鹽酸倍他司汀的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了鹽酸倍他司汀的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用，本發(fā)明提供的鹽酸倍他司汀的藥物組合物中含有鹽酸倍他司汀和一種從威靈仙的干燥根及根莖中分離得到的結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物化合物(Ⅰ)，鹽酸倍他司汀和化合物(Ⅰ)均具有明顯的抗抑郁作用，并且兩者合用抗抑郁效果顯著增強(qiáng)，可以開(kāi)發(fā)成抗抑郁的藥物，與現(xiàn)有技術(shù)相比具有突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)和顯著的進(jìn)步。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
鹽酸倍他司訂的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及鹽酸倍他司汀的新用途，具體涉及鹽酸倍他司汀 的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 鹽酸倍他司汀對(duì)腦血管、心血管，特別是對(duì)椎底動(dòng)脈系統(tǒng)有較明顯的擴(kuò)張作用，顯 著增加心、腦及周?chē)h(huán)血流量，改善血循環(huán)，并降低全身血壓，此外能增加耳蝸和前底血 流量，從而消除內(nèi)耳性眩暈，耳鳴和耳閉感，還能增加毛細(xì)血管通透性，促進(jìn)細(xì)胞外液的吸 收，消除淋巴內(nèi)水腫；能對(duì)抗兒茶酚胺的縮血管作用及降低動(dòng)脈壓，并有抑制血漿凝固及 ADP誘導(dǎo)的血小板凝集作用，能延長(zhǎng)大白鼠體外血栓形成時(shí)間，還有輕微的利尿作用。
[0003] 迄今為止，尚未見(jiàn)鹽酸倍他司汀及其藥物組合物與抑郁癥的相關(guān)性報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種鹽酸倍他司汀的藥物組合物，該藥物組合物中含有鹽 酸倍他司汀和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物，鹽酸倍他司汀和該天然產(chǎn)物可以協(xié)同治療抑郁 癥。
[0005] 本發(fā)明的上述目的是通過(guò)下面的技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：
[0006] 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，
[0007]
[0008] -種鹽酸倍他司汀的藥物組合物，包括鹽酸倍他司汀、如權(quán)利要求1所述的化合物 (I)和藥學(xué)上可以接受的載體，制備成需要的劑型。
[0009] 進(jìn)一步地，藥學(xué)上可以接受的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤(rùn)劑、 崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體或潤(rùn)滑劑。
[0010] 進(jìn)一步地，所述劑型包括片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、 膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。
[0011] 上述化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將威靈仙的干燥根及根莖粉 碎，用65~85%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無(wú)醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水 飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a) 中正丁醇萃取物用大孔樹(shù)脂除雜，先用6%乙醇洗脫8個(gè)柱體積，再用70%乙醇洗脫8個(gè)柱體 積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70%乙醇洗脫濃縮物 用正相硅膠分離，依次用體積比為50:1、25:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4 個(gè)組分；（d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為10:1、5:1和2:1的二 氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠 分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液 減壓濃縮得到化合物(I)。
[0012] 進(jìn)一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)用75%乙醇熱回流提取，合并提取 液。
[0013] 進(jìn)一步地，化合物（I)的制備方法中，所述大孔樹(shù)脂為AB-8型大孔吸附樹(shù)脂。
[0014]進(jìn)一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯進(jìn)行萃 取，得到二氯甲烷萃取物。
[0015] 上述化合物(I)在制備治療抑郁癥的藥物中的應(yīng)用。
[0016] 上述鹽酸倍他司汀的藥物組合物在制備治療抑郁癥的藥物中的應(yīng)用。
[0017] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn):本發(fā)明提供的鹽酸倍他司汀的藥物組合物中含有鹽酸倍他司汀和 一種從威靈仙的干燥根及根莖中分離得到的結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物，鹽酸倍他司汀和該天然 產(chǎn)物單獨(dú)作用時(shí)，對(duì)抑郁癥具有治療作用;二者聯(lián)合作用時(shí)，對(duì)抑郁癥的治療效果進(jìn)一步提 高，可以開(kāi)發(fā)成治療抑郁癥的藥物。
【具體實(shí)施方式】
[0018] 下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。
[0019] 實(shí)施例1:化合物(I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0020]分離方法：（a)將威靈仙的干燥根及根莖(3kg)粉碎，用75%乙醇熱回流提取(20L X3次），合并提取液，濃縮至無(wú)醇味(4L)，依次用石油醚(4LX3次）、乙酸乙酯(4LX3次）和 水飽和的正丁醇（4LX 3次）萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取 物；（b)步驟(a)中正丁醇萃取物用AB-8型大孔樹(shù)脂除雜，先用6%乙醇洗脫8個(gè)柱體積，再用 70%乙醇洗脫8個(gè)柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b) 中70%乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為50:1 (8個(gè)柱體積）、25:1 (8個(gè)柱體 積）、15:1(8個(gè)柱體積)和5:1(10個(gè)柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；（d)步 驟(c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為10:1(8個(gè)柱體積）、5:1(10個(gè)柱體 積)和2:1(5個(gè)柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八 烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14 個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物（I) (322mg，HPLC歸一化純度大于98% )。
[0021] 結(jié)構(gòu)確證:黃色粉末，冊(cè)431-]\^顯示[]\?1]+為111/2 307.1762，結(jié)合核磁特征可得 分子式為C2QH22N20,不飽和度為11。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)S H(ppm，CDCl3,500MHZ):H-3(4.13， dd，J=10.2,2.1Hz)，H-5(2.96，t，J = 6.1Hz)，H-6a(3.05，dd，J=15.6,5.6Hz)，H-6b(2.62， br d，J=15.6Hz)，H-9(7.43，d，J = 8.0Hz)，H-10(7.09，td，J = 8.0，1.2Hz)，H-ll(7.20，td， J = 8.0，1.2Hz)，H-12(7.29，d，J = 8.0Hz)，H-14a(2.06，td，J=12.3,2.1Hz)，H-14b(1.56， m)，H-15(2.26，br，s)，H-16(2.42，m)，H-17(9.77，d，J = 2.4Hz)，H-18(1.59，d，J = 7.2Hz)， !1-19(5.31斗了 = 7.2抱），!1-21(3.61，1^，8,2!〇，見(jiàn)-16(3.65,8);核磁共振碳譜數(shù)據(jù)6。(卯111， CDC13，125MHz):139·2(C，2-C)，48·3(CH，3-C)，52·7(CH，5-C)，25.5(CH 2,6-C)，103.6(C，7- C)，127.6(C，8-C)，118.8(CH，9-C)，118.3(CH，10-C)，121.2(CH，11-C)，108.7(CH，12-C)， 137.6(C，13-C)，30.2(CH2，14-C)，36.5(CH，15-C)，52.4(CH，16-C)，204.3(CH，17-C)，12.8 (CH3，18-C)，119.8(CH，19-C)，136.9(C，20-C)，54.2(CH2,21-C)，29.7(CH 3，Ni-Me)。紅外波 譜中在1642CHT1尖銳吸收峰是由該化合物中的醛基產(chǎn)生；且UV譜圖表明在229nm、256nm與 281nm有紫外吸收，顯示該化合物含有吲哚發(fā)色基團(tuán)。13C-NMR、DEPT和HSQC譜中顯示有20個(gè) 碳信號(hào)，包括兩個(gè)甲基，三個(gè)亞甲基，十個(gè)次甲基，以及五個(gè)季碳，以上功能結(jié)構(gòu)再結(jié)合不飽 和數(shù)表明該化合物為五環(huán)結(jié)構(gòu)。1H-匪R譜與DEPT譜顯示一組無(wú)取代吲哚片段的質(zhì)子信號(hào) 5H-97.43(lH,d,J = 8.0Hz)^5H-i〇7.09(lH,td,J = 8.〇a.2Hz)^5H-ii7.20(lH,td,J = 8.0, 1 · 2Hz)與δΗ-127 · 29 (1H，d，J = 8 · 0Hz); -個(gè)N-CH3質(zhì)子信號(hào)δΗ3 · 65 (3H，s，Ni-Me); -個(gè)N-CH2質(zhì) 子信號(hào)6113.61(2!1，1^，8);-個(gè)醛基質(zhì)子信號(hào)611- 179.77(1!1，(1，1 = 2.4抱）；一組亞乙基質(zhì)子信 號(hào)311-181.59(3!1，(1，了 = 7.2抱）與511-195.31(1!14，了 = 7.2抱）；兩對(duì)亞甲基質(zhì)子信號(hào)511-633.05 (lH，dd，J= 15.6，5·6Ηζ)與SH-6b 2.62( lH，br d，J= 15·6Ηζ)以及δΗ-1432.06( lH，td，J = 12.3,2.1抱）與5(1-1處1.56(1!1，111)。13(：-匪1?譜顯示該化合物中存在吲哚結(jié)構(gòu)片段5。- 2139.2 (C)^c-7l03.6(C)^c-8127.6(C)^c-9ll8.8(CH)^c-i〇118.3(CH)^c-iil21.2(CH)^c-i2l08.7 (CH)與 δ。-13137.6(C)，兩個(gè)甲基信號(hào) δ。-1812.8(CH3)與 29.7(〇13，沁-]\^)。〇)5￥與!^0(：波譜數(shù) 據(jù)揭示該化合物中含有_NCHCH2CHCH(CHO)CHCH2-結(jié)構(gòu)片段(-N4_C 5-C16(-Cn)-Cb-Cw-Cs-)。 通過(guò)選擇性NOE譜確認(rèn)了 H-19與H-15以及H2-21與H3-18存在相關(guān)信號(hào)，表明該化合物C-19與 C-20之間為雙鍵，且為Z構(gòu)型。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和N0ESY譜，以及文獻(xiàn)關(guān)于相關(guān)類(lèi)型核 磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化合物如下式所示，立體構(gòu)型進(jìn)一步通過(guò)ECD試驗(yàn)確定，理論值與實(shí) 驗(yàn)值基本一致。該化合物化學(xué)式及碳原子編號(hào)如下：
[0022]
[0023] 實(shí)施例2:藥理作用
[0024] 1、材料與方法
[0025] 1 · 1 動(dòng)物
[0026]實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SPF級(jí)昆明小鼠，雌雄各半，體重18~22g，購(gòu)自廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 中心。
[0027] 1.2藥物與試劑
[0028]鹽酸倍他司汀購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，化合物（I)自制，制備方法見(jiàn)實(shí)施例 1。鹽酸氟西汀膠囊(百憂解）（禮來(lái)蘇州制藥有限公司產(chǎn)品，規(guī)格:20mg/片）；重酒石酸去甲 腎上腺素(NE);腎上腺素(E);鹽酸多巴胺(DA); 5-羥色胺鹽酸鹽(5-HT);以上5種對(duì)照品均 購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所(供含量測(cè)定用）；乙腈(色譜純，澳洲移民局科技有限公司）； 辛烷磺酸鈉(B8,分析純，天津市大茂化學(xué)試劑廠）；高氯酸(分析純，廣州化學(xué)試劑廠）；磷酸 二氫鈉(分析純，廣州化學(xué)試劑廠）。
[0029] 1.3主要儀器
[0030] 懸尾實(shí)驗(yàn)裝置自制，木棒上用紙板隔離成2個(gè)區(qū)，用膠布固定鼠尾;游泳實(shí)驗(yàn)裝置 為矩形玻璃缸（19.4cmX20.4cm);鉆石牌機(jī)械秒表3個(gè)，上?；使虄x器有限公司；庫(kù)侖陣列 電化學(xué)高效液相色譜儀（美國(guó)ESA公司：Model5600A-16通道檢測(cè)器，Model 582 solvent Delivery System，Mode 1542 自動(dòng)進(jìn)樣器，Coularray Win工作站）；Dionex-Tcc_100 型柱溫 箱(美國(guó)戴安公司）；Thermo D-37520型高速冷凍離心機(jī)(德國(guó)Heraeus公司）；Phs-25型pH計(jì) (上海精密科學(xué)儀器有限公司）；GenPure超純水系統(tǒng)(德國(guó)TKA公司）；KQ-500型超聲波清洗 器(昆山市超聲儀器有限公司）；3K超濾管(PALL公司）；BP211D電子天平(德國(guó)Sartorious); 佳美SK-1快速混勾器(江蘇金壇市佳美儀器廠）。
[0031] 1.4小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)(TST)
[0032] 取小鼠50只，隨機(jī)分成5組，每組10只。分別為空白對(duì)照組(生理鹽水）、陽(yáng)性對(duì)照組 (鹽酸氟西汀4mg/mL)及鹽酸倍他司汀組(80mg/kg)、化合物（I)組(80mg/kg)、鹽酸倍他司汀 與化合物（I)組合物組【（40mg/kg)鹽酸倍他司汀+(40mg/kg)化合物（I)】，自由飲水進(jìn)食灌 胃1次/d，0.2mL/只，連續(xù)灌胃15d，第1、3、5、7天給藥11!后，將小鼠尾部距末端約2〇11處用膠 布黏住固定，使其頭部向下懸掛呈倒懸狀，離箱底約5cm。中間以擋板隔離小鼠視線?？傆^察 6min，前2min為適應(yīng)時(shí)間，觀察后4min內(nèi)小鼠的不動(dòng)（小鼠在空中停止掙扎，或僅有細(xì)小的 肢體運(yùn)動(dòng))時(shí)間。
[0033] 1.5小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)(FST)
[0034] 實(shí)驗(yàn)前24h進(jìn)行游泳訓(xùn)練15min，禁食不禁水，實(shí)驗(yàn)前12h禁食。第15天給藥lh后進(jìn) 行游泳實(shí)驗(yàn)。將小鼠單只放入水深l〇cm，水溫（27±3)°C的矩形容器內(nèi)，總觀察6min，適應(yīng) 2min后開(kāi)始計(jì)算后4min內(nèi)累計(jì)不動(dòng)(漂浮不動(dòng)狀態(tài)，僅露出鼻孔保持呼吸，四肢偶爾劃動(dòng)以 保持身體不至于沉下去)時(shí)間。
[0035] 2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0036] 2.1對(duì)小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間的影響
[0037]結(jié)果如表1所示。小鼠在懸尾模型中出現(xiàn)的不動(dòng)狀態(tài)反映了其絕望行為，給藥組抗 抑郁活性從第3天開(kāi)始體現(xiàn)，與空白對(duì)照組比較，鹽酸倍他司汀與化合物（I)組合物顯著減 少小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間（P〈〇.01)，鹽酸倍他司汀組、化合物（I)組小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間降低(P< 0.05)〇
[0038] 表1對(duì)懸尾小鼠不動(dòng)時(shí)間的影響（s，x土 s，n = 8)
[0039]

[0040] 2.2對(duì)小鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間的影響
[0041] 結(jié)果如表2所示。與空白對(duì)照組比較，鹽酸倍他司汀與化合物（I)組合物組小鼠游 泳的不動(dòng)時(shí)間均顯著縮短(P<〇. 01)，鹽酸倍他司汀組、化合物（I)組小鼠游泳不動(dòng)時(shí)間降 低(P〈0.05)。
[0042 ] 表2對(duì)小鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間的影響(X 土 s，η = 10)
[0043]
[0044] 以上結(jié)果表明，鹽酸倍他司汀和化合物（I)均具有明顯的抗抑郁作用，并且兩者合 用抗抑郁效果顯著增強(qiáng)，可以開(kāi)發(fā)成抗抑郁的藥物。
[0045] 上述實(shí)施例的作用在于說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明的保護(hù) 范圍。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換， 而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，2. -種鹽酸倍他司汀的藥物組合物，其特征在于:包括鹽酸倍他司汀、如權(quán)利要求1所 述的化合物(I)和藥學(xué)上可W接受的載體，制備成需要的劑型。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的鹽酸倍他司汀的藥物組合物，其特征在于:藥學(xué)上可W接受的 載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤(rùn)劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附 載體或潤(rùn)滑劑。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的鹽酸倍他司汀的藥物組合物，其特征在于：所述劑型包括片 劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注 射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。5. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于，包含W下操作步驟：（a)將威 靈仙的干燥根及根莖粉碎，用65~85%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無(wú)醇味，依次 用石油酸、乙酸乙醋和水飽和的正下醇萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正 下醇萃取物；（b)步驟(a)中正下醇萃取物用大孔樹(shù)脂除雜，先用6%乙醇洗脫8個(gè)柱體積，再 用70%乙醇洗脫8個(gè)柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（C)步驟 (b)中70 %乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為50:1、25:1、15:1和5:1的二氯 甲燒-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；（d)步驟(C)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積 比為10:1、5:1和2:1的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八燒 基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14個(gè) 柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(I)。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)用75%乙醇熱回 流提取，合并提取液。7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:所述大孔樹(shù)脂為AB-8型 大孔吸附樹(shù)脂。8. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)中用二氯甲燒代 替乙酸乙醋進(jìn)行萃取，得到二氯甲燒萃取物。9. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)在制備治療抑郁癥的藥物中的應(yīng)用。10. 權(quán)利要求2~4任一所述的鹽酸倍他司汀的藥物組合物在制備治療抑郁癥的藥物中 的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61K31/4402GK105837571SQ201610263760
【公開(kāi)日】2016年8月10日
【申請(qǐng)日】2016年4月23日
【發(fā)明人】何華瓊
【申請(qǐng)人】何華瓊