一種從補骨脂中分離純化補骨脂素和異補骨脂素的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于化工與制藥領(lǐng)域，具體是涉及一種從補骨脂提取物中分離純化異補骨 脂素和補骨脂素的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 補骨脂為豆科植物corjii/bJia ("L.)的干燥成熟果實。其主要活性成 分是補骨脂素和異補骨脂素呋喃香豆素類成分，具有鎮(zhèn)靜、解痙、止血等作用，是治療白癜 風、斑禿、牛皮癬以及瘤樣皮膚病的有效藥物。臨床試驗研究表明，補骨脂素對腫瘤的生長 有明顯抑制作用，異補骨脂素可調(diào)節(jié)機體的內(nèi)分泌失調(diào)，緩解更年期綜合癥。
[0003] 目前，對補骨脂中香豆素類成分的分離純化主要采用有機試劑提取，大孔樹脂純 化法或高速逆流色譜法。大孔樹脂純化法雖然工藝成熟，但操作繁瑣，高速逆流色譜法中溶 劑體系的選擇較困難，且缺乏理論指導。另外，兩種方法均需要消耗大量的有機溶劑，難以 實現(xiàn)回收再利用，而且產(chǎn)品中有機試劑殘留嚴重。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種操作簡便、分離量大、綜合成本 低、綠色環(huán)保的快速純化制備異補骨脂素和補骨脂素的方法，通過一步分離純化即可從補 骨脂提取物中得到高純度異補骨脂素和補骨脂素單體化合物。
[0005] 本發(fā)明的方案如下： 一種從補骨脂中分離純化異補骨脂素和補骨脂素的方法，步驟為： 步驟1 :補骨脂藥材粉碎，加入無水甲醇加熱回流提取，將提取液過濾、減壓濃縮得浸 膏，將浸膏分散于水中，用石油醚萃取。合并石油醚層，減壓蒸餾得補骨脂浸膏。
[0006] 步驟2 :將補骨脂浸膏用甲醇溶解，經(jīng)過濾后，進行超臨界流體色譜分離，色譜柱 為二醇基色譜柱，流動相為超臨界流體，改性劑為甲醇。分離過程由紫外檢測器檢測，根據(jù) 檢測信號收集目標組分餾分。
[0007] 前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟1中無水甲醇加熱回流提取甲醇與藥材的 比例是5 :1~20 :1，最優(yōu)為10 :1 ;提取的次數(shù)為3次，回流時間為0. 5-2小時。
[0008] 前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟1中將浸膏分散于水中，水與浸膏的比例為 100 :1 ~10 :1，最優(yōu)為 50 :1。
[0009] 前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟1中用石油醚萃取，石油醚與水相的比例為 0. 5 :1~10 :1，最優(yōu)為1 :1，萃取次數(shù)為3次。
[0010] 前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟2中過濾所用濾膜為0.45 μ m濾膜。
[0011] 前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟2中超臨界流體為超臨界二氧化碳，超臨界 二氧化碳的壓力為9~14 MPa，最優(yōu)為lOMPa ;超臨界二氧化碳的流速為1-8倍柱體積/分 鐘，最優(yōu)為3倍柱體積/分鐘。
[0012] 前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟2中色譜柱溫度為35~50°C，最優(yōu)為40°C。
[0013] 前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟2中改性劑甲醇的比例為19^5%，最優(yōu)為2%。
[0014] 本發(fā)明一種從補骨脂提取物中分離純化異補骨脂素和補骨脂素的方法，具有如下 優(yōu)勢： (1)所得到的補骨脂提取物中有效成分含量高(從圖1可以看出）。
[0015] (2)不需要像已有技術(shù)一樣對樣品進行多次分離純化，只需要一個分離步驟即可 得到兩種高純度化合物，經(jīng)過一步分離純化就可以得到異補骨脂素和補骨脂素。
[0016] (3)純化過程中使用超臨界二氧化碳，不使用對環(huán)境有危害的有機溶劑，生產(chǎn)過程 綠色環(huán)保，所得產(chǎn)品無有害物質(zhì)殘留。
[0017] ( 4 )二氧化碳回收利用容易，能耗低，生產(chǎn)成本低。
[0018] (5)方法操作簡單，易于自動化控制，效率高，工藝周期短。
【附圖說明】
[0019] 圖1是實施例1超臨界流體色譜圖。
【具體實施方式】
[0020] 下面結(jié)合實施例和附圖詳細說明本發(fā)明的技術(shù)方案，但保護范圍不被此限制。實 施例中所用設(shè)備或原材料皆可從市場獲得。所用試劑均為分析純，購自天津試劑四廠，所用 二氧化碳為高純二氧化碳。
[0021] 實施例1 稱取補骨脂100克，用粉碎機粉碎，放入玻璃容器中，加入lOOOrnl無水甲醇加熱回流提 取2小時，提取3次，將提取液過濾、減壓濃縮得浸膏，將浸膏分散于200ml水中，用200ml 石油醚萃取3次。合并石油醚萃取液，減壓蒸餾回收石油醚得補骨脂浸膏。
[0022] 將補骨脂浸膏用甲醇溶解，經(jīng)過濾(所用濾膜為0. 45 μm濾膜)后，進行超臨界流體 色譜分離，色譜柱為二醇基色譜柱，色譜柱溫度為40°C。流動相為超臨界二氧化碳，流速為 3倍柱體積/分鐘，壓力為lOMPa。改進劑為甲醇，其比例為2%。分離過程由紫外檢測器檢 測，檢測波長為254nm，根據(jù)檢測信號收集目標組分餾分，分別得到異補骨脂素和補骨脂素。
[0023] 圖1是實施例1超臨界流體色譜圖。由此可知所得產(chǎn)物純度很高。
[0024] 實施例2 稱取補骨脂100克，用粉碎機粉碎，放入玻璃容器中，加入500ml無水甲醇加熱回流提 取2小時，提取3次，將提取液過濾、減壓濃縮得浸膏，將浸膏分散于100ml水中，用100ml 石油醚萃取3次。合并石油醚萃取液，減壓蒸餾回收石油醚得補骨脂浸膏。
[0025] 將補骨脂浸膏用甲醇溶解，經(jīng)過濾后，進行超臨界流體色譜分離，色譜柱為二醇基 色譜柱，色譜柱溫度為45°C。流動相為超臨界二氧化碳，流速為5倍柱體積/分鐘，壓力為 12MPa。改進劑為甲醇，其比例為5%。分離過程由紫外檢測器檢測，檢測波長為254nm，根據(jù) 檢測信號收集目標組分餾分，分別得到異補骨脂素和補骨脂素。
[0026] 實施例3 稱取補骨脂100克，用粉碎機粉碎，放入玻璃容器中，加入1500ml無水甲醇加熱回流提 取1. 5小時，提取3次，將提取液過濾、減壓濃縮得浸膏，將浸膏分散于300ml水中，用300ml 石油醚萃取3次。合并石油醚萃取液，減壓蒸餾回收石油醚得補骨脂浸膏。
[0027] 將補骨脂浸膏用甲醇溶解，經(jīng)過濾后，進行超臨界流體色譜分離，色譜柱為二醇基 色譜柱，色譜柱溫度為40°C。流動相為超臨界二氧化碳，流速為4倍柱體積/分鐘，壓力為 13MPa。改進劑為甲醇，其比例為1%。分離過程由紫外檢測器檢測，檢測波長為254nm，根據(jù) 檢測信號收集目標組分餾分，分別得到異補骨脂素和補骨脂素。
[0028] 經(jīng)HPLC面積歸一化法分析測試，實施例1-3所得到的各個組分的純度很高，均在 98%以上。
[0029] 經(jīng)NMR、MS鑒定，圖1中A為異補骨脂素，B為補骨脂素，其化學結(jié)構(gòu)如下：
【主權(quán)項】
1. 一種從補骨脂中分離純化異補骨脂素和補骨脂素的方法，其特征是，步驟為： 步驟1 :補骨脂藥材粉碎，加入無水甲醇加熱回流提取，將提取液過濾、減壓濃縮得浸 膏，將浸膏分散于水中，用石油醚萃取，合并石油醚層，減壓蒸餾得補骨脂浸膏； 步驟2 :將補骨脂浸膏用甲醇溶解，經(jīng)過濾后，進行超臨界流體色譜分離，色譜柱為二 醇基色譜柱，流動相為超臨界流體，改性劑為甲醇，分離過程由紫外檢測器檢測，根據(jù)檢測 信號收集目標組分餾分。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，步驟1中無水甲醇加熱回流提取甲醇與藥材 的比例是5 :1~20 :1，最優(yōu)為10 :1。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，提取的次數(shù)為3次，回流時間為0. 5-2小時。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，步驟1中將浸膏分散于水中，水與浸膏的比 例為100 :1~10 :1，最優(yōu)為50 :1。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，步驟1中用石油醚萃取，石油醚與水相的比 例為0. 5 :1~10 :1，最優(yōu)為1 :1，萃取次數(shù)為3次。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，步驟2中過濾所用濾膜為0. 45μm濾膜。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，步驟2中超臨界流體為超臨界二氧化碳，超 臨界二氧化碳的壓力為9~14MPa，最優(yōu)為lOMPa。8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征是，超臨界二氧化碳的流速為1-8倍柱體積/分 鐘，最優(yōu)為3倍柱體積/分鐘。9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，步驟2中色譜柱溫度為35~50°C，最優(yōu)為 4(TC〇10. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，步驟2中改性劑甲醇的比例為1%~5%，最優(yōu) 為2%。
【專利摘要】本發(fā)明屬于化工與制藥領(lǐng)域，涉及一種從補骨脂提取物中分離純化異補骨脂素和補骨脂素的方法。補骨脂藥材粉碎，加入無水甲醇加熱回流提取，將提取液過濾、減壓濃縮得浸膏，將浸膏分散于水中,用石油醚萃取。合并石油醚層，減壓蒸餾得補骨脂浸膏。將補骨脂浸膏用甲醇溶解，經(jīng)過濾后，進行超臨界流體色譜分離，色譜柱為二醇基色譜柱，流動相為超臨界流體，改性劑為甲醇。本發(fā)明純化過程中使用超臨界二氧化碳，不使用對環(huán)境有危害的有機溶劑，生產(chǎn)過程綠色環(huán)保，所得產(chǎn)品無有害物質(zhì)殘留。
【IPC分類】C07D493/04
【公開號】CN105315295
【申請?zhí)枴緾N201510179427
【發(fā)明人】霍秀菊
【申請人】霍秀菊
【公開日】2016年2月10日
【申請日】2015年4月16日