一種利用銀杏果皮制備抗氧化肽的方法
【專利摘要】本申請(qǐng)公開了一種利用銀杏果皮制備抗氧化肽的方法，具體包括如下步驟：（1）、將經(jīng)過干燥、粉碎的銀杏果皮投入到NaOH水溶液中，提取銀杏果皮粗蛋白；（2）、將銀杏果皮粗蛋白配制為質(zhì)量濃度為1?10%，pH值為9?10的水溶液；然后加入蛋白酶，調(diào)節(jié)水溶液的溫度為50?60℃，進(jìn)行水解反應(yīng)2?5小時(shí)后，再將水溶液在95?100℃下保持沸騰10?15min，進(jìn)行滅酶，獲得水解液；（3）、將上述水解液離心沉淀，取上清液真空冷凍干燥后制得抗氧化肽。因此本發(fā)明所制備的抗氧化肽可以作為抗氧化劑來使用，其對(duì)DPPH自由基的清除率較高，當(dāng)抗氧化肽在溶液中的濃度達(dá)到0.4 g/L以上時(shí)，對(duì)DPPH自由基的清除率穩(wěn)定在80%以上，對(duì)人體具有較高的保健作用。
【專利說明】
[0001] 一種利用銀杏果皮制備抗氧化肽的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0002] 本發(fā)明涉及一種酶法制備抗氧化肽的方法，尤其是一種利用銀杏果皮制備抗氧化 肽的方法，屬于生物技術(shù)加工領(lǐng)域。
[0003]
【背景技術(shù)】
[0004] 目前，我國每年的白果總產(chǎn)量超過1.2萬噸，銀杏葉片產(chǎn)量達(dá)到1.5萬噸。而銀杏果 皮產(chǎn)量較大，達(dá)到1.5-2.0萬噸。銀杏果皮含有蛋白質(zhì)、脂肪、糖類、鞣質(zhì)、微量元素、氨基酸， 以及黃酮類和酚酸類物質(zhì)，如銀杏酚、白果酚、白果酸、氫化白果酸、氫化白果亞酸、白果 醇，其酸性物質(zhì)為莽草酸、D-糖質(zhì)酸、橙如酸。
[0005] 目前國內(nèi)外對(duì)銀杏的研究主要集中在銀杏葉，而銀杏果外皮主要還是以廢棄物的 形式被扔掉，沒有得到有效的利用，既浪費(fèi)大量資源，又污染了環(huán)境。因此銀杏果皮的綜合 利用，變廢為寶就顯得極為重要。目前國內(nèi)外對(duì)銀杏果皮的綜合利用還處于空白階段，并且 沒有實(shí)際的應(yīng)用。
[0006] 銀杏果皮中含有較高的蛋白質(zhì)，自然排放后，不僅浪費(fèi)了資源，同時(shí)也造成環(huán)境污 染。植物活性肽概念的提出及分離檢測(cè)技術(shù)的提高，使人們開始逐漸重視對(duì)富含蛋白質(zhì)的 農(nóng)副產(chǎn)品的深加工并從中獲得多種活性肽，如酪蛋白磷酸肽、降血壓肽和易消化吸收肽等， 植物來源活性肽的研究和開發(fā)對(duì)提高我國農(nóng)產(chǎn)品深加工的附加值具有重要作用。
[0007] 抗氧化劑近些年來在國內(nèi)外發(fā)展很快，用途也越來越廣?？寡趸瘎┎粌H用于含脂 肪食品的抗氧化，而且作為功能因子用于保健食品及化妝品等的開發(fā)?？寡趸瘎┑姆N類很 多，然而化學(xué)合成的抗氧化劑如BHA、BHT等，由于其本身具有毒副作用，各國政府紛紛對(duì)其 強(qiáng)制規(guī)定其添加量。人們把目光逐步轉(zhuǎn)向從各種植物和動(dòng)物組織中提取天然抗氧化劑?？?氧化活性多肽由于低毒、高效等特點(diǎn)，作為食品和機(jī)體的抗氧化劑，被認(rèn)為是人工合成抗氧 化劑的理想替代者。
[0008] 因此，本發(fā)明以銀杏果皮為原料利用酶法制備具有抗氧化活性的多肽，為抗氧化 功能食品的開發(fā)提供理論依據(jù)與技術(shù)支持。
[0009]

【發(fā)明內(nèi)容】

[0010] 本申請(qǐng)的目的在于提供一種利用銀杏果皮制備抗氧化肽的方法，具體包括如下步 驟： (1) 、將經(jīng)過干燥、粉碎的銀杏果皮投入到NaOH水溶液中，提取銀杏果皮粗蛋白； (2) 、將銀杏果皮粗蛋白配制為質(zhì)量濃度為1-10%，pH值為9-10的水溶液;然后加入蛋 白酶，調(diào)節(jié)水溶液的溫度為50-60°C，進(jìn)行水解反應(yīng)2-5小時(shí)后，再將水溶液在95-100°C下保 持沸騰l〇_15min，進(jìn)行滅酶，獲得水解液;在該步驟中，銀杏果皮粗蛋白配制成的水溶液優(yōu) 選采用NaOH調(diào)節(jié)pH值;調(diào)節(jié)后的pH值最佳為9; (3)、將上述水解液離心沉淀，取上清液真空冷凍干燥后制得抗氧化肽。
[0011] 進(jìn)一步，步驟（1)中將銀杏果皮投入到NaOH水溶液中后，在55-65 °C下振蕩1-5小 時(shí)，然后離心沉淀、取上清液;將上清液用鹽酸調(diào)節(jié)PH值至2-3,再次離心沉淀，將沉淀用水 洗滌后，經(jīng)干燥后得到銀杏果皮粗蛋白；所述NaOH水溶液的濃度為0.05-0. lmol/L;銀杏果 皮與NaOH水溶液的質(zhì)量比為1:10-1:100。在將銀杏果皮投入到NaOH水溶液中后，振蕩時(shí)的 最佳溫度為60°C。上述步驟（1)中，將銀杏果皮投入到NaOH水溶液中后，振蕩時(shí)的溫度優(yōu)選 為60 °C ;并且上清液用鹽酸調(diào)節(jié)后，其pH值最佳為2.6。
[0012]采用該方法提取銀杏果皮粗蛋白，可以將銀杏果皮中的蛋白最大限度地提取出 來，并得到純度較高的銀杏果皮粗蛋白。
[0013] NaOH的主要作用是將銀杏果皮中的蛋白質(zhì)溶解出來，以利于提取，當(dāng)NaOH的濃度 達(dá)到一定濃度后，對(duì)于蛋白質(zhì)的溶解速度已增加有限，將NaOH的濃度控制在0.05-0.1mol/ L，在保證蛋白質(zhì)被溶解出來的前提下，降低NaOH的消耗。適當(dāng)?shù)墓桃罕瓤梢允广y杏果皮中 蛋白質(zhì)能夠被提取出來，進(jìn)入到NaOH水溶液中，為避免NaOH水溶液中蛋白質(zhì)的濃度過高，而 影響銀杏果皮中蛋白質(zhì)的提取率，NaOH水溶液相對(duì)于銀杏果皮的量不能太少，當(dāng)然在超過 一定的比例后，過多的NaOH水溶液也不能提取到更多的蛋白質(zhì)，將銀杏果皮與NaOH溶液的 質(zhì)量比控制在1:10-1:100之間，即可保證銀杏果皮中的蛋白質(zhì)能夠被盡可能地提取出來。
[0014] 進(jìn)一步，所述蛋白酶為堿性蛋白酶。經(jīng)過篩選，堿性蛋白酶是最佳的用于分解蛋白 質(zhì)的蛋白酶。
[0015] 進(jìn)一步，蛋白酶的添加量為銀杏果皮粗蛋白質(zhì)量的1-5%，進(jìn)一步優(yōu)選為2-3%。該范 圍內(nèi)的蛋白酶的用量已能較好地完成蛋白質(zhì)的分解，無需過多地添加。
[0016] 本發(fā)明所制備的抗氧化肽可以作為抗氧化劑來使用，其對(duì)DPPH自由基的清除率較 高，當(dāng)抗氧化肽在溶液中的濃度達(dá)到〇.4 g/L以上時(shí)，對(duì)DPPH自由基的清除率穩(wěn)定在80%以 上，對(duì)人體具有較高的保健作用。
[0017]
【具體實(shí)施方式】
[0018] 實(shí)施例1 將銀杏果皮除雜，40°C烘干12小時(shí)，用粉碎機(jī)研磨成粉，取IOkg投入到100kg NaOH水溶 液中，在60°C下振蕩2小時(shí)后，離心沉淀取上清液，然后將上清液用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2.6,然 后離心沉淀，將沉淀物清洗并干燥后制得銀杏果皮粗蛋白；其中，NaOH水溶液的濃度為0.08 mol/L〇
[0019] 將制得的銀杏果皮粗蛋白制成質(zhì)量濃度為1%、ρΗ值為9的水溶液，然后加入相對(duì) 于銀杏果皮粗蛋白的質(zhì)量的1%的堿性蛋白酶，在50°C進(jìn)行水解反應(yīng)2小時(shí)后，將水溶液在 IOOtC下保持沸騰10 min，進(jìn)行滅酶，獲得水解液。其中銀杏果皮粗蛋白制成的水溶液用 NaOH調(diào)節(jié)pH值。
[0020] 將水解液離心沉淀，取上清液經(jīng)真空冷凍干燥后制得抗氧化肽A。
[0021] 實(shí)施例2 將銀杏果皮除雜，50°C烘干8小時(shí)，用粉碎機(jī)研磨成粉，取Ikg投入到100kg NaOH水溶液 中，在50°C下振蕩5小時(shí)后，離心沉淀取上清液，然后將上清液用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2,然后離 心沉淀，將沉淀物清洗并干燥后制得銀杏果皮粗蛋白；其中，NaOH水溶液的濃度為0.1 mol/ L0
[0022] 將制得的銀杏果皮粗蛋白制成質(zhì)量濃度為10%、pH值為10的水溶液，然后加入相對(duì) 于銀杏果皮粗蛋白質(zhì)量的2%的堿性蛋白酶，在60°C進(jìn)行水解反應(yīng)5小時(shí)后，將水溶液在95°C 下保持12 min，進(jìn)行滅酶，獲得水解液。
[0023] 將水解液離心沉淀，取上清液經(jīng)真空冷凍干燥后制得抗氧化肽B。
[0024] 實(shí)施例3 將銀杏果皮除雜，50°C烘干8小時(shí)，用粉碎機(jī)研磨成粉，取2kg投入到100kg NaOH水溶液 中，在55°C下振蕩3小時(shí)后，離心沉淀取上清液，然后將上清液用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至3,然后離 心沉淀，將沉淀物清洗并干燥后制得銀杏果皮粗蛋白；其中，NaOH水溶液的濃度為0.05 mol/L〇
[0025] 將制得的銀杏果皮粗蛋白制成質(zhì)量濃度為5%、pH值為9.5的水溶液，然后加入相對(duì) 于銀杏果皮粗蛋白質(zhì)量的4%的堿性蛋白酶，在50°C進(jìn)行水解反應(yīng)2小時(shí)后，將水溶液在98°C 下保持11 min，進(jìn)行滅酶，獲得水解液。
[0026] 將水解液離心沉淀，取上清液經(jīng)真空冷凍干燥后制得抗氧化肽C。
[0027] 實(shí)施例4 將銀杏果皮除雜，40°C烘干12小時(shí)，用粉碎機(jī)研磨成粉，取Ikg投入到90kg NaOH水溶液 中，在60°C下振蕩4小時(shí)后，離心沉淀取上清液，然后將上清液用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2.6,然后 離心沉淀，將沉淀物清洗并干燥后制得銀杏果皮粗蛋白；其中，NaOH水溶液的濃度為0.09 mol/L〇
[0028] 將制得的銀杏果皮粗蛋白制成質(zhì)量濃度為8%、pH值為9的水溶液，然后加入相對(duì)于 銀杏果皮粗蛋白質(zhì)量的5%的堿性蛋白酶，在50 °C進(jìn)行水解反應(yīng)3小時(shí)后，將水溶液在97 °C下 保持15 min，進(jìn)行滅酶，獲得水解液。
[0029] 將水解液離心沉淀，取上清液經(jīng)真空冷凍干燥后制得抗氧化肽D。
[0030] 對(duì)實(shí)施例中得到的抗氧化肽進(jìn)行活性檢測(cè)，采用對(duì)DPPH自由基的清除作用來表 示，具體操作如下： 將抗氧化肽分別制成不同濃度的樣品，然后分別取0.4 mL樣品與等體積的40g/L DPPH 無水乙醇溶液充分混合，室溫下避光靜置30 min，于波長517 nm下測(cè)定吸光值。用去離子水 和還原型谷胱甘肽代替樣品分別作空白對(duì)照和陽性對(duì)照。樣品的DPPH自由基清除活力按下 列公式(1)計(jì)算： :自由:纖辱
式中，Ai為加入樣品的DPPH無水乙醇溶液的吸光值;Aj為加入樣品的無水乙醇溶液的 吸光值;Ao為用去離子水替代樣品的DPPH無水乙醇溶液的吸光值。
[0031] 檢測(cè)結(jié)果見表1。
[0032]表1抗氧化肽對(duì)DPPH自由基的清除效果

本申請(qǐng)公開了一種利用銀杏果皮制備抗氧化肽的方法，具體包括如下步驟：（1)、將經(jīng) 過干燥、粉碎的銀杏果皮投入到NaOH水溶液中，提取銀杏果皮粗蛋白；（2)、將銀杏果皮粗蛋 白配制為質(zhì)量濃度為1-1〇%，ρΗ值為9-10的水溶液;然后加入蛋白酶，調(diào)節(jié)水溶液的溫度為 50-60°C，進(jìn)行水解反應(yīng)2-5小時(shí)后，再將水溶液在95-100°C下保持沸騰10_15min，進(jìn)行滅 酶，獲得水解液；（3)、將上述水解液離心沉淀，取上清液真空冷凍干燥后制得抗氧化肽。因 此本發(fā)明所制備的抗氧化肽可以作為抗氧化劑來使用，其對(duì)DPPH自由基的清除率較高，當(dāng) 抗氧化肽在溶液中的濃度達(dá)到〇 . 4 g/L以上時(shí)，對(duì)DPPH自由基的清除率穩(wěn)定在80%以上，對(duì) 人體具有較高的保健作用。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種利用銀杏果皮制備抗氧化肽的方法，其特征在于，包括如下步驟： (1 )、將經(jīng)過干燥、粉碎的銀杏果皮投入到NaOH水溶液中，提取銀杏果皮粗蛋白； (2)、將銀杏果皮粗蛋白配制為質(zhì)量濃度為1-10%，ρΗ值為9-10的水溶液;然后加入蛋白 酶，調(diào)節(jié)水溶液的溫度為50-60°C，進(jìn)行水解反應(yīng)2-5小時(shí)后，再將水溶液在95-100°C下保持 沸騰10-15min，進(jìn)行滅酶，獲得水解液； (3 )、將上述水解液離心沉淀，取上清液真空冷凍干燥后制得抗氧化肽。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于， 步驟（1)中將銀杏果皮投入到NaOH水溶液中后，在55-65 °C下振蕩1-5小時(shí)，然后離心沉 淀、取上清液;將上清液用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2-3,再次離心沉淀，將沉淀用水洗滌后，經(jīng)干燥 后得到銀杏果皮粗蛋白； 所述NaOH水溶液的濃度為0.05-0. lmol/L;銀杏果皮與NaOH水溶液的質(zhì)量比為1:10-1: 100〇3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，將銀杏果皮投入到NaOH水溶液 中后，振蕩時(shí)的溫度為60°C。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，步驟（1)中，上清液用鹽酸調(diào)節(jié)后，pH值為 2.6〇5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述蛋白酶為堿性蛋白酶。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，蛋白酶的添加量為銀杏果皮粗蛋白質(zhì)量的 1-5%〇7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟(2)中，銀杏果皮粗蛋白配制成的水 溶液用NaOH調(diào)節(jié)pH值。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟(2)中，銀杏果皮粗蛋白配制成的水 溶液的pH值為9。
【文檔編號(hào)】C12P21/06GK106086132SQ201610420906
【公開日】2016年11月9日
【申請(qǐng)日】2016年6月16日 公開號(hào)201610420906.8, CN 106086132 A, CN 106086132A, CN 201610420906, CN-A-106086132, CN106086132 A, CN106086132A, CN201610420906, CN201610420906.8
【發(fā)明人】王航
【申請(qǐng)人】如皋福大工程技術(shù)研究院有限公司