專(zhuān)利名稱(chēng)：一種熒光假單胞菌及其在促進(jìn)中國(guó)楓香生長(zhǎng)中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物肥料領(lǐng)域中的微生物肥料技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種中國(guó)楓香根際高效解磷熒光假單胞菌及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
中國(guó)楓香(Liquidambar formosana)為金縷梅科楓香亞科楓香屬的高大落葉喬木，別名為楓木、黑飯木、香楓等。是我國(guó)重要的鄉(xiāng)土樹(shù)種，也是亞熱帶地區(qū)優(yōu)良速生落葉闊葉樹(shù)種，其適應(yīng)性廣、生長(zhǎng)迅速，為典型的荒山先鋒樹(shù)種。維護(hù)地力效果明顯，生態(tài)效益好，是人工林樹(shù)種結(jié)構(gòu)調(diào)整的首選樹(shù)種之一，也是很有潛力的造林綠化樹(shù)種。在觀賞、藥用、用材等方面都具有重要作用。近年來(lái)，楓香在生產(chǎn)、科研上備受重視。中國(guó)楓香生長(zhǎng)快，耗水耗費(fèi)量大，種植楓香的林地往往容易導(dǎo)致土壤養(yǎng)分缺乏。就影響楓香生長(zhǎng)的養(yǎng)分因素來(lái)看，土壤中有效磷含量高低是制約楓香生長(zhǎng)的重要因素之一。 隨著對(duì)木材需求量的巨增，森林資源的逐步匱乏，速生楓香的種植量明顯上升。最初僅作為觀賞樹(shù)種和科研林木，后來(lái)逐漸被引種為綠化樹(shù)種，現(xiàn)在作為緩解木材和林產(chǎn)品需求緊張的主要樹(shù)種，楓香被廣泛種植。楓香具有重要的經(jīng)濟(jì)和生態(tài)價(jià)值。磷是植物生長(zhǎng)所需的重要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，植物能夠直接吸收的磷很少，故磷常常成為植物營(yíng)養(yǎng)的限制因素。溶磷微生物廣泛分布于土壤，是一類(lèi)能夠減少磷肥固定、提高磷肥利用率和溶解土壤難溶磷的微生物群，在轉(zhuǎn)化土壤難溶磷，保持土壤磷平衡，提高磷肥利用率，促進(jìn)作物生長(zhǎng)等方面發(fā)揮著重要的作用，已經(jīng)被世界公認(rèn)為廉價(jià)高效環(huán)保型的土壤磷活化的生物措施(畢江濤，2009)。磷的釋放主要與土壤pH值、土壤氧化還原反應(yīng)、微生物分泌物以及有機(jī)物質(zhì)的分解等因素有關(guān)，是多種因子綜合作用的結(jié)果(杜振宇，2010 ;楊苞梅，2010)。解磷細(xì)菌作為土壤磷循環(huán)中一類(lèi)重要的微生物，能夠改善中國(guó)楓香的磷素供應(yīng)，加快中國(guó)楓香的生長(zhǎng)。目前，有關(guān)中國(guó)楓香根際高效解磷細(xì)菌菌株的篩選及應(yīng)用研究未見(jiàn)報(bào)道。因此提高土壤有效磷含量就有十分重大的意義，并成為眾多學(xué)者熱點(diǎn)關(guān)注的核心問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種中國(guó)楓香根際高效解磷熒光假單胞菌。本發(fā)明還要解決的一個(gè)技術(shù)問(wèn)題是提供上述中國(guó)楓香根際高效解磷熒光假單胞菌的應(yīng)用。為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下2011年4月23日，從安徽省黃山市稽靈山公園中國(guó)楓香根際土壤中，篩選獲得了一株高效解磷突光假單胞菌Pseudomonas fluorescens FXW-HS7A。保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，地址中國(guó).武漢.武漢大學(xué)，郵編430072，菌種保藏號(hào)CCTCC M 2012260，保藏日為2012年7月I日。CCTCC M 2012260菌株的主要生物學(xué)特征在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基平板上，菌落較小，淺黃，圓形；菌體直桿狀，革蘭氏染色陰性，大小約O. 43X0. 64μ πΓ . 89X2. 00 μ m，無(wú)
芽孢，有鞭毛；好氧，氧化酶反應(yīng)陽(yáng)性，接觸酶試驗(yàn)陽(yáng)性，淀粉水解陰性，M.R.和吲哚試驗(yàn)陰性，V. P.試驗(yàn)陽(yáng)性；明膠液化陽(yáng)性，硝酸還原試驗(yàn)陰性，產(chǎn)氨和硫化氫試驗(yàn)陰性，檸檬酸鹽生長(zhǎng)試驗(yàn)陽(yáng)性。CCTCC M 2012260 菌株 16SrDNA 基因序列，見(jiàn) SEQ ID No. I 所示。將所測(cè) 16SrDNA序列與GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中的序列進(jìn)行BLAST比對(duì)，結(jié)果表明菌株CCTCC M2012260與假單胞菌屬(Pseudomonas)同源性都很高,與P. fluorescens的相似度為99%。結(jié)合形態(tài)、生理生化特征及16SrDNA序列分析,鑒定為突光假單胞菌(Pseudomonas fluorescens)。CCTCC M 2012260菌株可將土壤中難溶性無(wú)機(jī)磷轉(zhuǎn)變?yōu)橛行B(tài)磷供中國(guó)楓香吸收，促進(jìn)中國(guó)楓香生長(zhǎng)。有益效果本發(fā)明的中國(guó)楓香根際高效解磷熒光假單胞菌在液體搖培的情況下， 對(duì)難溶性磷酸鹽磷酸三鈣(Ca3 (PO4) 2)、磷酸鐵(FePO4 · 4H20)、磷酸鋁(AlPO4)和羥基磷灰石(Ca10 (PO4) 6 (OH) 2)具有較強(qiáng)的溶解效果，與對(duì)照(CK)相比，差異極顯著；本發(fā)明的中國(guó)楓香根際高效解磷熒光假單胞菌制成菌劑接種中國(guó)楓香實(shí)生苗。結(jié)果表明，該菌劑能明顯促進(jìn)中國(guó)楓香的生長(zhǎng)發(fā)育，因此，本發(fā)明為將來(lái)開(kāi)發(fā)中國(guó)楓香專(zhuān)用微生物肥料提供了優(yōu)良的菌株資源。


突光假單胞菌Pseudomonas fluorescens FXW-HS7A,保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，地址中國(guó).武漢·武漢大學(xué)，郵編430072，菌種保藏號(hào)CCTCC M 2012260，保藏日為2012年7月I日。圖I為FXW-HS7A菌株對(duì)難溶性磷酸鹽磷酸三鈣、磷酸鐵、磷酸鋁和羥基磷灰石的溶解能力。圖2為FXW-HS7A對(duì)楓香的促生效果。
具體實(shí)施例方式根據(jù)下述實(shí)施例，可以使本領(lǐng)域的技術(shù)人員更好地理解本發(fā)明。實(shí)施例所描述的僅用于說(shuō)明本發(fā)明，而不應(yīng)當(dāng)也不會(huì)限制權(quán)利要求書(shū)中所詳細(xì)描述的本發(fā)明。實(shí)施例I :FXW_HS7A菌株實(shí)驗(yàn)室解磷試驗(yàn)。解磷培養(yǎng)基A :葡萄糖 10g, Ca3 (PO4) 25g，MgCl25g，KCl 0. 2g，MgSO4 · 7H20 0. 25g，(NH4)2SO4O. lg，蒸餾水 IOOOmL, pH 7. 0o解磷培養(yǎng)基B :用羥基磷灰石(Caltl(PO4)6(OH)2)代替解磷培養(yǎng)基A中的Ca3(PO4)2,其它成分和含量相同。解磷培養(yǎng)基C :用磷酸鐵(FePO4 · 4H20)代替解磷培養(yǎng)基A中的Ca3 (PO4)2,其它成分和含量相同。解磷培養(yǎng)基D :用磷酸鋁(AlPO4)代替解磷培養(yǎng)基A中的Ca3 (PO4)2,其它成分和含量相同。將活化的FXW-HS7A菌株接種NA培養(yǎng)基(牛肉膏3g，蛋白胨10g，氯化鈉5g，蒸餾水IOOOmL, pH 7. 4)中，28°C振蕩培養(yǎng)18 24h作為種子液，將種子液按1% (v/v)接種量分別接種到裝有50mL解磷培養(yǎng)基A、B、C、D的IOOmL三角瓶中，以接相同體積空白種子液的解磷培養(yǎng)基為對(duì)照(CK)，每個(gè)處理三個(gè)重復(fù)，280C，180r/min培養(yǎng)3d后，發(fā)酵液4°C，IOOOOr/min離心lOmin，鑰銻抗比色法測(cè)定發(fā)酵液中可溶性磷含量，結(jié)果見(jiàn)圖I。從圖I中可以得出，分別以難溶性磷酸鹽磷酸三鈣(Ca3(P04)2)、磷酸鐵(FePO4 · 4H20)、磷酸鋁(AlPO4)和羥基磷灰石(Caltl (PO4) 6 (OH) 2)為唯一磷源，培養(yǎng)3d后，F(xiàn)XW-HS7A發(fā)酵液中可溶性磷含量均高于對(duì)照。以上表明，菌株JW-JSI對(duì)四種難溶性磷源均具有較強(qiáng)的溶解能力。實(shí)施例2 FXff-HS7A溫室盆栽試驗(yàn)。將菌株FXW-HS7A活化后，用接種環(huán)挑取少量菌體接種于裝有50mLNA培養(yǎng)基(牛肉膏3g，蛋白胨10g，氯化鈉5g，蒸餾水lOOOmL，pH 7. 2 7. 4)的IOOmL三角瓶中，29 °C，200r/min振蕩培養(yǎng)48h。發(fā)酵液(4°C, 6000r/min)離心5min,無(wú)菌生理鹽水潤(rùn)洗菌體3次后，無(wú)菌生理鹽水調(diào)節(jié)菌懸液(108cfu/ml)制成接種劑。接種中國(guó)楓香(苗齡I年)，以等量 無(wú)菌生理鹽水為對(duì)照，接種量為實(shí)生苗5mL/株。每處理10個(gè)重復(fù)，置于溫室統(tǒng)一管理，光照為12h/天，適時(shí)澆水。中國(guó)楓香接種后150天生長(zhǎng)情況見(jiàn)表1，可以看出，接種FXW-HS7A能夠顯著促進(jìn)中國(guó)楓香實(shí)生苗的生長(zhǎng)。與對(duì)照(CK)相比，接種FXW-HS7A的處理在苗高和莖粗上的增長(zhǎng)率分別達(dá)到了 15. 09%和8. 97%，促生效果顯著。圖2為中國(guó)楓香接種FXW-HS7A后150天時(shí)的照片，可以看出接種后的中國(guó)楓香明顯高于對(duì)照。表I FXW-HS7A對(duì)中國(guó)楓香實(shí)生苗生長(zhǎng)的影響
處理苗高(mm) 增長(zhǎng)率(％) 地徑(mm) 增長(zhǎng)率(％) FXW-HSA 57.2= 1.49a15.094.98=0.44ab8J7
CK49.7±2.38a—4.57±0.40a—注P〈0. 05，同列不同行小寫(xiě)字母不相同代表差異顯著。
權(quán)利要求
1.一種熒光假單胞菌FXW-HS7A，其分類(lèi)命名為熒光假單胞菌(Pseudomonasfluorescens)，已保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，菌種保藏號(hào)為CCTCC M 2012260，保藏日為2012年7月I日。
2.權(quán)利要求I所述的熒光假單胞菌在促進(jìn)中國(guó)楓香生長(zhǎng)中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種熒光假單胞菌FXW-HS7A，其分類(lèi)命名為熒光假單胞菌(Pseudomonas fluorescens)，已保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，其保藏編號(hào)為CCTCC M 2012260。本發(fā)明還公開(kāi)了上述熒光假單胞菌在中國(guó)楓香促生長(zhǎng)中的應(yīng)用。本發(fā)明菌株在液體搖瓶培養(yǎng)的情況下，對(duì)難溶性磷酸鹽磷酸三鈣、磷酸鐵、磷酸鋁和羥基磷灰石具有較強(qiáng)溶解效果；該菌株制成菌劑接種于中國(guó)楓香實(shí)生苗，結(jié)果表明，該菌劑能明顯促進(jìn)中國(guó)楓香的生長(zhǎng)發(fā)育。因此，本發(fā)明能為將來(lái)開(kāi)發(fā)中國(guó)楓香專(zhuān)用微生物肥料提供優(yōu)良的菌株資源。
文檔編號(hào)C09K101/00GK102876598SQ20121032744
公開(kāi)日2013年1月16日 申請(qǐng)日期2012年9月6日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月6日
發(fā)明者張明艷, 陳鳳毛, 任嘉紅, 徐國(guó)芳 申請(qǐng)人:南京林業(yè)大學(xué)