一種新的檸檬苦素類化合物及其制備方法和醫(yī)藥用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及從干燥的積殼中分離得到的一種巧樣苦素類 化合物，含其的藥物組合物及其制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 積殼為蕓香科植物酸澄（CitrusaurantiumL.)及其栽培變種的干燥未成熟果 實(shí)。7月果皮尚綠時(shí)采收，自中部橫切為兩半，曬干或低溫干燥。味苦、辛、酸。性微寒。歸 脾、胃經(jīng)。具有理氣寬中，行滯消脹之功效。用于胸脅氣滯，脹滿疼痛，食積不化，疲飲內(nèi)停， 臟器下垂。積殼是中藥典型的理氣藥之一，廣泛應(yīng)用于中醫(yī)臨床。
[0003] 積殼所含化學(xué)成分較為復(fù)雜，目前已知的有效成分主要有黃酬類、揮發(fā)油類、生物 堿類、香豆素類和一些微量元素等。積殼中黃酬類成分主要有：澄皮巧、新澄皮巧、抽皮巧、 抽皮蕓香巧、異抽皮巧、陳皮素、抽皮素、川陳皮素、紅橘素、5-0-去甲基川陳皮素、去甲川陳 皮素、澄黃酬、4'，5, 7, 8-四甲氧基黃酬、4-0-甲基黃琴素、3-徑基-3'，4'，5, 6, 7, 8-六甲氧 基黃酬和5, 6-二徑基-7, 4'-二甲氧基黃酬等。揮發(fā)油主要有巧樣締、芳精醇、2-十一燒酬、 丫-松油締。積殼中所含的生物堿類活性成分主要有辛弗林、N-甲基酪胺、酪胺、大麥芽堿 等。積殼中所含的香豆素類成分主要有葡萄內(nèi)醋、傘形花內(nèi)醋、異前胡素、馬明丙酬化合物、 潑朗弗林、異米拉素、花椒毒酪、5-異戊締氧基線巧喃香豆素、5-甲氧基線巧喃香豆素等。
[0004]積殼中的澄皮巧具有抗炎、抗氧化、抗癌和保肝等作用；抽皮巧具有抗炎鎮(zhèn)痛、降 血糖等作用；川陳皮素具有抗炎，抗病毒，抗氧化等藥理作用；川陳皮素具有很好的抗腫瘤 的作用；抽皮素具有抗抑郁、保肝、抗氧化、改善大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙、抗血小板聚集的作用。 積殼揮發(fā)油的主要成分是巧樣締。在臨床上，巧樣締膠囊已上市，主要用于膽囊炎、膽管炎、 膽結(jié)石和膽道術(shù)后綜合征等的治療。在積殼揮發(fā)油中，另一重要成分為芳精醇，具有防腐、 抗菌、抗病毒和鎮(zhèn)靜等作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是提供一種從干燥的積殼中分離得到的一種巧樣苦素類化合物，含 其的藥物組合物及其制備方法和應(yīng)用。
[0006] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得W實(shí)現(xiàn)的：
[0007] 具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I):
[0008]
[0009] 所述的化合物（I)的制備方法，包含W下操作步驟：(a)將干燥的積殼粉碎，用 70~80%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油酸、乙酸乙醋和水飽和 的正下醇萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；化）步驟（a)中 乙酸乙醋萃取物用大孔樹脂除雜，先用10 %乙醇洗脫6個(gè)柱體積，再用70%乙醇洗脫8個(gè) 柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（C)步驟化）中70%乙醇洗 脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為85:1、50:1、25:1、10:1和1:1的二氯甲燒-甲 醇梯度洗脫得到5個(gè)組分；（d)步驟（C)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為 15:1、10:1和5:1的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟（d)中組分2用十八 烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為70%的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~ 12個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物（I)。
[0010]進(jìn)一步地，步驟（a)中，用75%乙醇熱回流提取，合并提取液。
[0011] 進(jìn)一步地，所述大孔樹脂為D101型大孔吸附樹脂。
[0012]一種藥物組合物，其中含有治療有效量的所述的化合物（I)和藥學(xué)上可接受的 載體。
[0013] 所述的化合物（I)在制備治療肝癌的藥物中的應(yīng)用。
[0014]所述的藥物組合物在制備治療肝癌的藥物中的應(yīng)用。
[0015]本發(fā)明化合物用作藥物時(shí)，可W直接使用，或者W藥物組合物的形式使用。
[0016]該藥物組合物含有治療有效量的本發(fā)明化合物（I)，其余為藥物學(xué)上可接受的、 對(duì)人和動(dòng)物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0017]所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料W及藥物制品輔劑。將本發(fā)明的藥物組合物W單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明藥物可 通過口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時(shí)，可將其制成片劑、緩釋片、控 釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等；用于注射時(shí)，可制成滅菌的 水性或油性溶液、無菌粉針、脂質(zhì)體或乳劑等。
【附圖說明】
[001引圖1為化合物（I)結(jié)構(gòu)式；
[0019] 圖2為化合物（I)計(jì)算ECD和實(shí)驗(yàn)ECD圖；
[0020] 圖3為化合物（I)對(duì)胎pG2及L02細(xì)胞增殖的影響（η= 3)。
【具體實(shí)施方式】
[0021] 下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不W此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。盡管參照較佳實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可W對(duì) 本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和范圍。
[0022] 主要材料、試劑來源及儀器類型：
[0023] 乙醇、石油酸、乙酸乙醋、正下醇、二氯甲燒為分析純，購(gòu)自上海凌峰化學(xué)試劑有限 公司，甲醇，分析純，購(gòu)自江蘇漢邦化學(xué)試劑有限公司。
[0024] 實(shí)施例1 :化合物（I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[002引 （a)干燥的積殼（10kg)粉碎，用75%乙醇熱回流提?。?化Χ3次），合并提取液， 濃縮至無醇味化L)，依次用石油酸（化X3次）、乙酸乙醋化LX3次）和水飽和的正下醇 (化X3次）萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物（381g)和正下醇萃取物；化）步 驟（a)中乙酸乙醋萃取物用D101大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫6個(gè)柱體積，再用70% 乙醇洗脫8個(gè)柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物（131g) ;(c)步驟 (b)中70%乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為85:1 (8個(gè)柱體積）、50:1 (8 個(gè)柱體積）、25:1 (8個(gè)柱體積）、10:1 (10個(gè)柱體積）和1:1 (8個(gè)柱體積）的二氯甲燒-甲 醇梯度洗脫得到5個(gè)組分；（d)步驟（C)中組分4 (27g)用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體 積比為15:1 (8個(gè)柱體積）、10:1 (8個(gè)柱體積）和5:U6個(gè)柱體積）的二氯甲燒-甲醇梯度 洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟（d)中組分2 (18g)用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用 體積百分濃度為70%的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~12個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃 縮得到純的化合物（I) (230mg)。
[0026]結(jié)構(gòu)確證：白色無定形粉末，HR-ESIMS顯示[M+Na]+為m/z601. 2612,結(jié)合核磁特 征可得分子式為〔3。成2〇…不飽和度為10。核磁共振氨譜數(shù)據(jù)5H(ppm，DMS0-de，500MHz): H-l(4. 91，d，J= 7. 5)，H-2(2. 85,dd，J= 16. 0,7. 5)，H-2(3. 46,d，J= 16. 0)，H-5(2. 15， d，J= 13. 0)，H-6(1. 71，m)，H-6(l. 89，m)，H-7(4. 33，d，J= 2. 0)，H-9(2. 65，d，J= 4. 0)， 46,d，J= 4.0)，H-12 (3.64,dd，J= 6. 0,4.0)，H-15 (3.22,m)，H-16 (1.69,m)， H-16 (1. 91，m)，H-17 (2. 52,dd，J= 11. 0,6. 0)，H-18 〇). 81，s)，H-19 (1. 41，s)，H-21 (7. 29， s)，H-22化.43,d，J= 1. 0)，H-23 (7. 36,t，J=1. 5)，H-28 (1. 14,s)，H-29 (1. 36,s)， H-30(1.08，s)，l-0Ac(1.81，s)，7-0Ac(2. 01，s);核磁共振碳譜數(shù)據(jù) 5c(卵m，DMSO-dg， 125MHz) :71. 5 (CH，1-C)，34. 2 (細(xì)2, 2-C)，169. 3 (C，3-C)，84. 6 (C，4-C)，44. 1 (CH，5-C)， 25. 9 (細(xì)2, 6-C)，73. 7 (CH，7-C)，44. 1 (C，8-C)，39. 9 (CH，9-C)，34. 7 (C，10-C)，75. 6 (CH， 11-C)，81. 2(CH，12-C)，45. 2(C，13-C)，84. 2(C，14-C)，71. 7(CH，15-C)，41. 1(邸2，16-〇， 39. 0 (CH，17-C)，13. 3 (細(xì)3,18-C)，16. 3 (細(xì)3, 19-C)，123. 8 (C，20-C)，140. 2 (CH，21-C)， 112. 9 (CH，22-C)，141. 1 (CH，23-C)，33. 8 (邸3, 28-C)，22. 4 (邸3, 29-C)，20. 6 (細(xì)3, 30-C)， 169. 1 (C，1-OAc)，20. 3 (邸3,1-OAc)，169. 3 (C，7-OAc)，20. 7 (邸3, 7-OAc);碳原子標(biāo)記參見圖 1。紅外波譜表明該化合物含有徑基（3447cm1)和幾基（1727cm1)基團(tuán)。古NMR譜顯示屯 個(gè)甲基信號(hào)（δΗ2. 01,1. 81,1. 41,1. 36,1. 14,1.08,0. 81，各抓，S)，β-單取代的巧喃環(huán) (δΗ7. 29,S;6. 43,d，J= 1.0Hz和 7. 36,t，J= 1. 5Ηζ)，W及兩個(gè)乙酷氧基[δΗ1. 81 (3Η， s)，2. 01(3H，s)]。"CNMR、DEPT和服QC譜中顯示有30個(gè)碳信號(hào)，包括屯個(gè)甲基，Ξ個(gè)亞甲 基，十一個(gè)次甲基（五個(gè)含氧次甲基和Ξ個(gè)締屬次甲基），W及九個(gè)季碳（Ξ個(gè)幾基碳，兩個(gè) 含氧季碳和一個(gè)締控季碳）。上述數(shù)據(jù)表示，該化合物為巧樣苦素類化合物，再結(jié)合不飽和 數(shù)可知該化合物為五環(huán)結(jié)構(gòu)。HMBC譜中，H-1 (δH4. 91，山J= 7.甜Z)與C-2 (δC34. 2)和兩 個(gè)幾基碳[δC169. 1 (OAc)和169. 3(C-3)]的相關(guān)性表明，C-1位連有一個(gè)乙酷氧基。R犯SY 譜中，H-1與Me-19的交叉峰表明C-1位的乙酷氧基為α構(gòu)型。HMBC譜中H-1與C-3，C-5 和C-10, 與C-3,Me-28和Me-29與C-4,Me-19與C-1的相關(guān)性表明A環(huán)為屯元內(nèi)醋 環(huán)。HMBC譜中，H-7(δH4. 33,山J= 2.OHz)與相應(yīng)幾基碳（δC169. 3)的交叉峰表明C-7 位也連有一個(gè)乙酷氧基。R犯SY譜中，Η-7與Me-30的相關(guān)性表明7-OAc為α構(gòu)型。此外， 四個(gè)含氧碳信號(hào)δC75. 6 (CH，11-C)，81. 2 (CH，12-C)，84. 2 (CH，14-C)和 71. 7 (CH，15-C)表 明它們各連有一個(gè)徑基。HMBC譜中，&-16與C-15的相關(guān)性表明D環(huán)為五元環(huán)。通過HMBC 譜中Η-17與C-20,C-21和C-22,W及&