z), 1. 90-1. 99 (m, 2H), 1. 58-1. 74 (m, 6H)； 13C-NMR(100MHz, DMS0-d6): δ197. 6, 173. 1, 163. 8, 163. 7, 159. 7, 138. 9, 134. 8 (2), 134. 7, 131. 3, 130. 5, 130. 4, 130. 2, 128. 9, 126. 7(2), 114. 4, 111, 9, 108. 2, 102. 9, 79. 9, 70. 0, 51. 8 ,33. 4, 32. 7, 25. 7(2), 24. 1 (2) 〇
[0075] 2、藥效部分
[0076] 2· 1作用機制
[0077]Cx31誘導皮膚病產(chǎn)生機制的原理示意圖如圖1所示，由于Cx31蛋白的表達，誘導 了下游蛋白C26的激活，進而導致Bip/Hsp70蛋白的上調(diào)，從而上調(diào)激活蛋白AP-1水平， 介導JunB和c-Fos的表達，從而導致細胞無序繁殖生長，導致皮膚病。
[0078] 在本發(fā)明中通過阻斷激活蛋白AP-1的過度表達來治療基于Cx31靶點的銀屑病或 變異性紅斑角化病等皮膚病。
[0079] 2. 2檢測原理
[0080] 根據(jù)特定的信號轉(zhuǎn)導通路建立相應(yīng)的雙熒光素酶報告基因檢測細胞模型來進行 高通量的藥物篩選。報告基因質(zhì)粒（pAP-1-Luc)上含有螢火蟲熒光素酶報告基因（firefly luciferasegene)，報告基因由前面的TATA元素和不同順式作用元素（cis-acting elements)即轉(zhuǎn)錄因子的重復轉(zhuǎn)錄識別序列（responseelement)響應(yīng)元件增強子來控制。 針對AP-1重復的轉(zhuǎn)錄識別序列為7X(TGACTAA)。
[0081] 細胞外的刺激（AP-1的信號轉(zhuǎn)導系統(tǒng)一般采用PMA佛波酯來進行刺激），會激活細 胞內(nèi)的信號分子比如蛋白激酶和磷酸酶。很多信號轉(zhuǎn)導途徑在轉(zhuǎn)錄因子處匯聚，這些轉(zhuǎn)錄 因子與不同基因的特殊的增強子結(jié)合，并且調(diào)節(jié)這些基因的轉(zhuǎn)錄。信號通路轉(zhuǎn)導的激活可 以引起由這些增強子控制的luciferase報告基因的表達水平的變化，從而可以通過報告 基因的表達水平的變化來檢測信號通路的激活。
[0082] 用于進行藥物篩選時，主要是將報告質(zhì)粒進行轉(zhuǎn)染后，用備選化合物對細胞進行 處理，通過檢測報告基因的表達水平的變化來檢測化合物對AP-1信號通路的抑制作用。[0083] 2. 3實驗步驟：
[0084] (1)復蘇并培養(yǎng)HEK293細胞。
[0085] (2)取對數(shù)生長期的293細胞進行鋪板（1X104細胞/孔），37°C培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)， 是細胞貼壁。準備第二天進行轉(zhuǎn)染。
[0086] (3)第二天準備轉(zhuǎn)染的用的DNA混合物，進行細胞轉(zhuǎn)染，過夜孵育。
[0087] (4)棄舊培養(yǎng)基，用含有待篩藥物的培養(yǎng)基孵育細胞lh，然后用PMA(10ng/ml)激 活細胞，孵育3h。
[0088] (5)然后用雙熒光素酶檢測系統(tǒng)（promega)進行檢測。
[0089] (6)進行實驗數(shù)據(jù)分析。
[0090] 2. 4各實驗組的處理和實驗結(jié)果
[0091] 在本實驗中，共設(shè)置10組，分別為對照組、PMA(-)組以及化合物1-1組至化合物 1-8組。在對照組中，加入PMA，但不加入化合物1-1~1-8。PMA(-)組中既不加入PMA也 不加入化合物1-1~1-8?；衔?-1組至化合物1-8組在加入PMA激活細胞之后，分別加 入濃度為50μΜ的化合物1-1至化合物1-8。
[0092] 如圖2所示，圖2示出了化合物1-1~1-8的活性篩選數(shù)據(jù)圖，所用佛波酯（ΡΜΑ) 激活劑濃度為10ng/mL;對照組中加入佛波酯之后，ΑΡ-1活性為100% ;ΡΜΑ(_)組中ΑΡ-1 活性為13% ;化合物1-1組至化合物1-8組中，加入相應(yīng)的濃度為50μΜ的化合物1-1~ 1-8之后，ΑΡ-1的剩余活性在17-44%之間，S卩，對激活蛋白ΑΡ-1的表達的抑制率為 56% -83%。說明化合物1-1~1-8均對AP-1蛋白有很好的抑制作用，因此可以用于治療 基于Cx31靶點的銀屑病或變異性紅斑角化病等皮膚病。
[0093] 綜上，本發(fā)明提供的氘代二苯甲酮化合物通過抑制激活蛋白AP-1的表達，可以治 療基于Cx31靶點的銀屑病或變異性紅斑角化病等皮膚病。
[0094] 以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精 神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項】
1. 氘代二苯甲酮衍生物，其中，所述氘代二苯甲酮衍生物的分子結(jié)構(gòu)式為：其中，R1為：苯基、取代苯基、吡唑基、取代吡唑基、吡啶基、取代吡啶基、噻唑基、取代 噻唑基、噻吩基、取代噻吩基、苯并噻吩基、取代苯并噻吩基、苯并咪唑基、取代苯并咪唑基、 苯并異惡唑基、取代苯并異惡唑基、苯并噻唑基、取代苯并噻唑基、呋喃基或取代呋喃基，其 中，所述取代是指由以下基團中的至少一個取代：C1-C12烷氧基、羥基、氘代羥基、C1-C6烷 氧基、C1-C6烷基、C1-C12烷基、羧基或烷基保護的羧基、芐基、二苯甲基、三苯甲基、苯乙 基、4-甲基芐基、萘甲基或鹵素原子； R2為：C3-C7環(huán)烷基、C1-C12烷基、氘代C3-C7環(huán)烷基、氘代C1-C12烷基、氘代芳基、芳 烷基、芳?；⑼榛鶃喕酋；?、烷基磺?；渲?，所述C3-C7環(huán)烷基被任選的C1-C6烷基取 代； R3為：羧基、氘代羧基、氘代四唑基、四唑基、羧酸酯、酰胺、氘代酰胺或羧酸鹽； R4為：氫原子、鹵原子、羥基、或氘代羥基； X為：氧、NR5,其中，R5為羥基、氘代羥基、C1-C12烷基或CH2CH 2ND2。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的氘代二苯甲酮衍生物，其中，所述氘代二苯甲酮衍生物包括： 3_ {2- [3-氘代羥基-2, 3-二氫-1，2-苯并異惡唑-6-基）甲氧基]-5 [2-氘代羥基苯 基-4-氘代環(huán)戊氧基]-苯基}丙酸甲酯； 3_ {[2-氘代羥基-5-(2-氘代羥基-4-氘代環(huán)戊氧基苯甲酰基）]苯基}丙酸甲酯； 3_{[2-[4-硼酸芐甲氧基]-5-(2-氘代羥基-4-氘代環(huán)戊氧基苯甲酰基）]苯基}丙 酸甲酯； 3_ {2-異丙氧基-5-[(4-氘代羥基苯甲?；苯基}丙酰胺； 3_ {[2- [ (3-氘代羥基-1，2-苯并異惡唑-6-基）甲氧基]-5- [ (2-氘代羥基-4-氘代 環(huán)戊氧基苯甲酰基）]苯基}氘代丙酸； 3_ {[2-氘代羥基-5- (2-氘代羥基-4-氘代環(huán)戊氧基苯甲酰基）]苯基}氘代丙酸； 3_ {2-異丙氧基-5-[(2-氘代羥基-4-氘代環(huán)戊氧基苯甲?；苯基}氘代丙酸； 3_ {5- [1-(氘代羥亞胺基）-1- (4-氘代環(huán)戊氧-2-氘代羥基苯基）甲叉基]} -2-氘代 羥基苯基）氘代丙酸；以及 3_ {[2-[4-硼酸芐甲氧基]-5-(2-氘代羥基-4-氘代環(huán)戊氧基苯甲?；苯基}丙酸 甲酯。3. 氘代二苯甲酮衍生物在制備治療連接蛋白CX31介導的皮膚病的藥物中的應(yīng)用，其 中，所述氘代二苯甲酮衍生物的分子結(jié)構(gòu)式為：其中，R1為：苯基、取代苯基、吡唑基、取代吡唑基、吡啶基、取代吡啶基、噻唑基、取代 噻唑基、噻吩基、取代噻吩基、苯并噻吩基、取代苯并噻吩基、苯并咪唑基、取代苯并咪唑基、 苯并異惡唑基、取代苯并異惡唑基、苯并噻唑基、取代苯并噻唑基、呋喃基或取代呋喃基，其 中，所述取代是指由以下基團中的至少一個取代：C1-C12烷氧基、羥基、氘代羥基、C1-C6烷 氧基、C1-C6烷基、C1-C12烷基、羧基或烷基保護的羧基、芐基、二苯甲基、三苯甲基、苯乙 基、4-甲基芐基、萘甲基或鹵素原子； R2為：C3-C7環(huán)烷基、C1-C12烷基、氘代C3-C7環(huán)烷基、氘代C1-C12烷基、氘代芳基、芳 烷基、芳?；?、烷基亞磺?；⑼榛酋；渲?，所述C3-C7環(huán)烷基被任選的C1-C6烷基取 代； R3為：羧基、氘代羧基、氘代四唑基、四唑基、羧酸酯、酰胺、氘代酰胺或羧酸鹽； R4為：氫原子、鹵原子、羥基、或氘代羥基； X為：氧、NR5,其中，R5為羥基、氘代羥基、C1-C12烷基或CH2CH 2ND2。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其中，所述氘代二苯甲酮衍生物包括： 3_ {2- [3-氘代羥基-2, 3-二氫-1，2-苯并異惡唑-6-基）甲氧基]-5 [2-氘代羥基苯 基-4-氘代環(huán)戊氧基]-苯基}丙酸甲酯； 3_ {[2-氘代羥基-5-(2-氘代羥基-4-氘代環(huán)戊氧基苯甲?；苯基}丙酸甲酯； 3_ {[2-[4-硼酸芐甲氧基]-5-(2-氘代羥基-4-氘代環(huán)戊氧基苯甲酰基）]苯基}丙酸 甲酯； 3_ {2-異丙氧基-5-[(4-氘代羥基苯甲酰基）]苯基}丙酰胺； 3_ {[2- [ (3-氘代羥基-1，2-苯并異惡唑-6-基）甲氧基]-5- [ (2-氘代羥基-4-氘代 環(huán)戊氧基苯甲?；苯基}氘代丙酸； 3_ {[2-氘代羥基-5- (2-氘代羥基-4-氘代環(huán)戊氧基苯甲?；苯基}氘代丙酸； 3_ {2-異丙氧基-5-[(2-氘代羥基-4-氘代環(huán)戊氧基苯甲酰基）]苯基}氘代丙酸； 3_ {5- [1-(氘代羥亞胺基）-1- (4-氘代環(huán)戊氧-2-氘代羥基苯基）甲叉基]} -2-氘代 羥基苯基）氘代丙酸；以及 3_ {[2-[4-硼酸芐甲氧基]-5-(2-氘代羥基-4-氘代環(huán)戊氧基苯甲酰基）]苯基}丙酸 甲酯。5. 根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的應(yīng)用，其特征在于，所述連接蛋白CX31介導的皮膚病包 括可變性紅斑皮膚角化病或銀屑病。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物包含：所述氘代二苯甲酮衍生 物、藥學上可接受的載體和/或賦形劑。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物的劑型選自片劑、膠囊劑、丸劑、 顆粒劑、散劑、合劑、糖漿、口服液、注射劑或它們的組合。8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物的給藥方式包括：口服、注射、植 入、外用、噴霧、吸入或它們的組合。
【專利摘要】本發(fā)明提供了氘代二苯甲酮化合物及其在制備治療連接蛋白CX31介導的皮膚病的藥物中的應(yīng)用。實驗結(jié)果表明：在化合物I-1組至化合物I-8組中，加入化合物I-1～I-8之后，AP-1的剩余活性在17-44％之間，即，對激活蛋白AP-1的表達的抑制率為56％-83％。因此，本發(fā)明提供的氘代二苯甲酮化合物通過抑制激活蛋白AP-1的表達，可以治療基于Cx31靶點的銀屑病或變異性紅斑角化病等皮膚病。
【IPC分類】C07F5/04, A61P17/00, C07C235/80, A61K31/216, A61K31/165, C07C251/40, A61K31/423, C07C59/90, C07D261/20, C07C69/738, A61K31/69, A61K31/192, A61P17/06
【公開號】CN105272931
【申請?zhí)枴緾N201410360269
【發(fā)明人】饒子和, 陳衛(wèi)強, 張灼華, 趙佩佩, 付文華, 程轉(zhuǎn)紅, 劉慧娟
【申請人】天津國際生物醫(yī)藥聯(lián)合研究院
【公開日】2016年1月27日
【申請日】2014年7月25日