抗子宮內(nèi)膜抗體化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒及其制備方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種抗子宮內(nèi)膜抗體化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒及其制備方法，抗子宮內(nèi)膜抗體化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒包括：抗子宮內(nèi)膜抗體重組蛋白包被的羧基化的磁微粒和抗人免疫球蛋白標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物。這種抗子宮內(nèi)膜抗體化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒能夠以全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀為檢測(cè)工具，完成抗子宮內(nèi)膜抗體的檢測(cè)這種抗子宮內(nèi)膜抗體化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒，經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)，其檢測(cè)靈敏度達(dá)到1U/L，相對(duì)于傳統(tǒng)的抗子宮內(nèi)膜抗體的檢測(cè)方法靈敏度至少提高了10倍，這種抗子宮內(nèi)膜抗體化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)精度較高。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
抗子宮內(nèi)膜抗體化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及體外檢測(cè)領(lǐng)域，尤其涉及一種抗子宮內(nèi)膜抗體化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑 盒及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 抗子宮內(nèi)膜抗體(AEAb)是一種自身抗體，所針對(duì)的抗原為子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞中 的一種孕激素依賴(lài)蛋白，正常位置的子宮內(nèi)膜對(duì)機(jī)體無(wú)抗原性，但異位的子宮內(nèi)膜可作為 抗原刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)，產(chǎn)生特異抗子宮內(nèi)膜抗體不僅和異位子宮內(nèi)膜發(fā)生抗原抗體反 應(yīng)，同時(shí)也可與正常位置的子宮膜細(xì)胞中的抗原位點(diǎn)相結(jié)合，激活補(bǔ)體系統(tǒng)，局部產(chǎn)生免疫 病理變化，直接影響子宮內(nèi)膜腺體的功能，從而導(dǎo)致孕卵著床失敗或不育，最終以不顯性的 早期流產(chǎn)而告終。因此抗子宮內(nèi)膜抗體檢測(cè)對(duì)臨床診斷與治療不孕不育患者也有重要意 義。
[0003] 目前臨床檢測(cè)抗子宮內(nèi)膜抗體的常見(jiàn)方法有酶聯(lián)免疫吸附法、酶促化學(xué)發(fā)光法， 但這些方法都存在著一些不足之處。
[0004] 一、酶聯(lián)免疫吸附法 酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)被廣泛應(yīng)用，但該方法也存在著下述的不足之處： ⑴使用12X8型、6X8型、8X12型或整板型96孔專(zhuān)用微孔板作為抗原包被用具和反 應(yīng)容器，在使用時(shí)只能分成12批次、6批次、8批次或整板一次使用，無(wú)法進(jìn)行獨(dú)立的、單 人份的檢測(cè)； (2) 定量測(cè)定所用的試劑種類(lèi)較多，每一種檢測(cè)試劑都要用試劑瓶來(lái)盛裝，并且每使 用一種試劑時(shí)都需要更換吸液嘴來(lái)分別加注到微孔板的微孔中，不但試劑瓶種類(lèi)多，加注 試劑的操作也極為繁瑣； (3) 缺少對(duì)檢測(cè)信息的相應(yīng)標(biāo)注，只能通過(guò)查看試劑盒外包裝盒的標(biāo)識(shí)才能了解或知 悉檢測(cè)試劑的生產(chǎn)批號(hào)及有效期信息，而且所知悉的信息在檢測(cè)過(guò)程中不受控，具有很大 的隨意性； (4) 檢測(cè)試劑在檢測(cè)過(guò)程中處于開(kāi)放的空間，容易引起各種試劑之間的交叉污染而影 響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性； (5) 檢測(cè)過(guò)程多采用手工操作，試劑或樣本的加量不很精確，操作過(guò)程極為繁瑣和復(fù) 雜，容易發(fā)生操作差錯(cuò)，檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度和精密度較差； (6) 在檢測(cè)項(xiàng)目成套試劑的數(shù)量配置及使用上均為項(xiàng)目數(shù)X 48/96人份，如果需要檢 測(cè)10個(gè)項(xiàng)目，則試劑的配置及使用數(shù)須為10X48/96人份，如果只有一份樣本需要檢測(cè)10 個(gè)不同的項(xiàng)目，也需要配置10 X 48/96人份的試劑，存在著不夠經(jīng)濟(jì)合理的缺點(diǎn)。
[0005] 二、化學(xué)發(fā)光法 化學(xué)發(fā)光法按發(fā)光原理可分為直接化學(xué)發(fā)光和酶促化學(xué)發(fā)光。
[0006] 酶促化學(xué)發(fā)光主要有辣根過(guò)氧化物酶(HRP)和堿性磷酸酶兩種，但都有一定的局 限性，辣根過(guò)氧化物酶主要缺點(diǎn)為:魯米諾在沒(méi)有辣根過(guò)氧化物酶存在情況下，也會(huì)被H202 氧化自身發(fā)光，本底相對(duì)較高，影響信噪比，反應(yīng)動(dòng)力學(xué)復(fù)雜，影響因素多，結(jié)果不夠穩(wěn)定， 要得到靈敏度高且平臺(tái)期長(zhǎng)的底物不容易。堿性磷酸酶主要缺點(diǎn)為:底物達(dá)到平臺(tái)期的時(shí) 間長(zhǎng)，底物成本高，導(dǎo)致檢測(cè)成本高，患者負(fù)擔(dān)重。
[0007] 吖啶酯作為標(biāo)記物的直接化學(xué)發(fā)光相比酶促化學(xué)發(fā)光具有明細(xì)優(yōu)勢(shì)，主要表現(xiàn) 在:反應(yīng)不需要催化劑，只要堿性環(huán)境即可進(jìn)行，反應(yīng)迅速，背景發(fā)光低，信噪比高，干擾因 素少，試劑穩(wěn)定性好，可以?xún)牲c(diǎn)定標(biāo)，體系簡(jiǎn)單，激發(fā)液成本低，吖啶酯易與蛋白質(zhì)聯(lián)結(jié)，且 聯(lián)結(jié)后光子產(chǎn)率不減少。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 基于此，有必要提供一種檢測(cè)靈敏度較高的抗子宮內(nèi)膜抗體化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試 劑盒及其制備方法。
[0009] -種抗子宮內(nèi)膜抗體化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒，包括:抗子宮內(nèi)膜抗體重組蛋白 包被的羧基化的磁微粒和抗人免疫球蛋白標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物。
[0010] 在一個(gè)實(shí)施例中，所述抗子宮內(nèi)膜抗體重組蛋白包被的羧基化的磁微粒中，所述 抗子宮內(nèi)膜抗體重組蛋白與所述羧基化的磁微粒的比例為1:25~35。
[0011] 在一個(gè)實(shí)施例中，所述抗人免疫球蛋白標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物中，所述抗人免疫 球蛋白與所述化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物的比例為50:1~10。
[0012]在一個(gè)實(shí)施例中，所述羧基化的磁微粒的粒徑為〇.〇5ym~lym。
[0013] 在一個(gè)實(shí)施例中，所述化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物為魯米諾、異魯米諾、三聯(lián)吡啶釕或吖啶 酯。
[0014] 在一個(gè)實(shí)施例中，還包括化學(xué)發(fā)光底物液，所述化學(xué)發(fā)光底物液包括A液和B液。
[0015] 在一個(gè)實(shí)施例中，所述A液為H202溶液，所述B液為NaOH溶液。
[0016] 在一個(gè)實(shí)施例中，還包括抗子宮內(nèi)膜抗體定標(biāo)品。
[0017] 在一個(gè)實(shí)施例中，所述抗子宮內(nèi)膜抗體定標(biāo)品為濃度分別為1U/L、10U/L、100U/L、 500U/L、1000U/L和2000U/L的抗子宮內(nèi)膜抗體的溶液。
[0018] -種上述的抗子宮內(nèi)膜抗體化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒的制備方法，包括如下步 驟： 取羧基化的磁微粒的懸浮液，磁分離去上清后用MES緩沖液重懸，接著加入EDC水溶液， 活化羧基化的磁微粒的表面羧基，接著加入抗子宮內(nèi)膜抗體重組蛋白，室溫下混懸2h~10h， 磁分離去除上清后用Tris緩沖液重懸，得到抗子宮內(nèi)膜抗體重組蛋白包被的羧基化的磁微 粒；以及 取抗人免疫球蛋白，加入碳酸鹽緩沖液后混勻，然后加入化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物后混勻，室溫 下避光反應(yīng)lh~2h后除雜，得到抗人免疫球蛋白標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物。
[0019]這種抗子宮內(nèi)膜抗體化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒能夠以全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析 儀為檢測(cè)工具，完成抗子宮內(nèi)膜抗體的檢測(cè)這種抗子宮內(nèi)膜抗體化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑 盒，經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)，其檢測(cè)靈敏度達(dá)到1U/L，相對(duì)于傳統(tǒng)的抗子宮內(nèi)膜抗體的檢測(cè)方法靈敏度至 少提高了 10倍，這種抗子宮內(nèi)膜抗體化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)精度較高。
[0020]
【附圖說(shuō)明】
[0021]圖1為一實(shí)施方式的抗子宮內(nèi)膜抗體化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒的制備方法的流程 圖； 圖2為實(shí)施例3得到的抗子宮內(nèi)膜抗體標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)圖。
[0022]
【具體實(shí)施方式】
[0023] 為使本發(fā)明的上述目的、特征和優(yōu)點(diǎn)能夠更加明顯易懂，下面結(jié)合附圖和具體實(shí) 施例對(duì)本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】做詳細(xì)的說(shuō)明。在下面的描述中闡述了很多具體細(xì)節(jié)以便于 充分理解本發(fā)明。但是本發(fā)明能夠以很多不同于在此描述的其它方式來(lái)實(shí)施，本領(lǐng)域技術(shù) 人員可以在不違背本發(fā)明內(nèi)涵的情況下做類(lèi)似改進(jìn)，因此本發(fā)明不受下面公開(kāi)的具體實(shí)施 的限制。
[0024] -實(shí)施方式的抗子宮內(nèi)膜抗體化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒，包括:抗子宮內(nèi)膜抗體 重組蛋白包被的羧基化的磁微粒和抗人免疫球蛋白標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物。
[0025]優(yōu)選的，抗子宮內(nèi)膜抗體重組蛋白包被的羧基化的磁微粒中，抗子宮內(nèi)膜抗體重 組蛋白與羧基化的磁微粒的比例為1:25~35。
[0026]優(yōu)選的，抗人免疫球蛋白標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物中，抗人免疫球蛋白與化學(xué)發(fā)光 標(biāo)記物的比例為50:1~10。
[0027] 優(yōu)選的，羧基化的磁微粒的粒徑為0.05wii~lym。
[0028] 化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物可以為魯米諾、異魯米諾、三聯(lián)吡啶釕或吖啶酯。其中，化學(xué)發(fā)光 標(biāo)記物優(yōu)選為吖啶酯。
[0029] 在其他的實(shí)施例中，上述抗子宮內(nèi)膜抗體化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒還包括化學(xué)發(fā) 光底物液。
[0030] 化學(xué)發(fā)光底物液包括A液和B液。A液可以為H202溶液，B液可以為NaOH溶液。
[0031] 本實(shí)施例中，A液為濃度為0. lmol/L的H202溶液，B液為濃度為0.25mol/L的NaOH溶 液。
[0032]在其他的實(shí)施例中，上述抗子宮內(nèi)膜抗體化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒還包括抗子宮 內(nèi)膜抗體定標(biāo)品。
[0033] 抗子宮內(nèi)膜抗體定標(biāo)品為濃度分別為1U/L、10U/L、100U/L、500U/L、1000U/I^P 2000U/L的抗子宮內(nèi)膜抗體的溶液。
[0034] 具體的，抗子宮內(nèi)膜抗體定標(biāo)品可以采用標(biāo)準(zhǔn)品緩沖液將抗子宮內(nèi)膜抗體配制成 濃度分別為1U/L、10U/L、100U/L、500U/L、1000U/L和2000U/L的抗子宮內(nèi)膜抗體的溶液。
[0035] 這種抗子宮內(nèi)膜抗體化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒用于抗子宮內(nèi)膜抗體檢測(cè)時(shí)，利用 全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀對(duì)抗子宮內(nèi)膜抗體定標(biāo)品進(jìn)行檢測(cè)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，內(nèi)置于電 腦軟件;接著測(cè)試實(shí)際樣本，根據(jù)樣本發(fā)光值計(jì)算樣本濃度;最后對(duì)抗子宮內(nèi)膜抗體全自動(dòng) 化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)進(jìn)行性能(靈敏度、線(xiàn)性、精密度、干擾性)的評(píng)價(jià)。
[0036] 這種抗子宮內(nèi)膜抗體化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒能夠以全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析 儀為檢測(cè)工具，完成抗子宮內(nèi)膜抗體的檢測(cè)這種抗子宮內(nèi)膜抗體化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑 盒，經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)，其檢測(cè)靈敏度達(dá)到1U/L，相對(duì)于傳統(tǒng)的抗子宮內(nèi)膜抗體的檢測(cè)方法靈敏度至 少提高了 10倍，這種抗子宮內(nèi)膜抗體化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)精度較高。
[0037]此外，這種抗子宮內(nèi)膜抗體化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒還具有以下優(yōu)點(diǎn)： 1、 選擇吖啶酯作為標(biāo)記材料，并應(yīng)用于化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)，該發(fā)光體系為直接化 學(xué)發(fā)光，與傳統(tǒng)的酶促化學(xué)發(fā)光相比，該反應(yīng)不需要酶的參與，更加節(jié)約成本； 2、 選用吖啶酯的化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)線(xiàn)性范圍寬，能達(dá)到1U/L~1000U/L，而傳統(tǒng)的 抗子宮內(nèi)膜抗體的檢測(cè)方法的檢線(xiàn)性范圍為20U/L~1000U/L; 3、 吖啶酯化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)重復(fù)性高，批內(nèi)及批間差均在5%以?xún)?nèi)，這是其它化學(xué) 發(fā)光免疫分析系統(tǒng)難以達(dá)到的； 4、 化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)已實(shí)現(xiàn)樣本的定量，通過(guò)內(nèi)置標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)到測(cè)試軟件，只需測(cè) 試樣本就可直接得到樣本的濃度值； 5、 化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)可以實(shí)現(xiàn)全自動(dòng)化，試劑及樣本的添加全有儀器完成，操作 更加簡(jiǎn)便，減少了人為的誤差。
[0038]如圖1所示的上述抗子宮內(nèi)膜抗體化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒的制備方法，包括如 下步驟： 取羧基化的磁微粒的懸浮液，磁分離去上清后用MES緩沖液重懸，接著加入EDC水溶液， 活化羧基化的磁微粒的表面羧基，接著加入抗子宮內(nèi)膜抗體重組蛋白，室溫下混懸2h~10h， 磁分離去除上清后用Tris緩沖液重懸，得到抗子宮內(nèi)膜抗體重組蛋白包被的羧基化的磁微 粒。
[0039] MES(2-(N-嗎啡啉）乙磺酸)緩沖液的濃度為0.02M，pH為5.5。
[0040] Tris緩沖液的濃度為0.1M并且含有2%BSA，pH為8.0。
[00411 EDC(1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基）-碳化二亞胺）水溶液的濃度為10mg/mL~20mg/ mL，EDC與羧基化的磁微粒的比例為0.05:0.1~1。
[0042]優(yōu)選的，抗子宮內(nèi)膜抗體重組蛋白包被的羧基化的磁微粒中，抗子宮內(nèi)膜抗體重 組蛋白與羧基化的磁微粒的比例為1:25~35。
[0043]優(yōu)選的，羧基化的磁微粒的粒徑為0.05M1~lym。
[0044]取抗人免疫球蛋白，加入碳酸鹽緩沖液后混勻，然后加入化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物后混勻， 室溫下避光反應(yīng)lh~2h后除雜，得到抗人免疫球蛋白標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物。
[0045] 碳酸鹽緩沖液濃度為0. lM，pH為9.0~9.5， 除雜的操作為離心脫鹽柱脫鹽，具體操作為：先分別用純凈水及TBS緩沖液（40 mM Tris-HCl，0.5% BSA，1% NaCl，pH 8.0)處理離心脫鹽柱，最后加入得到的抗子宮內(nèi)膜抗體 重組蛋白包被的羧基化的磁微粒的溶液，最后收集離心管中的液體。
[0046]優(yōu)選的，抗人免疫球蛋白標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物中，抗子宮內(nèi)膜抗體重組蛋白與 化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物的比例為50:1~10。
[0047] 化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物可以為魯米諾、異魯米諾、三聯(lián)吡啶釕或吖啶酯。其中，化學(xué)發(fā)光 標(biāo)記物優(yōu)選為吖啶酯。
[0048] 得到的抗子宮內(nèi)膜抗體重組蛋白包被的羧基化的磁微粒和抗人免疫球蛋白標(biāo)記 的化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物組合即可得到上述抗子宮內(nèi)膜抗體化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒。
[0049] 這種抗子宮內(nèi)膜抗體化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒在使用時(shí)，還需要化學(xué)發(fā)光底物液 和抗子宮內(nèi)膜抗體定標(biāo)品。
[0050] 化學(xué)發(fā)光底物液和抗子宮內(nèi)膜抗體定標(biāo)品可以自行配制得到。
[0051 ] 化學(xué)發(fā)光底物液包括A液和B液。A液可以為H2〇2溶液，B液可以為NaOH溶液。
[0052] 本實(shí)施例中，A液為濃度為0. lmol/L的H2〇2溶液，B液為濃度為0.25mol/L的NaOH溶 液。
[0053]具體的，抗子宮內(nèi)膜抗體定標(biāo)品可以采用標(biāo)準(zhǔn)品緩沖液將抗子宮內(nèi)膜抗體配制成 濃度分別為1U/L、10U/L、100U/L、500U/L、1000U/L和2000U/L的抗子宮內(nèi)膜抗體的溶液。
[0054] 這種抗子宮內(nèi)膜抗體化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒的制備方法簡(jiǎn)單方便，制得的抗子 宮內(nèi)膜抗體化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)靈敏度較高，具有良好的應(yīng)用前景。
[0055] 以下為具體實(shí)施例。
[0056] 實(shí)施例1:抗子宮內(nèi)膜抗體化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒的制備 (1)抗子宮內(nèi)膜抗體重組蛋白包被的羧基化的磁微粒的制備： 取含有50mg粒徑為0.05M1~lym的羧基化的磁微粒(MagnaBind21353)懸浮液，磁分離去 上清，用0.02 M，pH為5.5 MES緩沖液重懸，加入lmL新配置的1 Omg/mL的EDC水溶液，活化磁 珠表面羧基，加入4mg抗子宮內(nèi)膜抗體重組蛋白（biorbyt，貨號(hào)orb48780)，室溫下混懸6h， 磁分離，去除上清，用含2%BSA的0. lM，pH為8.0的Tris緩沖液重懸到lmg/mL，得到抗子宮內(nèi) 膜抗體重組蛋白包被的羧基化的磁微粒，每瓶5mL分裝保存于4°C備用。
[0057] (2)抗人免疫球蛋白標(biāo)記的吖啶酯的制備： 取50yL濃度為25mg/mL的抗人免疫球蛋白，加入150yL濃度為0. lM、pH為9.0~9.5的碳酸 鹽緩沖液，混勻，然后加入1.5yL濃度為5mg/mL的吖啶酯溶液混勻，室溫下避光反應(yīng)，1.5h后 取出，用2mL的zeba離心脫鹽柱脫鹽處理，脫鹽過(guò)程中首先分別用純凈水及TBS緩沖液進(jìn)行 處理，最后加入得到的抗人免疫球蛋白標(biāo)記的吖啶酯溶液，收集離心管中的液體至保存管 得到抗人免疫球蛋白標(biāo)記的吖啶酯，每瓶5mL分裝保存于4°C備用。
[0058] (3)抗子宮內(nèi)膜抗體定標(biāo)品的制備： 用標(biāo)準(zhǔn)品緩沖液(40 mM Tris-HCl，0.5% BSA，1% NaCl，pH 8.0)將抗子宮內(nèi)膜抗體配 置成濃度為0U/L、10U/L、100U/L、500U/L、1000U/L和2000U/L，每瓶0.5 mL分裝凍干，4 °C保 存?zhèn)溆谩?br>[0059] 實(shí)施例2:抗子宮內(nèi)膜抗體化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)方法 以全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀(YHL0,貨號(hào)iFlash3000)為檢測(cè)工具，方法學(xué)模式為間 接免疫法，即儀器依次加入50此的樣品、50此的抗子宮內(nèi)膜抗體重組蛋白包被的羧基化 的磁微粒以及50 yL的抗子宮內(nèi)膜抗體處理液，反應(yīng)20 min后，再加50 yL的抗人免疫球蛋 白吖啶酯，反應(yīng)20 min后，進(jìn)行磁分離，儀器將反應(yīng)混合物送入暗室，依次加入發(fā)光底物A液 (H202)及B液(NaOH)進(jìn)行發(fā)光反應(yīng)，最后記錄發(fā)光值。
[0060] 實(shí)施例3:抗子宮內(nèi)膜抗體化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒性能評(píng)價(jià) 采用實(shí)施例2中的方法對(duì)抗子宮內(nèi)膜抗體定標(biāo)品進(jìn)行檢測(cè)，得到繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)如圖2所 不。
[0061 ]接著對(duì)接著測(cè)試實(shí)際樣本，根據(jù)樣本發(fā)光值計(jì)算樣本濃度。
[0062]靈敏度的檢測(cè)： 參照CLSI EP17-A文件推薦實(shí)驗(yàn)方案，計(jì)算抗子宮內(nèi)膜抗體化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒 的靈敏度，求得的靈敏度為1U/L。
[0063]線(xiàn)性的檢測(cè)： 對(duì)濃度為1U/L、10U/L、100U/L、500U/L、1000U/L和2000U/L標(biāo)準(zhǔn)品做線(xiàn)性分析，計(jì)算線(xiàn) 性相關(guān)系數(shù)，r=0.9996，另外，該試劑盒對(duì)抗子宮內(nèi)膜抗體樣品檢測(cè)的線(xiàn)性范圍為1U/L~ 1000U/L。
[0064]精密度測(cè)定： 取濃度為50U/L及500U/L兩個(gè)抗子宮內(nèi)膜抗體樣品，每個(gè)樣本每個(gè)濃度各做3個(gè)平行， 用三批試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，計(jì)算試劑盒批內(nèi)及批間差，結(jié)果表明該試劑盒批內(nèi)及批間差均小 于5%。
[0065] 干擾性實(shí)驗(yàn)： 取混合血清分別添加干擾物包括:結(jié)合膽紅素、游離膽紅素、血紅蛋白、抗壞血酸、甘油 酯，添加比例按照1:20進(jìn)行，分別測(cè)定混合血清及添加了各種干擾物后混合血清的測(cè)值， 計(jì)算二者之間的偏差，以±10%為可接受范圍。結(jié)果表明，干擾性均達(dá)到NCCLS的文件標(biāo) 準(zhǔn)，可用于臨床實(shí)驗(yàn)室抗子宮內(nèi)膜抗體狀況的準(zhǔn)確評(píng)估。
[0066] 實(shí)施例4、抗子宮內(nèi)膜抗體化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒的對(duì)比實(shí)驗(yàn) 分別用化學(xué)發(fā)光檢測(cè)方法和傳統(tǒng)的酶聯(lián)免疫吸附法對(duì)濃度為0、50U/L的抗子宮內(nèi)膜抗 體樣品做檢測(cè)，兩種方法檢測(cè)靈敏度相比，數(shù)據(jù)如下表所示：
由上表可以看出，化學(xué)發(fā)光檢測(cè)方法的靈敏度較酶聯(lián)免疫吸附法提高了 10倍以上。
[0067] 以上所述實(shí)施例僅表達(dá)了本發(fā)明的幾種實(shí)施方式，其描述較為具體和詳細(xì)，但并不能 因此而理解為對(duì)本發(fā)明專(zhuān)利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)， 在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范 圍。因此，本發(fā)明專(zhuān)利的保護(hù)范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準(zhǔn)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種抗子宮內(nèi)膜抗體化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于，包括:抗子宮內(nèi)膜抗體 重組蛋白包被的羧基化的磁微粒和抗人免疫球蛋白標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗子宮內(nèi)膜抗體化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述 抗子宮內(nèi)膜抗體重組蛋白包被的羧基化的磁微粒中，所述抗子宮內(nèi)膜抗體重組蛋白與所述 羧基化的磁微粒的比例為1:25~35。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗子宮內(nèi)膜抗體化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述 抗人免疫球蛋白標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物中，所述抗子宮內(nèi)膜抗體重組蛋白與所述化學(xué)發(fā)光 標(biāo)記物的比例為50:1~10。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗子宮內(nèi)膜抗體化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述 羧基化的磁微粒的粒徑為〇. 〇5μηι~Ιμπι。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗子宮內(nèi)膜抗體化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述 化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物為魯米諾、異魯米諾、三聯(lián)吡啶釕或吖啶酯。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗子宮內(nèi)膜抗體化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于，還包 括化學(xué)發(fā)光底物液，所述化學(xué)發(fā)光底物液包括Α液和Β液。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的抗子宮內(nèi)膜抗體化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述 A液為H2〇2溶液，所述B液為NaOH溶液。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗子宮內(nèi)膜抗體化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于，還包 括抗子宮內(nèi)膜抗體定標(biāo)品。9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的抗子宮內(nèi)膜抗體化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述 抗子宮內(nèi)膜抗體定標(biāo)品為濃度分別為1U/L、10U/L、100U/L、500U/L、1000U/L和2000U/L的抗 子宮內(nèi)膜抗體的溶液。10. -種根據(jù)權(quán)利要求1~9中任一項(xiàng)所述的抗子宮內(nèi)膜抗體化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒 的制備方法，其特征在于，包括如下步驟： 取羧基化的磁微粒的懸浮液，磁分離去上清后用MES緩沖液重懸，接著加入EDC水溶液， 活化羧基化的磁微粒的表面羧基，接著加入抗子宮內(nèi)膜抗體重組蛋白，室溫下混懸2h~10h， 磁分離去除上清后用Tris緩沖液重懸，得到抗子宮內(nèi)膜抗體重組蛋白包被的羧基化的磁微 粒；以及取抗人免疫球蛋白，加入碳酸鹽緩沖液后混勻，然后加入化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物后混勻， 室溫下避光反應(yīng)lh~2h后除雜，得到抗人免疫球蛋白標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物。
【文檔編號(hào)】G01N33/543GK106053836SQ201610503834
【公開(kāi)日】2016年10月26日
【申請(qǐng)日】2016年6月30日
【發(fā)明人】夏福臻, 代洪飛, 錢(qián)純亙, 王剛, 祝亮
【申請(qǐng)人】深圳市亞輝龍生物科技股份有限公司