一種4’-o-甲基補(bǔ)骨脂查耳酮b單體的分離純化方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及一種4'-O-甲基補(bǔ)骨脂查耳酮B單體的分離純化方法，屬于中藥活性成分的分離純化【技術(shù)領(lǐng)域】。本發(fā)明是以豆科植物補(bǔ)骨脂的干燥成熟果實(shí)為原料，通過(guò)乙醇溶液提取、乙酸乙酯萃取、硅膠柱層析、聚酰胺柱層析、甲醇溶解過(guò)濾、高效制備液相色譜分離、產(chǎn)品回收得到4'-O-甲基補(bǔ)骨脂查耳酮B單體產(chǎn)品。本發(fā)明通過(guò)最適宜的工藝及參數(shù)條件，使產(chǎn)品中4'-O-甲基補(bǔ)骨脂查耳酮B的含量達(dá)到98%以上；整個(gè)工藝過(guò)程穩(wěn)定、操作簡(jiǎn)便、分離效率高，成本低廉，可實(shí)現(xiàn)大量高純度分離制備4'-O-甲基補(bǔ)骨脂查耳酮B單體。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種4'-O-甲基補(bǔ)骨脂查耳酮B單體的分離純化方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種植物化合物單體的制備方法，尤其是一種從補(bǔ)骨脂中提取 4' -0-甲基補(bǔ)骨脂查耳酮B單體的分離純化方法，屬于中藥活性成分的分離純化【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002] 補(bǔ)骨脂(學(xué)名：Psoralea corylifolia Linn.)又名：破故紙，婆固脂，胡韭子。 屬薔薇目，豆科一年生直立草本，高60150cm。葉為單葉，長(zhǎng)7_8mm ;葉柄長(zhǎng)2-4. 5cm，葉 寬卵形，花序腋生，有花10-30朵，花冠黃色或藍(lán)色，花瓣明顯具瓣柄，旗瓣倒卵形，莢果 卵形，花、果期7-10月。補(bǔ)骨脂為豆科植物補(bǔ)骨脂的干燥果實(shí)，主要含香豆素類(lèi)、黃酮 類(lèi)、單萜酚類(lèi)等化學(xué)成分，其中，4' -0-甲基補(bǔ)骨脂查耳酮B為補(bǔ)骨脂藥材中的黃酮類(lèi) 活性成分，具有治療皮膚病，抗腫瘤，殺蟲(chóng)抗菌的功效。4' -0-甲基補(bǔ)骨脂查耳酮B又叫 4' -O-Methylbroussochalcone B，分子式為 C21H22O4,分子量為 338. 4,結(jié)構(gòu)式如下：

【權(quán)利要求】
1. 一種4' -0-甲基補(bǔ)骨脂查耳酮B單體的分離純化方法，其特征在于以豆科植物補(bǔ)骨 脂的干燥成熟果實(shí)為原料，通過(guò)乙醇溶液提取、乙酸乙酯萃取、硅膠柱層析、聚酰胺柱層析、 甲醇溶解過(guò)濾、高效制備液相色譜分離、產(chǎn)品回收得到4' -0-甲基補(bǔ)骨脂查耳酮B單體產(chǎn) 品，具體包括如下工藝步驟： 1) 提取 將補(bǔ)骨脂藥材粉碎成1?4mm的粗粉，加入為藥材質(zhì)量8?10倍體積的乙醇溶液，提 取3?4次，每次2?3小時(shí)，回收乙醇，合并過(guò)濾液； 所述乙醇溶液的體積百分比濃度為90?95% ; 2) 萃取 將步驟1)所得的過(guò)濾液，加入等體積的乙酸乙酯萃取3?4次，分取上層溶液，濃縮至 干，得濃縮液； 3) 硅膠柱層析 將步驟2)所得的濃縮液加入8倍重量的硅膠拌樣，45°C干燥拌樣硅膠，用石油醚：乙酸 乙酯體積比5:1進(jìn)行洗脫，柱層析洗脫液45°C濃縮至干，得浸膏； 4) 聚酰胺柱層析 按照浸膏質(zhì)量：溶劑體積=lg:5?10ml，將步驟3)所得的浸膏加乙酸乙酯溶解，所得 的溶液加入4倍體積的聚酰胺拌樣，45 °C干燥拌樣聚酰胺，用二氯甲烷進(jìn)行洗脫，柱層析洗 脫液40 °C濃縮至干，得固體物； 5) 溶解過(guò)濾 按照固體物質(zhì)量：溶劑體積=lg:20?40ml，將步驟4)所得固體物加甲醇溶解，過(guò)濾溶 解液，過(guò)濾液即是制備4' -0-甲基補(bǔ)骨脂查耳酮B單體的原料； 6. HPLC制備 色譜柱填料為：C18填料； 流動(dòng)相為：甲醇-水溶液V/V=83 :17 ; 取步驟5)所得的過(guò)濾液進(jìn)樣，進(jìn)樣量以過(guò)濾液所含的干品重量計(jì)為2. 0-3. 0g/針，進(jìn) 行4' -0-甲基補(bǔ)骨脂查耳酮B單體的制備分離了，在線(xiàn)紫外監(jiān)測(cè)，檢測(cè)波長(zhǎng)為245nm，收集目 標(biāo)化合物制備溶液； 7) 產(chǎn)品回收 將步驟6)所得的HPLC制備溶液，回收甲醇，橙紅色晶體從剩余水溶液中析出，放冷過(guò) 濾即得4' -0-甲基補(bǔ)骨脂查耳酮B單體。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種4' -0-甲基補(bǔ)骨脂查耳酮B單體的分離純化方法，其特 征在于包括如下工藝步驟： 1) 提取 將補(bǔ)骨脂藥材45kg粉碎成1?4mm的粗粉，加入360L體積百分比濃度為90%的乙醇 溶液，提取3次，每次2小時(shí)，回收乙醇，合并過(guò)濾液，共20000ml ; 2) 萃取 將步驟1)所得的過(guò)濾液，加入等體積的乙酸乙酯萃取3次，分取上層溶液，濃縮至干， 得濃縮液5000ml ; 3) 硅膠柱層析 將步驟2)所得的濃縮液加入8倍重量的硅膠拌樣，45°C干燥拌樣硅膠，用石油醚：乙酸 乙酯體積比5:1進(jìn)行洗脫，柱層析洗脫液45°C濃縮至干，得浸膏100克； 4) 聚酰胺柱層析 將步驟3)所得的浸膏加500 ml乙酸乙酯溶解，所得的溶液加入4倍體積的聚酰胺拌 樣，45°C干燥拌樣聚酰胺，用二氯甲烷進(jìn)行洗脫，柱層析洗脫液40°C濃縮至干，得固體物20 克； 5) 溶解過(guò)濾 步驟4)所得固體物加入500ml甲醇溶解，過(guò)濾溶解液，得過(guò)濾液490ml ; 6. HPLC制備 采用填料為C18的色譜柱，柱規(guī)格為50cmX l〇cm ; 流動(dòng)相為：甲醇-水溶液V/V=87:13 ; 檢測(cè)波長(zhǎng)為245nm，室溫操作； 取步驟5)所得的過(guò)濾液進(jìn)樣，進(jìn)樣量以過(guò)濾液所含的干品重量計(jì)為2g/針，進(jìn)行 4' -0-甲基補(bǔ)骨脂查耳酮B單體的制備分離，在線(xiàn)紫外監(jiān)測(cè)，收集得到目標(biāo)化合物制備溶液 6000ml ； 7) 產(chǎn)品回收 步驟6)所得的HPLC制備溶液，回收甲醇，橙紅色晶體從剩余水溶液中析出，放冷過(guò)濾 即得4' -0-甲基補(bǔ)骨脂查耳酮B單體產(chǎn)品8. 0克； 整個(gè)生產(chǎn)流程用時(shí)約15天； 計(jì)算得產(chǎn)品收率為8. 0/45000X 100%=0. 018% ; 通過(guò)更換流動(dòng)相組分，利用反相分析型液相色譜RP-HPLC復(fù)檢產(chǎn)品純度，測(cè)得結(jié)果為 99.90%〇
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種4' -0-甲基補(bǔ)骨脂查耳酮B單體的分離純化方法，其特 征在于包括如下工藝步驟： 1) 提取 將補(bǔ)骨脂藥材60kg粉碎成1?4mm的粗粉，加入500L體積百分比濃度為95%的乙醇 溶液，提取3次，每次2小時(shí)，回收乙醇，合并過(guò)濾液，共15000ml ; 2) 萃取 將步驟1)所得的過(guò)濾液，加入等體積的乙酸乙酯萃取3次，分取上層溶液，濃縮至干， 得濃縮液6000ml ; 3) 硅膠柱層析 將步驟2)所得的濃縮液加入8倍重量的硅膠拌樣，45°C干燥拌樣硅膠，用石油醚：乙酸 乙酯體積比5:1進(jìn)行洗脫，柱層析洗脫液45°C濃縮至干，得浸膏150克； 4) 聚酰胺柱層析 將步驟3)所得的浸膏加1200ml乙酸乙酯溶解，所得的溶液加入4倍體積的聚酰胺拌 樣，45°C干燥拌樣聚酰胺，用二氯甲烷進(jìn)行洗脫，柱層析洗脫液40°C濃縮至干，得固體物30 克； 5) 溶解過(guò)濾 步驟4)所得固體物加入600ml甲醇溶解，過(guò)濾溶解液，得過(guò)濾液590ml ; 6. HPLC制備 采用填料為C18的色譜柱，柱規(guī)格為50cmX l〇cm ; 流動(dòng)相為：甲醇-水溶液V/V=87:13 ; 檢測(cè)波長(zhǎng)為245nm，室溫操作； 取步驟5)所得的過(guò)濾液進(jìn)樣，進(jìn)樣量以過(guò)濾液所含的干品重量計(jì)為2. 5g/針，進(jìn)行 4' -0-甲基補(bǔ)骨脂查耳酮B單體的制備分離，在線(xiàn)紫外監(jiān)測(cè)，收集得到目標(biāo)化合物制備溶液 8000ml ； 7) 產(chǎn)品回收 步驟6)所得的HPLC制備溶液，回收甲醇，剩余水溶液有大量的橙紅色晶體析出，放冷 過(guò)濾即得4' -0-甲基補(bǔ)骨脂查耳酮B單體產(chǎn)品12. 0克； 整個(gè)生產(chǎn)流程用時(shí)約12天； 計(jì)算得產(chǎn)品收率為12. 0/60000X 100%=0. 02% ; 通過(guò)更換流動(dòng)相組分，利用反相分析型液相色譜RP-HPLC復(fù)檢產(chǎn)品純度，測(cè)得結(jié)果為 99. 10%〇
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種4' -0-甲基補(bǔ)骨脂查耳酮B單體的分離純化方法，其特 征在于包括如下工藝步驟： 1) 提取 將補(bǔ)骨脂藥材80kg粉碎成1?4mm的粗粉，加入800L體積百分比濃度為95%的乙醇 溶液，提取4次，每次2小時(shí)，回收乙醇，合并過(guò)濾液，共20000ml ; 2) 萃取 將步驟1)所得的過(guò)濾液，加入等體積的乙酸乙酯萃取3次，分取上層溶液，濃縮至干， 得濃縮液9000ml ; 3) 硅膠柱層析 將步驟2)所得的濃縮液加入8倍重量的硅膠拌樣，45°C干燥拌樣硅膠，用石油醚：乙酸 乙酯體積比5:1進(jìn)行洗脫，柱層析洗脫液45°C濃縮至干，得浸膏250克； 4) 聚酰胺柱層析 將步驟3)所得的浸膏加2500ml乙酸乙酯溶解，所得的溶液加入4倍體積的聚酰胺拌 樣，45°C干燥拌樣聚酰胺，用二氯甲烷進(jìn)行洗脫，柱層析洗脫液40°C濃縮至干，得固體物45 克； 5) 溶解過(guò)濾 步驟4)所得固體物加入1800ml甲醇溶解，過(guò)濾溶解液，得過(guò)濾液1780ml ; 6. HPLC制備 采用填料為C18的色譜柱，柱規(guī)格為100CmX20cm ; 流動(dòng)相組成為：甲醇-水溶液V/V=87:13 檢測(cè)波長(zhǎng)為245nm，室溫操作； 取步驟5)所得的過(guò)濾液進(jìn)樣，進(jìn)樣量以過(guò)濾液所含的干品重量計(jì)為5. 0g/針，進(jìn)行 4' -0-甲基補(bǔ)骨脂查耳酮B單體的制備分離，在線(xiàn)紫外監(jiān)測(cè)，收集得到目標(biāo)化合物制備溶液 25000ml ； 7) 產(chǎn)品回收 步驟6)所得的HPLC制備溶液，回收甲醇，橙紅色晶體從剩余水溶液中析出，放冷過(guò)濾 即得4' -0-甲基補(bǔ)骨脂查耳酮B單體產(chǎn)品18. 0克； 整個(gè)生產(chǎn)流程用時(shí)約12天； 計(jì)算得產(chǎn)品收率為18. 0/80000 X 100%=0. 0225% ; 通過(guò)更換流動(dòng)相組分，利用反相分析型液相色譜RP-HPLC復(fù)檢產(chǎn)品純度，測(cè)得結(jié)果為 99.50%〇
5. 根據(jù)權(quán)利要求1-4中任意一項(xiàng)所述的一種4' -0-甲基補(bǔ)骨脂查耳酮B單體的分離純 化方法，其特征在于：所述反相分析型液相色譜RP-HPLC進(jìn)行純度復(fù)檢的色譜條件如下： 填料為C18，流動(dòng)相為甲醇-水溶液V/V=87:13,柱溫為30°C，流速為1. Oml/min，檢測(cè)波 長(zhǎng)為245nm。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1-4中任意一項(xiàng)所述的一種4' -0-甲基補(bǔ)骨脂查耳酮B單體的分離 純化方法，其特征在于：在進(jìn)行高效制備液相色譜分離前，通過(guò)液-質(zhì)聯(lián)用方法確定高效 液相色譜中4' -0-甲基補(bǔ)骨脂查耳酮B單體的峰形，即取步驟5)所得過(guò)濾溶液進(jìn)樣，進(jìn)行 4' -0-甲基補(bǔ)骨脂查耳酮B單體的制備分離，根據(jù)質(zhì)譜檢測(cè)結(jié)果，確定4' -0-甲基補(bǔ)骨脂查 耳酮B單體在液相色譜中對(duì)應(yīng)的峰形。
【文檔編號(hào)】C07C45/78GK104496783SQ201410839484
【公開(kāi)日】2015年4月8日 申請(qǐng)日期:2014年12月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月30日
【發(fā)明者】陳沖, 文煥松, 白蘭輝, 夏柯, 劉丁 申請(qǐng)人:成都普思生物科技有限公司