血小板蛋白gmp-140一步法快速檢測試劑盒的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實(shí)用新型屬于生物檢測試劑盒技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種血小板蛋白GMP-140—步法快速檢測試劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002]出血性疾病在臨床上是一種非常常見的疾病，如果得不到及時確診治療，則可能導(dǎo)致劇烈疼痛、嚴(yán)重關(guān)節(jié)損傷以及致命的內(nèi)出血從而導(dǎo)致死亡，而全世界僅有30%的出血性疾病患者得到了確診。免疫性血小板減少癥(ITP)是臨床最為常見的出血性疾病，約占出血性疾病總數(shù)的30%，歐美國家年發(fā)病率為5-10/10萬人口?？砂l(fā)生在任何年齡階段，分急性及慢性倆種，急性多見于兒童，慢性多見于成人，以40歲以下女性常見，65歲以上老年發(fā)病率呈上升趨勢。臨床表現(xiàn)以皮膚的瘀點(diǎn)及瘀斑，粘膜及內(nèi)臟出血為特征。根據(jù)2010年世界血友聯(lián)盟調(diào)查數(shù)據(jù)顯示ITP患病率約為千分之一，中國約有150萬患者。ITP是由機(jī)體免疫系統(tǒng)功能紊亂引起血小板破壞增加，從而導(dǎo)致血小板數(shù)目減少的自身免疫性出血性疾病，主要是由于血小板特異性自身抗體介導(dǎo)的血小板破壞引起的血小板數(shù)量減少，故血小板特異性自身抗體的檢測對ITP的診斷有重要的臨床應(yīng)用價值。
【實(shí)用新型內(nèi)容】
[0003]本實(shí)用新型的目的是提供一種血小板蛋白GMP-140—步法快速檢測試劑盒，可快速檢測血小板蛋白GMP-140，靈敏度高、特異性好、漏診率低，操作簡單方便。
[0004]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本實(shí)用新型所采用的技術(shù)方案是:一種血小板蛋白GMP-140—步法快速檢測試劑盒，包括盒體和蓋體，蓋體從盒體開口的一側(cè)密封盒體，蓋體上設(shè)有多個觀察窗，每個觀察窗均分為測試T區(qū)和質(zhì)控C區(qū)，盒體的一端裸露有多個檢測帶，一個檢測帶對應(yīng)一個觀察窗，檢測帶上包被有抗GMP-140單克隆抗體的微球和FITC標(biāo)記的羊抗人多克隆抗體。
[0005]優(yōu)選的，所述盒體與蓋體采用搭扣的方式扣合。
[0006]優(yōu)選的，所述盒體為一端呈方形、另一端呈圓弧形的形狀，檢測帶從盒體的方形的一端伸出，蓋體的形狀與盒體的形狀相適應(yīng)。
[0007]優(yōu)選的，所述蓋體的圓弧形的一端設(shè)有便于捏持的凸紋。
[0008]優(yōu)選的，所述盒體的一外側(cè)壁上設(shè)有名片卡位槽。
[0009]優(yōu)選的，所述微球的材質(zhì)為聚苯乙烯。
[0010]優(yōu)選的，所述觀察窗和檢測帶的數(shù)量均為兩個。
[0011]其中，流式微球技術(shù)(cytometric bead array，CBA)是基于流式細(xì)胞術(shù)發(fā)展起來的新技術(shù)，它以聚苯乙烯微球?yàn)榉磻?yīng)界面，利用特異性單克隆抗體包被后即可俘獲一些小分子物質(zhì)，通過檢測微球的“放大”作用對這些小分子物質(zhì)進(jìn)行檢測。近年來，CBA正越來越多的應(yīng)用于血清、血漿、培養(yǎng)細(xì)胞上清、眼淚或房水等各種液相中可溶性蛋白及細(xì)胞因子的檢測。
[0012]血小板特異性自身抗體介導(dǎo)的血小板破壞是經(jīng)典的ITP發(fā)病機(jī)制。約50%?60 %的ITP患者血小板表面結(jié)合有IgG型自身抗體，可識別血小板表面的I種或多種GP，包括GP Πb/ma,GPIb/IX，Ia/Π a，IV，V等。其中約75%的血小板抗體都位于血小板膜GPΠ b/nia，GPIb/IX復(fù)合體上。血小板自身抗體引起血小板破壞加速的可能機(jī)制:自身抗體結(jié)合在血小板上，一方面抗體分子的Fe段與巨■細(xì)胞的Fe受體(FcR)結(jié)合，導(dǎo)致血小板被吞■破壞；另一方面抗原抗體復(fù)合物可激活補(bǔ)Clq，隨后補(bǔ)體系統(tǒng)各成分相繼被激活，C3裂解產(chǎn)物C3b附著于血小板表面，并與巨噬細(xì)胞的C3b受體結(jié)合，也導(dǎo)致血小板吞噬破壞。個別患者血小板自身抗體不僅導(dǎo)致血小板破壞，還可能引起血小板功能異常。
[0013]包被抗GPIX(單抗 SZl)、GPIb(單抗 SZ2)、抗 GPIIb(單抗 SZ22)、抗 GPma(單抗SZ21)、抗GMP-140(單抗SZ51)單克隆抗體的微球可捕獲血小板特異性抗原抗體復(fù)合物，在加入FITC標(biāo)記的羊抗人多克隆抗體后，流式細(xì)胞儀上檢測平均熒光強(qiáng)度值(Meanfluorescence intensity，MFI)可反映患者血小板糖蛋白特異性自身抗體情況，從而實(shí)現(xiàn)ITP的診斷。
[0014]上述抗GMP-140單克隆抗體的微球的制備過程如下:
[0015](a)微球的制備:采用微乳聚合法制備粒徑為50_1000nm的聚苯乙烯微球，所述微球表面帶有羧基、氨基、醛基、溴乙酰基、碘乙?；?、硫醇基和環(huán)氧基中的一種或多種或不帶基團(tuán)；
[0016](b)抗GMP-140單克隆抗體的微球的制備:用緩沖液稀釋步驟(I)制備完成的微球，加入碳二亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺，于搖床上活化后，離心處理，去除上清液，加入緩沖液對沉淀復(fù)溶，然后加入抗GMP-140單克隆抗體，于搖床上偶聯(lián)，然后加入乙醇胺和牛血清白蛋白，密封過夜，最后離心處理，去除上清液，再用緩沖液對沉淀復(fù)溶，超聲處理，制得抗GMP-140單克隆抗體的微球。
[0017]采用上述技術(shù)方案后，本實(shí)用新型具有以下積極效果:
[0018]本實(shí)用新型中的血小板特異性自身抗體檢測試劑盒(流式微球法)專供檢測ITP與非免疫性血小板減少患者血小板膜表面的GMP-140自身抗體，該產(chǎn)品采用了流式微球技術(shù)，使用的抗體原料質(zhì)量符合國家標(biāo)準(zhǔn)要求。產(chǎn)品性能指標(biāo)符合國標(biāo)，靈敏度高、特異性好、漏診率低、操作簡單方便，優(yōu)于目前在使用的血小板相關(guān)抗體檢測，可替代MAIPA作為一種新的實(shí)用的易于推廣的實(shí)驗(yàn)方法。
【附圖說明】
[0019]圖1為本實(shí)用新型的血小板蛋白GMP-140—步法快速檢測試劑盒的俯視圖；
[0020]圖2為本實(shí)用新型的血小板蛋白GMP-140—步法快速檢測試劑盒的主視圖。
[0021]其中:1、盒體，2、蓋體，3、觀察窗，4、檢測帶，5、凸紋，6、名片卡位槽。
【具體實(shí)施方式】
[0022]下面結(jié)合附圖和【具體實(shí)施方式】對本實(shí)用新型作進(jìn)一步詳細(xì)說明。
[0023]如圖1-2所示，為本實(shí)用新型的血小板蛋白GMP-140—步法快速檢測試劑盒，包括盒體I和用于密封盒體I開口一側(cè)的蓋體2，盒體I與蓋體2采用搭扣的方式扣合。盒體I為一端呈方形、另一端呈圓弧形的形狀，蓋體2的形狀與盒體I的形狀相適應(yīng)。
[0024]蓋體2上設(shè)有多個觀察窗3，每個觀察窗3均分為檢測T區(qū)和質(zhì)控C區(qū)，盒體I的一端裸露有多個檢測帶4，檢測帶4從盒體I的方形的一端伸出，檢測帶4上包被有抗GMP-140單克隆抗體的微球和FITC標(biāo)記的羊抗人多克隆抗體，一個觀察窗3對應(yīng)一個檢測帶4。其中，微球的材質(zhì)為聚苯乙烯。使用時，將檢測帶4伸入待檢測的血小板樣品中，與抗GMP-140單克隆抗體發(fā)生特異性反應(yīng)，最終被FITC標(biāo)記顯示，從而檢測是否攜帶有血小板蛋白GMP-140。
[0025]蓋體2的圓弧形的一端設(shè)有凸紋5，凸紋5便于人手捏持。
[0026]盒體I的一外側(cè)壁上設(shè)有名片卡位槽6，名片卡位槽6的設(shè)置是為了便于能夠插入記載信息的名片，便于記錄檢測結(jié)果信息。
[0027]對本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，可根據(jù)以上描述的技術(shù)方案以及構(gòu)思，做出其它各種相應(yīng)的改變以及形變，而所有的這些改變以及形變都應(yīng)該屬于本實(shí)用新型要求的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種血小板蛋白GMP-140—步法快速檢測試劑盒，其特征在于:包括盒體(I)和蓋體(2)，蓋體(2)從盒體(I)開口的一側(cè)密封盒體(I)，蓋體(2)上設(shè)有多個觀察窗(3)，每個觀察窗(3)均分為測試T區(qū)和質(zhì)控C區(qū)，盒體(I)的一端裸露有多個檢測帶(4)，一個檢測帶(4)對應(yīng)一個觀察窗(3)，檢測帶(4)上包被有抗GMP-140單克隆抗體的微球和FITC標(biāo)記的羊抗人多克隆抗體。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的血小板蛋白GMP-140—步法快速檢測試劑盒，其特征在于:盒體(I)與蓋體(2)采用搭扣的方式扣合。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的血小板蛋白GMP-140—步法快速檢測試劑盒，其特征在于:盒體(I)為一端呈方形、另一端呈圓弧形的形狀，檢測帶(4)從盒體(I)的方形的一端伸出，蓋體(2)的形狀與盒體(I)的形狀相適應(yīng)。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的血小板蛋白GMP-140—步法快速檢測試劑盒，其特征在于:蓋體(2)的圓弧形的一端設(shè)有便于捏持的凸紋(5)。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的血小板蛋白GMP-140—步法快速檢測試劑盒，其特征在于:盒體(I)的一外側(cè)壁上設(shè)有名片卡位槽(6)。6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的血小板蛋白GMP-140—步法快速檢測試劑盒，其特征在于:所述微球的材質(zhì)為聚苯乙稀。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的血小板蛋白GMP-140—步法快速檢測試劑盒，其特征在于:觀察窗(3)和檢測帶(4)的數(shù)量均為兩個。
【專利摘要】本實(shí)用新型屬于生物檢測試劑盒技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種血小板蛋白GMP-140一步法快速檢測試劑盒，包括盒體和蓋體，蓋體從盒體開口的一側(cè)密封盒體，蓋體上設(shè)有觀察窗和加樣孔，觀察窗分為測試T區(qū)和質(zhì)控C區(qū)，盒體內(nèi)容置有一檢測帶，檢測帶上包被有抗GMP-140單克隆抗體的微球和FITC標(biāo)記的羊抗人多克隆抗體。本實(shí)用新型的試劑盒，可快速檢測血小板蛋白GMP-140，靈敏度高、特異性好、漏診率低，操作簡單方便。
【IPC分類】G01N33/68
【公開號】CN205229164
【申請?zhí)枴緾N201520997685
【發(fā)明人】錢曉錦
【申請人】常州福隆生物有限公司
【公開日】2016年5月11日
【申請日】2015年12月4日