一種用于神經(jīng)保護(hù)的檸檬苦素化合物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及從干燥的枳殼中分離得到的一種檸檬苦素類 化合物，含其的藥物組合物及其制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 枳殼為蕓香科植物酸橙（Citrus aurantium L.)及其栽培變種的干燥未成熟果 實。7月果皮尚綠時采收，自中部橫切為兩半，曬干或低溫干燥。味苦、辛、酸。性微寒。歸 脾、胃經(jīng)。具有理氣寬中，行滯消脹之功效。用于胸脅氣滯，脹滿疼痛，食積不化，痰飲內(nèi)停， 臟器下垂。枳殼是中藥典型的理氣藥之一，廣泛應(yīng)用于中醫(yī)臨床。
[0003] 枳殼所含化學(xué)成分較為復(fù)雜，目前已知的有效成分主要有黃酮類、揮發(fā)油類、生物 堿類、香豆素類和一些微量元素等。枳殼中黃酮類成分主要有：橙皮苷、新橙皮苷、柚皮苷、 柚皮蕓香苷、異柚皮苷、陳皮素、柚皮素、川陳皮素、紅橘素、5-〇_去甲基川陳皮素、去甲川陳 皮素、橙黃酮、4'，5, 7, 8-四甲氧基黃酮、4-0-甲基黃芩素、3-羥基-3'，4'，5, 6, 7, 8-六甲氧 基黃酮和5, 6-二羥基-7, 4'-二甲氧基黃酮等。揮發(fā)油主要有檸檬烯、芳樟醇、2-十一烷酮、 γ-松油烯。枳殼中所含的生物堿類活性成分主要有辛弗林、N-甲基酪胺、酪胺、大麥芽堿 等。枳殼中所含的香豆素類成分主要有葡萄內(nèi)酯、傘形花內(nèi)酯、異前胡素、馬明丙酮化合物、 潑朗弗林、異米拉素、花椒毒酚、5-異戊烯氧基線呋喃香豆素、5-甲氧基線呋喃香豆素等。
[0004] 枳殼中的橙皮苷具有抗炎、抗氧化、抗癌和保肝等作用；柚皮苷具有抗炎鎮(zhèn)痛、降 血糖等作用；川陳皮素具有抗炎，抗病毒，抗氧化等藥理作用；川陳皮素具有很好的抗腫瘤 的作用；柚皮素具有抗抑郁、保肝、抗氧化、改善大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙、抗血小板聚集的作用。 枳殼揮發(fā)油的主要成分是檸檬烯。在臨床上，檸檬烯膠囊已上市，主要用于膽囊炎、膽管炎、 膽結(jié)石和膽道術(shù)后綜合征等的治療。在枳殼揮發(fā)油中，另一重要成分為芳樟醇，具有防腐、 抗菌、抗病毒和鎮(zhèn)靜等作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種從干燥的枳殼中分離得到的一種檸檬苦素類化合物，含 其的藥物組合物及其制備方法和應(yīng)用。
[0006] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得以實現(xiàn)的：
[0007] 具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I ):
[0008]
[0009] 所述的化合物（I )的制備方法，包含以下操作步驟：(a)將干燥的枳殼粉碎，用 70~80%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和 的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步驟（a)中 乙酸乙酯萃取物用大孔樹脂除雜，先用10 %乙醇洗脫6個柱體積，再用70%乙醇洗脫8個 柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟（b)中70%乙醇洗 脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為85:1、50:1、25:1、10:1和1:1的二氯甲烷-甲 醇梯度洗脫得到5個組分；（d)步驟（c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為 15:1、10:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟（d)中組分2用十八 烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為70%的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~ 12個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物（I )。
[0010] 進(jìn)一步地，步驟（a)中，用75%乙醇熱回流提取，合并提取液。
[0011] 進(jìn)一步地，所述大孔樹脂為DlOl型大孔吸附樹脂。
[0012] -種藥物組合物，其中含有治療有效量的所述的化合物（I )和藥學(xué)上可接受的 載體。
[0013] 所述的化合物（I )在制備神經(jīng)保護(hù)的藥物中的應(yīng)用。
[0014] 所述的藥物組合物在制備神經(jīng)保護(hù)的藥物中的應(yīng)用。
[0015] 本發(fā)明化合物用作藥物時，可以直接使用，或者以藥物組合物的形式使用。
[0016] 該藥物組合物含有治療有效量的本發(fā)明化合物（I )，其余為藥物學(xué)上可接受的、 對人和動物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0017] 所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料 以及藥物制品輔劑。將本發(fā)明的藥物組合物以單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明藥物可 通過口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時，可將其制成片劑、緩釋片、控 釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等；用于注射時，可制成滅菌的 水性或油性溶液、無菌粉針、脂質(zhì)體或乳劑等。
【附圖說明】
[0018] 圖1為化合物（I )結(jié)構(gòu)式；
[0019] 圖2為化合物（I )計算E⑶和實驗E⑶圖；
[0020] 圖3為化合物（I )對培養(yǎng)不同時間海馬神經(jīng)元細(xì)胞活力的影響；
[0021] 圖4為化合物（I )對Αβ 25-35誘導(dǎo)海馬神經(jīng)元細(xì)胞活力的影響；
[0022] 圖5為化合物（I )對Αβ 25-35誘導(dǎo)的海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響。
【具體實施方式】
[0023] 下面結(jié)合實施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的實質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。盡管參照較佳實施例對本發(fā)明作了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對 本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實質(zhì)和范圍。
[0024] 主要材料、試劑來源及儀器類型：
[0025] 乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購自上海凌峰化學(xué)試劑有限 公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學(xué)試劑有限公司。
[0026] 實施例1 :化合物（I )分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0027] (a)干燥的枳殼（IOkg)粉碎，用75%乙醇熱回流提?。?0LX 3次），合并提取液， 濃縮至無醇味（6L)，依次用石油醚（6LX3次）、乙酸乙酯（6LX3次）和水飽和的正丁醇 (6LX3次）萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物（381g)和正丁醇萃取物；(b)步 驟（a)中乙酸乙酯萃取物用DlOl大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫6個柱體積，再用70% 乙醇洗脫8個柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物（131g) ;(c)步驟 (b)中70%乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為85:1 (8個柱體積）、50:1 (8 個柱體積）、25:1 (8個柱體積）、10:1 (10個柱體積）和1:1 (8個柱體積）的二氯甲烷-甲 醇梯度洗脫得到5個組分；（d)步驟（c)中組分4 (27g)用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體 積比為15:1 (8個柱體積）、10:1 (8個柱體積）和5: U6個柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度 洗脫得到3個組分；（e)步驟（d)中組分2 (18g)用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用 體積百分濃度為70%的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~12個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃 縮得到純的化合物（I ) (230mg)。
[0028] 結(jié)構(gòu)確證：白色無定形粉末；HR-ES頂S顯示[M+Na]+為m/z 605. 2014,結(jié)合核磁特 征可得分子式為C31H34O11,不飽和度為15。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)δ H(ppm，DMS0-d6,400MHz): Η-3(4· 99, s)，Η-5(2· 88, t，J = 6· 7)，Η-6(2· 23, dd，J = 6· 7)，Η-6(2· 01，dd，J = 6· 7)， Η-11(6· 27，s)，Η-14(1· 73，dd，J = 12. 3,6· 9)，Η-15(2· 67，dd，J = 18. 4,6· 9)，Η-15(2· 98， dd，J = 18. 4,12. 3)，Η-17 (5· 06, s)，Η-18 (0· 95, s)，Η-19 (1· 19, s)，Η-21 (7· 26, br，s)， Η-22 (6· 18, br，s)，Η-23 (7· 33, t，J = L 7)，Η-28 (0· 81，s)，Η-29 (0· 73, s)，Η-30 (2· 61，s)， Η-2'（5· 89, dq，J = 15. 5, L 7)，Η-3'（7· 09, dq，J = 15. 5, 7· 0)，Η-4'（1· 92, dd，J = 7· 0， 1·7)，8-0Η(3·95, br，s)，7-0CH3(3.61，s);核磁共振碳譜數(shù)據(jù) δε(ΡΡπι，DMS0-d6，100MHz): 209. 4 (C，1-C)，72. I (C，2-C)，84. 2 (CH，3-C)，38. 7 (C，4-C)，46. 9 (CH，5-C)，30. 6 (CH2,6-C)， 172. 7(C，7-C)，70. 3(C，8