗溶液、第二抗體、底物緩沖液、底物和終止溶液。在優(yōu)選 的實(shí)施方案中，清洗溶液包含磷酸鹽緩沖液，第二抗體包含辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗人IgG 山羊血清，底物是四甲基聯(lián)苯胺(TMB)，且該試劑盒進(jìn)一步包含過(guò)氧化氫溶液，終止液包 含硫酸。
優(yōu)選地，試劑盒分別包被紅細(xì)胞表面D、 E、 e、 C、 c抗原量分別是1.5-2.5"g蛋白/孔,, 用于血清中不規(guī)則抗體的試劑盒的制備方法，其中，制備酶聯(lián)板包括如下步驟
a) 分離純化紅細(xì)胞D、 E、 e、 C、 c抗原
b) 包被紅細(xì)胞D、 E、 e、 C、 c抗原
優(yōu)選地，分離純化紅細(xì)胞D、 E、 e、 C、 c抗原的步驟
a) 制備用于純化紅細(xì)胞膜蛋白的親合層析柱；
b) 低滲法提取紅細(xì)胞膜蛋白；c)從紅細(xì)胞膜蛋白中純化特異性的D、 E、 e、 C、 c等抗原。
本發(fā)明的原理是不用紅細(xì)胞作為檢測(cè)試劑，而是提取紅細(xì)胞表面的抗原，純化后包被 在酶聯(lián)板上，利用酶聯(lián)免疫分析(ELISA)方法來(lái)檢測(cè)血清中的不規(guī)則抗體，并使用人血清 作為其陽(yáng)性或陰性對(duì)照抗體，對(duì)針對(duì)D、 E、 e、 C、 c抗原的IgG型抗體同時(shí)檢測(cè)。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)保存期長(zhǎng)、高度特異性、高通量、結(jié)果易于判定以及檢測(cè)方法簡(jiǎn)便易行。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明提供了一種能同時(shí)對(duì)血清中的針對(duì)D、 E、 e、 C、 c抗原的IgG型抗體進(jìn)行檢測(cè)的 ELISA試劑盒。本試劑盒包含一塊酶標(biāo)板用來(lái)檢測(cè)針對(duì)D、 E、 e、 C、 c抗原的IgG型抗體， 那就是說(shuō)， 一個(gè)96孔或12X8孔酶標(biāo)板，包被有D、 E、 e、 C、 c抗原。然后，受試驗(yàn)者的 血清被加上以診斷是否含有針對(duì)D、 E、 e、 C、 c抗原的IgG型抗體。
本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案是包含磷酸鹽緩沖液的清洗溶液、包含辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗 人IgG山羊血清作為第二抗體，四甲基聯(lián)苯胺(TMB)作為底物的ELISA試劑盒。
試劑盒包含下列內(nèi)容物-
1、 有5種不同Rh抗原包被的的酶標(biāo)板96孔板或12X8長(zhǎng)條；
2、 陰性標(biāo)準(zhǔn)血清l瓶
3、 陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)血清l瓶，是一種混合血清，可以分別與D、 E、 e、 C、 c抗原反應(yīng)
4、 清洗溶液l瓶(PBS緩沖液)
5、 第二抗體1瓶
6、 底物緩沖液l瓶
7、 底物(四甲基聯(lián)苯胺)l瓶
8、 過(guò)氧化氫l瓶
9、 終止溶液1瓶 上述內(nèi)容物具體描述如下
1、 包被了5種不同純化血型抗原的酶標(biāo)板96孔板或12X8長(zhǎng)條
2、 陰性標(biāo)準(zhǔn)血清l瓶
成分未稀釋的不與抗原D、 E、 e、 C、 c抗原發(fā)生反應(yīng)的正常人血清500 p 1，和0. 05v/v% 的Proclin300
3、 陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)血清包含高濃度的特異性抗D、 E、 e、 C、 c抗原的抗體的人源血清，未稀 釋，500lil和0. 05v/v9&的Proclin300
4、 清洗溶液(10倍濃縮的)l瓶
成分0. 1MPBS 25ml、 0. 5%的Tween20、 0. 05v/v96的Proclin300
5、 第二抗體溶液 一瓶(使用前稀釋100倍)
成分lv/v9&的辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗人IgG山羊血清、適量牛血清白蛋白PBS、
0. 05v/v呢的Proclin300。
6、 底物緩沖液 一瓶
成分檸檬酸-磷酸緩沖液100ml、 0.05v/v9()的Proclin300。
7、 底物(四甲基聯(lián)苯胺)l瓶
8、 過(guò)氧化氫l瓶，在使用前稀釋在底物緩沖液中至濃度為0.1%
9、 終止溶液l瓶 成分2N硫酸15ml
在上述試劑盒中，下列情況被認(rèn)為是陽(yáng)性(陽(yáng)性對(duì)照和樣品的OM50值與陰性對(duì)照的比 值大于等于40)
本試劑盒的制造方法
1、 抗原覆蓋平板的準(zhǔn)備
經(jīng)過(guò)純化的5種抗原包被在96孔平板上，封閉并干燥，然后冷藏。標(biāo)準(zhǔn)血清的制備
2、 對(duì)照血清的制備
陰性標(biāo)準(zhǔn)血清取正常人血清，這些血清均經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)普紅細(xì)胞檢測(cè)后為陰性的血清； 陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)血清是一種混合血清，其中含有與Rh血型系統(tǒng)各種抗原反應(yīng)的抗體。
本發(fā)明可以通過(guò)下面的實(shí)施例更好地理解，所描述的具體材料和結(jié)果只是例子，不是對(duì) 權(quán)利要求書中的描述進(jìn)行限制。
用于血清中不規(guī)則抗體的試劑盒的制備方法，以D為例，其中，制備酶聯(lián)板包括如下步
驟
1、 首先是分離純化紅細(xì)胞D抗原
a)用于純化紅細(xì)胞膜蛋白的親合層的柱的制備將親和配基共價(jià)偶聯(lián)在固體粒子的表面(或 孔內(nèi))即可制備親和吸附介質(zhì)，該固體粒子通常稱為配基的載體。我們選擇親合層析柱中的親 合載體為Pharmacia Biotech公司溴化氰(CNBr)活化的S印harose 4B (—種瓊脂糖凝膠)。 我們按Pharmacia Biotech公司提供說(shuō)明書中的方法，制備濕膠(l g干粉可獲得3. 5 mL濕 膠)。將溴化氰活化的S印harose 4B干粉用lmmol/L HC1溶脹，再用偶聯(lián)緩沖液 (pH 8.3， 0. 1 mol / L NaHC03， 0. 5mol / L NaCl)洗滌三次，將預(yù)先經(jīng)偶聯(lián)緩沖 液充分透析的紅細(xì)胞D抗原的單克隆抗體溶液(購(gòu)自上海血液制品研究所)與上述 凝膠混合，混合比例為5mg抗體/ml膠，混合物在室溫下緩慢振蕩偶聯(lián)反應(yīng)4 5小時(shí)。凝膠用五倍體積的偶聯(lián)緩沖液洗滌，然后用pH8. 0, 1mol/L的乙醇 胺溶液封閉過(guò)夜。次日凝膠依次用pH4. 0 0. lmol/L NaCl， 0. lmol/L NaAc / HAc、 水和偶聯(lián)緩沖液輪流洗滌三次后，4 'C保存于TSA (Tris/鹽/疊氮化合物)緩沖液中備用。 以BCA法檢測(cè)偶聯(lián)前后偶聯(lián)液中抗體的濃度，經(jīng)計(jì)算單克隆抗體的結(jié)合率為78%。
b) 低滲法提取紅細(xì)胞膜蛋白本發(fā)明所利用的紅細(xì)胞均符合《中華人民共和國(guó)血液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》。 向0型紅細(xì)胞中加入0.01 raol/L PBS ( pH7. 4)，離心3000 r/min， 20 min，棄上清和上清 下的白細(xì)胞、血小板層。用相當(dāng)于紅細(xì)胞壓積3倍的預(yù)冷PBS(pH7.4)洗滌3次(4。C， 5 000 r/min， 15 min)。加預(yù)冷的0.01 mol/L Trie-HC1 (pH7. 4)與紅細(xì)胞(V : V=40 : l)混合，4。C 放置2h。再以9 000 r/min離心20min，棄上清(重復(fù)3-5次)至無(wú)肉眼可見的紅細(xì)胞為止。 沉淀物加0.01 mol/L raS(pH7.4)溶解，利用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定膜蛋白的濃度為 0. 4mg/mL。
c) 從紅細(xì)胞膜蛋白中純化特異性的D抗原將超濾濃縮后的紅細(xì)胞膜蛋白提取液流過(guò)親和層 析柱，流速l mL/ min。將流出液循環(huán)上樣，于4 。C過(guò)夜。先用平衡液PBS洗去未結(jié)合的蛋 白，再以洗脫液洗脫。洗脫液是100 ramo1/ L Gly-HC1， pH 2. 0。收集洗脫峰組分(」280監(jiān) 測(cè)，收集管中預(yù)裝O. 1 mL pH 9. 0 NaOH)，每管收集1 mL洗脫液，用BCA法測(cè)定洗脫峰 蛋白的濃度為0. 9mg/mL。
2、紅細(xì)胞D抗原的包被:用包被緩沖液(pH9.6碳酸鹽緩沖液)將紅細(xì)胞膜蛋白稀釋為3pg/ml， 按每孔100ul加入到酶聯(lián)板的小孔中，酶聯(lián)板購(gòu)自丹麥的COSTAR公司，在4'C條件下孵育 18-24小時(shí)后去除上清液，封閉并干燥，然后冷藏，至此包被了紅細(xì)胞D抗原的酶聯(lián)板制備 完畢。
包被緩沖液(PH9.6， 0.05M碳酸鹽緩沖液)的配制方法 Na2C03 1.59克 NaHC032.93克 加蒸餾水至1000ml


圖1是8X12條分布8孔為一個(gè)檢測(cè)單位，分別為陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照和空白對(duì)照，以及 針對(duì)各抗原的5個(gè)孔，檢測(cè)陽(yáng)性可以根據(jù)空白對(duì)照的OD值計(jì)算例如cutoff-nX空白對(duì)照 0D。
權(quán)利要求
1、一種用于檢測(cè)血清中不規(guī)則抗體的ELISA試劑盒，包含a)、酶聯(lián)板，之上已經(jīng)包被了純化后的紅細(xì)胞表面抗原D、E、e、C、c；b)、不與上述抗原反應(yīng)的人血清，作為陰性對(duì)照；和c)、作為陽(yáng)性對(duì)照的人血清，每一種與上述抗原之一特異性反應(yīng)。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1的試劑盒，進(jìn)一步包含稀釋液和清洗溶液、結(jié)合物溶液、底物緩沖液、底 物和終止溶液。
3、 根據(jù)權(quán)利要求2的試劑盒，其中所述的稀釋和清洗溶液包含磷酸鹽緩沖液。
4、 根據(jù)權(quán)利要求2的試劑盒，其中所述的結(jié)合物溶液包含辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗人IgG山 羊血清，底物是四甲基聯(lián)苯胺，且該試劑盒進(jìn)一步包含過(guò)氧化氫溶液。
5、 根據(jù)權(quán)利要求2的試劑盒，其中所述的終止液包含硫酸。
6、 根據(jù)權(quán)利要求1的試劑盒，其中所述的紅細(xì)胞表面抗原D、 E、 e、 C、 c的量分別是1. 5-2. 5 Wg蛋白/孔。
7、 根據(jù)權(quán)利要求1的試劑盒，其中向紅細(xì)胞表面抗原D、 E、 e、 C、 c發(fā)生反應(yīng)的孔中加入 25倍稀釋的血清。
8、 一種制備用于檢測(cè)血清中不規(guī)則抗體的試劑盒的方法，其中制備酶聯(lián)板的步驟a) 分離純化紅細(xì)胞D抗原；b) 包被紅細(xì)胞D、 E、 e、 C、 c抗原。
9、 根據(jù)權(quán)利要求8的方法，其中分離純化紅細(xì)胞D抗原的步驟a) 制備用于純化紅細(xì)胞膜蛋白的親合層的柱；b) 低滲法提取紅細(xì)胞膜蛋白；c) 從紅細(xì)胞膜蛋白中純化特異性的D、 E、 e、 C、 c抗原。
全文摘要
本發(fā)明公開了用于檢測(cè)血清中不規(guī)則抗體的ELISA試劑盒及其制備方法，本試劑盒包含酶聯(lián)板，之上已經(jīng)包被了純化后的紅細(xì)胞表面抗原D、E、e、C、c；不與上述抗原反應(yīng)的人血清，作為陰性對(duì)照；和作為陽(yáng)性對(duì)照的人血清，每一種與上述抗原之一特異性反應(yīng)。本發(fā)明的原理是不用紅細(xì)胞作為檢測(cè)試劑，而是提取紅細(xì)胞表面的抗原，純化后包被在酶聯(lián)板上，利用酶聯(lián)免疫分析(ELISA)方法來(lái)檢測(cè)血清中的不規(guī)則抗體，并使用人血清作為其陽(yáng)性或陰性對(duì)照抗體，對(duì)針對(duì)D、E、e、C、c抗原的IgG型抗體同時(shí)檢測(cè)。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)保存期長(zhǎng)、高度特異性、高通量、結(jié)果易于判定以及檢測(cè)方法簡(jiǎn)便易行。
文檔編號(hào)G01N33/543GK101109756SQ20071012046
公開日2008年1月23日 申請(qǐng)日期2007年8月20日 優(yōu)先權(quán)日2007年8月20日
發(fā)明者周明非, 張建耕, 華 徐, 章?lián)P培, 郁成雨, 鮑國(guó)強(qiáng) 申請(qǐng)人:陜西省血液中心;中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院野戰(zhàn)輸血研究所;北京望升偉業(yè)科技發(fā)展有限公司