一種格列吡嗪的藥物組合物及其醫(yī)藥用圖
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種格列吡嗪的藥物組合物及其醫(yī)藥用途，本發(fā)明提供的格列吡嗪的藥物組合物中含有格列吡嗪和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物化合物(Ⅰ)，格列吡嗪、化合物(Ⅰ)單獨(dú)作用時(shí)，對(duì)腎小球腎炎具有治療作用；格列吡嗪和化合物(Ⅰ)聯(lián)合作用時(shí)，治療效果進(jìn)一步提高，可開(kāi)發(fā)成治療腎小球腎炎的藥物，與現(xiàn)有技術(shù)相比具有突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)和顯著的進(jìn)步。
【專利說(shuō)明】
一種格列吡嗪的藥物組合物及其醫(yī)藥用途
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及格列吡嗪的新用途，具體涉及一種格列吡嗪的藥 物組合物及其醫(yī)藥用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 格列吡嗪主要用于單用飲食控制治療未能達(dá)到良好效果的輕、中度非胰島素依賴 型病人，藥治療有效率約87%。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的在于提供一種格列吡嗪的藥物組合物，該藥物組合物中含有格列吡 嗪和一種天然產(chǎn)物，格列吡嗪和該天然產(chǎn)物可以協(xié)同治療腎小球腎炎。
[0004] 本發(fā)明的上述目的是通過(guò)下面的技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：
[0005] 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物a)，
[0006]
[0007] -種格列吡嗪的藥物組合物，包括格列吡嗪、如權(quán)利要求1所述的化合物（I)和藥 學(xué)上可以接受的載體，制備成需要的劑型。
[0008] 進(jìn)一步地，藥學(xué)上可以接受的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤(rùn)劑、 崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體或潤(rùn)滑劑。
[0009] 進(jìn)一步地，所述劑型包括片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、 膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。
[0010] 上述化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將九里香粉碎，用75~85%乙 醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無(wú)醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃 取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中正丁醇萃取物 用大孔樹(shù)脂除雜，先用10%乙醇洗脫8個(gè)柱體積，再用70%乙醇洗脫10個(gè)柱體積，收集70% 洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70%乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠 分離，依次用體積比為60:1、30:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；（d) 步驟(c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為8:1、4:1和2:1的二氯甲烷-甲醇 梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積 百分濃度為75%的甲醇水溶液等度洗脫，收集10~15個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得 到化合物(I)。
[0011] 進(jìn)一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)用80%乙醇熱回流提取，合并提取 液。
[0012] 進(jìn)一步地，化合物（I)的制備方法中，所述大孔樹(shù)脂為DlOl型大孔吸附樹(shù)脂。
[0013]進(jìn)一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯進(jìn)行萃 取，得到二氯甲烷萃取物。
[0014] 上述化合物(I)在制備治療腎小球腎炎的藥物中的應(yīng)用。
[0015] 上述格列吡嗪的藥物組合物在制備治療腎小球腎炎的藥物中的應(yīng)用。
[0016] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：
[0017] 本發(fā)明提供的格列吡嗪的藥物組合物中含有格列吡嗪和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn) 物，格列吡嗪、化合物（I)單獨(dú)作用時(shí)，對(duì)腎小球腎炎具有治療作用;格列吡嗪和化合物（I) 聯(lián)合作用時(shí)，治療效果進(jìn)一步提高，可開(kāi)發(fā)成治療腎小球腎炎的藥物。
【具體實(shí)施方式】
[0018] 下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。盡管參照較佳實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作了詳細(xì)說(shuō)明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì) 本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和范圍。
[0019] 實(shí)施例1:化合物(I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0020] 試劑來(lái)源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購(gòu)自上海凌峰化 學(xué)試劑有限公司，甲醇，分析純，購(gòu)自江蘇漢邦化學(xué)試劑有限公司。
[0021]分離方法：（a)將九里香(2kg)粉碎，用80%乙醇熱回流提取（15LX3次），合并提取 液，濃縮至無(wú)醇味（3L)，依次用石油醚（3L X 3次）、乙酸乙酯（3L X 3次）和水飽和的正丁醇 (3LX3次）萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中 正丁醇萃取物用DlOl型大孔樹(shù)脂除雜，先用10%乙醇洗脫8個(gè)柱體積，再用70%乙醇洗脫10 個(gè)柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70%乙醇洗脫 濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為60:1 (10個(gè)柱體積）、30:1 (8個(gè)柱體積）、15:1 (10個(gè) 柱體積)和5:1(8個(gè)柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；（d)步驟(c)中組分4用 正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為8:1 (10個(gè)柱體積）、4:1 (8個(gè)柱體積)和2:1 (6個(gè)柱體 積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反 相硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集10~15個(gè)柱體積洗脫液， 洗脫液減壓濃縮得到化合物(I)(純度大于98% )。
[0022] 結(jié)構(gòu)確證:HR-ESI-MS顯示[Μ+Na]+為m/z 271.1316,結(jié)合核磁特征可得分子式為 〇1出2()03，不飽和度為6。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)611(卯 111，0130-(16,6001〇^):!1-1(2.02，(1(1，了 = 13·4,9·9)，H-l(1.68，br，d，J=13.4)，H-3(2.17，d，J=13.6)，H-3(1.72，dd，J=13.6， 1.4)，H-5(2.83，br，d，J = 9.5)，H-6(5.34，br，s)，H-8(2.98，br，d，J = 9.9)，H-9(2.16，m)， H-10(0.93，d，J = 6.8)，H-ll(6.21，m)，H-12(6.08，m)，H-13(4.17，br，d，J=14.1)，H-13 (4.08，&，(1，了=14.1)，!1-14(1.26,8) ;核磁共振碳譜數(shù)據(jù)6。(卯111，0130-(16，1501〇^):39.1 (CH 2，1-C)，49.5(C，2-C)，49.2(CH2,3-C)，62.8(C，4-C)，60.6(CH，5-C)，128.4(CH，6-C)， 147.1(C，7-C)，49.3(CH，8-C)，43.4(CH，9-C)，13.3(CH 3，10-C)，133.6(CH，11-C)，133.8 (CH，12-C)，61.1(CH2，13-C)，23.5(CH3，14-C)，182.1(C，15-C)<JR 光譜表明該化合物含有羰 基（1693(3!^1)功能團(tuán)。13C-NMR譜顯示15個(gè)碳信號(hào)，包括兩個(gè)甲基，三個(gè)亞甲基（一個(gè)含氧亞 甲基），六個(gè)次甲基(三個(gè)烯屬次甲基），以及四個(gè)季碳(一個(gè)烯烴季碳，一個(gè)羰基碳） 譜顯示兩個(gè)甲基信號(hào)[6!10.93(3!1，(1，1 = 6.8抱，]\^-10)和1.26(3!1，8，]\^-14)]，一個(gè)含氧亞 甲基質(zhì)子信號(hào)[SH4.17(lH，br，d，J=14.1Hz，H-13WP4.08(lH，br，d，J=14.1Hz，H-13)]，& 及三個(gè)烯屬次甲基信號(hào)WH5.34(lH，br，s，H-6)，6.21(lH，m，H-llMP6.08(lH，m，H-12)]。 HMBC譜中羥甲基質(zhì)子信號(hào)與C-6和C-7的相關(guān)性表明羥甲基質(zhì)子與C-7位相連。HMBC相關(guān)性 表明，甲基基團(tuán)[δΗ1.26(Μ θ-14)]和羧酸基團(tuán)0C182.1，C-15)與季碳C-2(SC49.5)相連，相 鄰的為兩個(gè)亞甲基官能團(tuán)（C-1和(XB) 13HMBC譜中Η-3Α(δΗ2.17)與C-5和C-9,以及Η-3Β(δ HI. 72)與C-8的相關(guān)性表明季碳C-4為三個(gè)五元環(huán)的中心。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和ROESY 譜，以及文獻(xiàn)關(guān)于相關(guān)類型核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化合物如下所示，立體構(gòu)型進(jìn)一步通過(guò) ECD試驗(yàn)確定，理論值與實(shí)驗(yàn)值基本一致。
[0023] 該化合物化學(xué)式及碳原子編號(hào)如下：
[0024]
[0025] 實(shí)施例2:藥理作用
[0026]本實(shí)施例使用陽(yáng)離子化小牛血清白蛋白（C-BSA)致膜性腎小球腎炎大鼠模型，觀 察藥物對(duì)膜性腎小球腎炎大鼠腎臟功能的改善作用。
[0027] 1、材料與方法
[0028] 1.1動(dòng)物
[0029] SD大鼠由廣州中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物中心提供。NIH小鼠由廣東衛(wèi)生廳實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提 供。
[0030] 1.2試劑與樣品
[0031 ]格列吡嗪購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所?；衔铮↖)自制，制備方法見(jiàn)實(shí)施例1。雷 公藤多苷片:上海醫(yī)科大學(xué)紅旗制藥廠產(chǎn)品；小牛血清白蛋白（BSA)來(lái)自北京天象人生物工 程有限責(zé)任公司。無(wú)水乙二胺(EDA)、碳化二亞胺(EDC)均為分析純?cè)噭?。其他生化測(cè)試試劑 來(lái)自南京建成生物工程研究所。
[0032] 1.3陽(yáng)離子化小牛血清蛋白（C-BSA)的制備
[0033] 用671111^04加5001^雙蒸水，然后緩慢加入6111〇1/1鹽酸3501^，調(diào)?!1至4.75，保持溶 液在25 °C ;將5gBSA溶解于25mL雙蒸水，再將此溶液緩慢加入EDA溶液，不斷攪拌，使液溫恒 定25 °C，加入1.8gEDC; 2h后用pH為4.75的醋酸緩沖液30mL終止反應(yīng)，即得等電點(diǎn)提高的C-BSA溶液。用4 °C雙蒸水透析72h (每3至5h換水)C-BSA溶液，冷凍干燥，得等電點(diǎn)(PI)為8.4以 上的C-BSA粉劑，保存于-20 °C備用。
[0034] 1.4大鼠分組及模型制備
[0035] 選取雄性SD大鼠60只，體重150~200g，隨機(jī)分為6組，分別為:正常對(duì)照組、模型對(duì) 照組、陽(yáng)性對(duì)照組（雷公藤多苷16.5mg · kg<)、格列吡嗪組（80mg · kg<)、化合物（I)組 (80mg · kg-1K格列吡嗪與化合物（I)組合物組【40mg · kg-1格列吡嗪+40mg · kg-1化合物 (I)】。除正常對(duì)照組10只，不作任何處理，正常飼養(yǎng)外，其余各組大鼠均分別取C-BSA I.Omg 與弗氏不完全佐劑〇. ImL混均，大鼠皮下多點(diǎn)注射預(yù)免疫。每只大鼠預(yù)免疫1周后，每只注射 C-BSA，先腹腔注射1周，第1天至第7天的劑量依次為1.0mg、l .0mg、l .0mg、l .5mg、l .5mg、 2mg、2mg。第2周起，每次在滅菌條件下尾靜脈注射2.5mg C-BSA，同時(shí)各組灌胃給予上述劑 量的藥物，正常對(duì)照組與模型對(duì)照組給予等容量的生理鹽水。
[0036] 1.5大鼠尿蛋白定量實(shí)驗(yàn)
[0037]分別在給藥第14天和第32天收集各大鼠24h尿液，進(jìn)行尿蛋白定量實(shí)驗(yàn)。
[0038] 1.6大鼠血清生化指標(biāo)測(cè)定實(shí)驗(yàn)
[0039] 給藥后32d，從眼眶靜脈取血，檢測(cè)血清總蛋白、血清尿素氮含量。
[0040] 1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
[0041] 所有結(jié)果進(jìn)行t檢驗(yàn)。
[0042] 2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0043] 2.1對(duì)C-BSA致膜性腎炎模型大鼠尿蛋白的影響
[0044]與正常對(duì)照組比，模型對(duì)照組大鼠尿蛋白總量顯著升高(P〈0.01)，說(shuō)明造模成功； 與模型對(duì)照組比，陽(yáng)性對(duì)照組大鼠尿蛋白總量顯著下降(P〈〇.01);與模型對(duì)照組比，格列吡 嗪與化合物（I)組合物組大鼠尿蛋白總量顯著下降（p〈0.01);與模型對(duì)照組比，格列吡嗪 組、化合物（I)組大鼠尿蛋白總量都下降(P〈〇.05)。
[0045] 試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。
[0046] 2.2對(duì)C-BSA致膜性腎炎模型大鼠血清生化指標(biāo)的影響
[0047]與正常對(duì)照組比，模型對(duì)照組大鼠血清總蛋白量顯著降低(P〈0.01)、血清尿素氮 含量顯著升高(P〈〇.01)，說(shuō)明造模成功;與模型對(duì)照組比，陽(yáng)性對(duì)照組大鼠血清總蛋白量顯 著升高(P〈0.01)、血清尿素氮含量顯著降低(P〈0.01);與模型對(duì)照組比，格列吡嗪與化合物 (I)組合物組大鼠血清總蛋白量顯著升高(P〈〇.01)、血清尿素氮含量顯著降低(P〈〇.01);與 模型對(duì)照組比，格列吡嗪組、化合物（I)組大鼠血清總蛋白量升高(P〈〇.05)、血清尿素氮含 量降低(p〈0.05)。
[0048] 試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。
[0049] 表1對(duì)C-BSA腎炎模型大鼠尿蛋白、血清蛋白、血清尿素氮含量的影響（f 土S:)
[0051 ]用陽(yáng)離子化小牛血清白蛋白復(fù)制的膜性腎小球腎炎動(dòng)物模型，其免疫發(fā)病機(jī)理和 人類腎小球腎炎非常近似，是一種較理想的慢性腎小球腎炎病理模型。本研究以大鼠為實(shí) 驗(yàn)動(dòng)物，用C-BSA復(fù)制慢性血清病模型，并產(chǎn)生膜性腎炎病變。
[0052] 上述結(jié)果表明，格列吡嗪、化合物（I)單獨(dú)作用時(shí)，對(duì)腎小球腎炎具有治療作用;格 列吡嗪和化合物(I)聯(lián)合作用時(shí)，治療效果進(jìn)一步提高，可開(kāi)發(fā)成治療腎小球腎炎的藥物。
[0053] 上述實(shí)施例的作用在于說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明的保護(hù) 范圍。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換， 而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，2. -種格列吡嗪的藥物組合物，其特征在于:包括格列吡嗪、如權(quán)利要求1所述的化合 物(I)和藥學(xué)上可以接受的載體，制備成需要的劑型。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的格列吡嗪的藥物組合物，其特征在于:藥學(xué)上可以接受的載體 包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤(rùn)劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體 或潤(rùn)滑劑。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的格列吡嗪的藥物組合物，其特征在于:所述劑型包括片劑、膠 囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、 栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。5. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于，包含以下操作步驟：（a)將九 里香粉碎，用75~85%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無(wú)醇味，依次用石油醚、乙酸乙 酯和水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b) 步驟(a)中正丁醇萃取物用大孔樹(shù)脂除雜，先用10%乙醇洗脫8個(gè)柱體積，再用70%乙醇洗 脫10個(gè)柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70%乙醇 洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為60:1、30:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度 洗脫得到4個(gè)組分；（d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為8:1、4:1和 2:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反 相硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集10~15個(gè)柱體積洗脫液， 洗脫液減壓濃縮得到化合物(I)。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)用80%乙醇熱回 流提取，合并提取液。7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:所述大孔樹(shù)脂為DlOl型 大孔吸附樹(shù)脂。8. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)中用二氯甲烷代 替乙酸乙酯進(jìn)行萃取，得到二氯甲烷萃取物。9. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)在制備治療腎小球腎炎的藥物中的應(yīng)用。10. 權(quán)利要求2~4任一所述的格列吡嗪的藥物組合物在制備治療腎小球腎炎的藥物中 的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】C07C62/32GK106008203SQ201610334014
【公開(kāi)日】2016年10月12日
【申請(qǐng)日】2016年5月19日
【發(fā)明人】蔣靈錕
【申請(qǐng)人】蔣靈錕