滌至中性，再加入20mL質量濃度為0.lmol/L的氫氧化鈉溶液中浸泡7min，再用去離子水洗滌至中性；向上述再次洗滌為中性的酶解物中加入10g過硫酸鉀，同時加入1.5%的蛋白酶混合均勻，水解反應3h，水解反應完成后，放入轉速為8000r/min的離心機中離心12min，分離得上清液，即抗氧化肽粗提液；將上述所得的抗氧化肽粗提液放入反應容器中，向其中加入5mL無水乙醇溶液，同時向其中加入5g磷酸氫二鈉，在溫度為45°C，轉速為500r/min條件下，攪拌30min，邊攪拌邊以lg/min的速度向其中添加10g纖維素酶，添加完畢后，水解反應2h ;最后待水解反應完成后，將酶解物放入紫外燈下進行滅酶處理50min，滅酶處理后，放入轉速為8000r/min的離心機中離心12min，分離得上清液，即精品抗氧化肽。本發(fā)明制備方法簡單，制備成本低于其他方法5% ;不僅解決了米糠利用率低的問題，也減少了抗氧化肽的生產成本，實現了資源的可持續(xù)循環(huán)利用。
[0008]實例2
首先取55mL水放入橢圓底鍋中，同時加入25g脫脂米糠，以5°C /min的速度程序升溫至103°C，蒸煮35min，直至將水燒開至沸騰，待水沸騰后，敞開鍋蓋，使鍋中混合物溫度自然冷卻至38°C，取出放入孔徑為0.2 μπι的細紗布中過濾，得米糠液；然后將上述所得的米糠液放入三口燒瓶中，分別向其中加入40g脫脂米糠和90mL蒸餾水，控制溫度為43°C，在轉速為600r/min的條件下，攪拌25min混合均勻，再保溫35min ;待上述保溫完成后，將其放入恒溫水浴中，調節(jié)溫度為49°C，加入1.65%的蛋白酶和4%的纖維素酶，控制轉速為850r/min，磁力攪拌混合均勻，然后保持溫度不變，水解反應5.5h ;再待水解完成后，將酶解物放入紫外燈下進行滅酶處理55min，滅酶處理后，加入25mL質量分數為35%的鹽酸浸泡9min，用去離子水洗滌至中性，再加入25mL質量濃度為0.2mol/L的氫氧化鈉溶液中浸泡9min，再用去離子水洗滌至中性；向上述再次洗滌為中性的酶解物中加入llg過硫酸鉀，同時加入1.7%的蛋白酶混合均勻，水解反應3.5h，水解反應完成后，放入轉速為10000r/min的離心機中離心13min，分離得上清液，即抗氧化肽粗提液；將上述所得的抗氧化肽粗提液放入反應容器中，向其中加入6mL無水乙醇溶液，同時向其中加入6g磷酸氫二鈉，在溫度為48°C，轉速為600r/min條件下，攪拌35min，邊攪拌邊以1.5g/min的速度向其中添加llg纖維素酶，添加完畢后，水解反應2.5h ;最后待水解反應完成后，將酶解物放入紫外燈下進行滅酶處理55min，滅酶處理后，放入轉速為10000r/min的離心機中離心13min，分離得上清液，即精品抗氧化肽。本發(fā)明制備方法簡單，制備成本低于其他方法5% ;不僅解決了米糠利用率低的問題，也減少了抗氧化肽的生產成本，實現了資源的可持續(xù)循環(huán)利用。
[0009]實例 3
首先取60mL水放入橢圓底鍋中，同時加入30g脫脂米糠，以5°C /min的速度程序升溫至105°C，蒸煮40min，直至將水燒開至沸騰，待水沸騰后，敞開鍋蓋，使鍋中混合物溫度自然冷卻至40°C，取出放入孔徑為0.3 μπι的細紗布中過濾，得米糠液；然后將上述所得的米糠液放入三口燒瓶中，分別向其中加入50g脫脂米糠和lOOmL蒸餾水，控制溫度為45°C，在轉速為700r/min的條件下，攪拌30min混合均勾，再保溫40min ;待上述保溫完成后，將其放入恒溫水浴中，調節(jié)溫度為50°C，加入1.8 %的蛋白酶和5 %的纖維素酶，控制轉速為900r/min,磁力攪拌混合均勻，然后保持溫度不變，水解反應6h ;再待水解完成后，將酶解物放入紫外燈下進行滅酶處理60min，滅酶處理后，加入30mL質量分數為40%的鹽酸浸泡lOmin，用去離子水洗滌至中性，再加入30mL質量濃度為0.3mol/L的氫氧化鈉溶液中浸泡lOmin，再用去離子水洗滌至中性；向上述再次洗滌為中性的酶解物中加入12g過硫酸鉀，同時加入1.8%的蛋白酶混合均勻，水解反應4h，水解反應完成后，放入轉速為12000r/min的離心機中離心14min，分離得上清液，即抗氧化肽粗提液；將上述所得的抗氧化肽粗提液放入反應容器中，向其中加入7mL無水乙醇溶液，同時向其中加入7g磷酸氫二鈉，在溫度為50°C，轉速為700r/min條件下，攪拌40min，邊攪拌邊以2g/min的速度向其中添加12g纖維素酶，添加完畢后，水解反應3h ;最后待水解反應完成后，將酶解物放入紫外燈下進行滅酶處理60min，滅酶處理后，放入轉速為12000r/min的離心機中離心14min，分離得上清液，即精品抗氧化肽。本發(fā)明制備方法簡單，制備成本低于其他方法5% ;不僅解決了米糠利用率低的問題，也減少了抗氧化肽的生產成本，實現了資源的可持續(xù)循環(huán)利用。
【主權項】
1.一種從脫脂米糠中提取抗氧化肽的方法，其特征在于具體提取方法為: (1)取50?60mL水放入橢圓底鍋中，同時加入20?30g脫脂米糠，以5°C/min的速度程序升溫至100?105°C，蒸煮30?40min，直至將水燒開至沸騰，待水沸騰后，敞開鍋蓋，使鍋中混合物溫度自然冷卻至35?40°C，取出放入孔徑為0.1?0.3 μ m的細紗布中過濾，得米糖液； (2)將上述所得的米糠液放入三口燒瓶中，分別向其中加入30?50g脫脂米糠和80?100mL蒸饋水，控制溫度為40?45°C，在轉速為500?700r/min的條件下，攪拌20?30min混合均勻，再保溫30?40min ； (3)待上述保溫完成后，將其放入恒溫水浴中，調節(jié)溫度為48?50°C，加入1.5?1.8%的蛋白酶和3?5%的纖維素酶，控制轉速為800?900r/min，磁力攪拌混合均勾，然后保持溫度不變，水解反應5?6h ; (4)待水解完成后，將酶解物放入紫外燈下進行滅酶處理50?60min，滅酶處理后，加入20?30mL質量分數為30?40%的鹽酸浸泡7?lOmin，用去離子水洗滌至中性，再加入20?30mL質量濃度為0.1?0.3mol/L的氫氧化鈉溶液中浸泡7?lOmin，再用去離子水洗滌至中性； (5)向上述再次洗滌為中性的酶解物中加入10?12g過硫酸鉀，同時加入1.5?1.8%的蛋白酶混合均勻，水解反應3?4h，水解反應完成后，放入轉速為8000?12000r/min的離心機中離心12?14min，分離得上清液，即抗氧化肽粗提液； (6)將上述所得的抗氧化肽粗提液放入反應容器中，向其中加入5?7mL無水乙醇溶液，同時向其中加入5?7g磷酸氫二鈉，在溫度為45?50°C，轉速為500?700r/min條件下，攪拌30?40min，邊攪拌邊以1?2g/min的速度向其中添加10?12g纖維素酶，添加完畢后，水解反應2?3h ; (7)待水解反應完成后，將酶解物放入紫外燈下進行滅酶處理50?60min，滅酶處理后，放入轉速為8000?12000r/min的離心機中離心12?14min，分離得上清液，即精品抗氧化肽。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種從脫脂米糠中提取抗氧化肽的方法，屬于抗氧化肽制備技術領域。本發(fā)明是以脫脂米糠為原料，將其先與水蒸煮，于細紗布中過濾得米糠液，再加入一定量的脫脂米糠和蒸餾水混合保溫后，放入恒溫水浴中，加入蛋白酶和纖維素酶水解反應，進行滅酶處理后，經鹽酸浸泡，去離子水洗滌，氫氧化鈉溶液浸泡，去離子再次洗滌，再進行水解反應，高速離心分離得抗氧化肽粗提液，與無水乙醇等混合后，加入纖維素酶水解后，滅酶處理，經離心分離后制得抗氧化肽。本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明制備方法簡單，制備成本低于其他方法5％；不僅解決了米糠利用率低的問題，也減少了抗氧化肽的生產成本，實現了資源的可持續(xù)循環(huán)利用。
【IPC分類】C12P21/06
【公開號】CN105400857
【申請?zhí)枴緾N201510916929
【發(fā)明人】陳毅忠
【申請人】常州大學
【公開日】2016年3月16日
【申請日】2015年12月12日