的四氨快喃，用己酸己醋溶解產物，分別用1mol/L的巧樣酸溶液，飽和碳酸氨鋼溶液，飽和 食鹽水各洗涂3遍，無水硫酸鎮(zhèn)干燥，蒸干溶劑得粗品，粗品經己酸己醋重結晶得1. 37g淺 白色固體。產率；60%，ESI-MSm/z;455. 9[M+H+]。
[0030] 氯苯甲醜基）-5-甲氧基-2-甲基-1氨-剛噪-3-基-N-(2-(徑氨基）-2-廁己 基）己醜胺 徑胺鐘（NH2服）溶液的制備；14血氨氧化鐘的飽和無水甲醇溶液滴加到24血含有 4.67g(67mmol)鹽酸徑胺的無水甲醇溶液中，控制內溫低于40 °C，滴加完畢，冷卻反應 液，濾除白色氯化鐘沉淀，所得濾液密閉保存?zhèn)溆谩?br>[0031] 甲基3-(2-(1-(4-氯苯甲醜基）-5-甲氧基-2-甲基-1氨-剛噪-3-基）己醜 氨基）了-2-帰酸醋（化46g，1mmol)溶于10血無水甲醇后，向其中加入3.日血上 述徑胺鐘（畑2服）溶液。0.5小時后，蒸除甲醇，2mol/L的鹽酸溶液酸化至地3-4,然后 用己酸己醋萃取，合并己酸己醋層后用飽和食鹽水洗涂，經無水硫酸鎮(zhèn)干燥，蒸干溶劑得粗 品，粗品經己酸己醋重結晶得化21g白色粉末。產率；46%，化NMR(400MHz,(畑3)2S0) δ11.30 (S, 1H), 10.48 (S, 1H), 9. 11 (S, 1H), 7. 76 (d,J=8.8Hz, 2H), 7. 53 (d，J=8.4Hz, 2H), 7.09 (d，J=8.8Hz,IH), 7.03 (s，IH),t61 (d，J=8.4 Hz,IH), 3.74 (s, 2H), 3.28 (s, 2H), 2.50 (s,6H), 2.31 (s, 2H).ESI-MS:m/z: 456. 9 [M+出+。
[0032] 實施例2目標化合物抑制組蛋白去己醜化酶活性試驗（In八化〇) 組蛋白去己醜化酶（HDACs)活性萊光分析方法主耍分兩步；第一步，含一個己醜化側 鏈的賴氨酸HDACs萊光底物（Boc-Lys(ace巧1) -AMC)，用含組蛋白去己醜化酶的化la細 胞提取物樣本(包含HDAC1，HDAC2，HDAC3和HDAC8)賠育，使底物脫去己醜基，激活底物。 第二步，用族酶水解Boc-Lys-AMC，產生AMC這一萊光基團巧P發(fā)色團)，在發(fā)射波長/激發(fā)波 長（390nm/46化m)測定萊光強度，從而根據抑制劑組及對照組的萊光強度計算抑制率，并求 算IC50值。酶活性測試原理見本專利說明書部分相關內容。實驗結果見表1。
[0033] 表1. 2- (1- (4-氯苯甲醜基）-5-甲氧基-2-甲基-1氨-剛噪-3-基-N- (2-(徑 氨基）-2-廁己基）己醜胺（I)的體外抑酶試驗結果
SAHA商品名為Zolinza，通用名為Vorinos化t，為美國食品藥品監(jiān)督管理局（FDA)于 2006年批準上市的組蛋白去己醜化酶抑制劑。
[0034] 上述測試結果表明，2- (1- (4-氯苯甲醜基）-5-甲氧基-2-甲基-1氨-剛 噪-3-基-N-(2-(徑氨基）-2-廁己基）己醜胺表現(xiàn)出對組蛋白去己醜化酶較強的抑制活 性，并且在測試中對組蛋白去己醜化酶的抑制活性優(yōu)于陽性對照藥Vohnostat(SAHA)，具 有良好的開發(fā)前景，并可作為發(fā)現(xiàn)新型高效組蛋白去己醜化酶抑制劑的先導化合物。
[0035] 實施例3目標化合物抑制細胞增殖的活性試驗（In八化〇) 對2- (1- (4-氯苯甲醜基）-5-甲氧基-2-甲基-1氨-剛噪-3-基-N- (2-(徑氨 基）-2-廁己基）己醜胺進行體外抑制癌細胞增殖的活性試驗，結果見表2。
[00淵術語說明： U937;人組織細胞淋己瘤細胞株。
[0037] :人紅白血病細胞株。
[0038]:人急性白血病細胞株。
[0039]:商品名為Zolinza，通用名為Vorinos化t，為美國食品藥品監(jiān)督管理局（FDA)于 2006年批準上市的組蛋白去己醜化酶抑制劑。
[0040]:二甲基亞諷。
[0041] :半數抑制濃度。
[0042] 材料]U937,K562,化60細胞株，四甲基偶氮哇藍MTT，10%胎牛血清，96孔板。
[0043]方法] 細胞培養(yǎng)U937,K562,化60三種腫瘤細胞株都采用常規(guī)培養(yǎng)。實驗時均用對數生長 期細胞。
[0044] 細胞生長檢測（MTT法）HCT116,沈0V3,化60細胞懸液均調整至1X105/ml，分別 接種于96孔板巧0μ1/孔），5000個細胞/孔。鋪板4h后，每孔中加入50ul含不同濃度 化合物的培養(yǎng)基，使孔中化合物終濃度分別為；1000、200、40、8、1. 6、0. 3化g/ml，每個濃度 設三個復孔，不加細胞的孔讀數時作空白，加細胞不加化合物的孔作化合物空白孔，SAHA作 化合物陽性對照。于37^，跳二氧化碳中賠育48h，每孔加入10μ1化5%的MTT染色液， 繼續(xù)賠育4h后，2500巧m，離也30min，然后拋棄板孔中培養(yǎng)基，加入二甲基亞諷，200ul/ 孔。酶標儀上于570nm處測定每孔的吸光度孤值，細胞生長抑制率按下式計算：
[0045] 上表測試數據表明，化合物2- (1- (4-氯苯甲醜基）-5-甲氧基-2-甲基-1氨-剛 噪-3-基-N-(2-(徑氨基）-2-廁己基）己醜胺在體外抗腫瘤細胞增殖的試驗中顯示出優(yōu) 于陽性對照SAHA的活性，具有良好的開發(fā)前景。
【主權項】
1. 組蛋白去己醜酶抑制劑，2-(1-(4-氯苯甲醜基）-5-甲氧基-2-甲基-I氨-剛 噪-3-基-N-(2-(徑氨基）-2-廁己基）己醜胺，具有結構式（I)的化學結構，W及其藥學 上可接受的鹽，2. 權利耍求1組蛋白去己醜酶抑制劑的制備方法，其特征在于；包括如下步驟： 合成路線；W剛噪美辛為原料，先與甘氨酸甲醋縮合，再與徑胺鐘親核反應，最后制得 終產物；反應式如下： 合成路線：上述合成路線反應式中的試劑：（1)甘氨酸甲醋，O-苯并三氮哇-N，N，N'，N'-四甲基 脈四氣棚酸，三己胺，二氯甲焼；似徑胺鐘，無水甲醇。3. 權利耍求2組蛋白去己醜酶抑制劑的制備方法，其特征在于；制備所述組蛋白去己 醜酶抑制劑的中間體，該中間體是：甲基2-(2-(1-(4-氯苯甲醜基）-5-甲氧基-2-甲基-1 氨-剛噪-3-基）己醜氨基）己酸醋。4. 權利耍求1所述的組蛋白去己醜酶抑制劑在制備預防或治療與組蛋白去己醜化酶 活性異常表達相關的哺乳動物疾病的藥物中的應用，所述的與組蛋白去己醜化酶活性異常 表達的相關哺乳動物疾病包括；癌癥，神經變性疾病，病毒感染，炎癥和糖尿病。5. -種適于口服給予哺乳動物的藥物組合物，包含權利耍求1所述的組蛋白去己醜酶 抑制劑和一種或多種藥學上可接受載體或賦形劑。
【專利摘要】本發(fā)明屬于藥物化學技術領域，尤其涉及組蛋白去乙酰化酶抑制劑及其制備方法和應用。本發(fā)明提供了一種強效的組蛋白去乙?；敢种苿?，本發(fā)明涉及具有結構式(I)的化合物，還涉及其藥學上可接受的鹽，溶劑合物以及前藥。本發(fā)明還涉及含有結構式(I)化合物的藥物組合物及其制藥用途。可有效治療組蛋白去乙?；富钚援惓１磉_的疾病，
【IPC分類】A61P3/10, A61P25/28, C07D209/26, A61P31/12, A61P29/00, A61P35/00, A61K31/40
【公開號】CN105367479
【申請?zhí)枴緾N201510784033
【發(fā)明人】張磊, 韓彥弢, 邊江, 張劍, 徐文方
【申請人】青島大學
【公開日】2016年3月2日
【申請日】2015年11月16日