物和/或組合物可提供于包含所述化合物和/或組合物的試劑 盒中。因此，在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物和/或組合物提供于試劑盒中。
[0230] 本領(lǐng)域技術(shù)人員僅使用常規(guī)實驗就可以識別或能夠確定本文所述的本發(fā)明的特 定實施方案的許多等效物。所述等效物打算在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
[0231] 本發(fā)明另外通過以下非限制性實施例描述。 實施例
[0232] 下文提供實施例來幫助更完全理解本發(fā)明。以下實施例用于說明制造和實踐本發(fā) 明的示例性模式。然而，本發(fā)明的范圍不應(yīng)解釋為限于這些實施例中公開的特定實施方案， 它們僅僅是說明性的。
[0233] 實施例1 :制備化合物A。
[0234] 如下文示意性說明地來制備化合物A。
[0235]
[0236] 制備（E)AZ) -2- (7-氧代呋喃并[3, 4-b]吡嗪-5 (7H)-亞基）乙酸叔丁酯（化合 物1)
[0237] 向5. 05g(33. 63mmol)商購2, 3-吡嗪二羧酸酐于300mL01(313中的攪拌溶液中 添加12.34g(33.63mm〇l)(叔丁氧羰基亞甲基）-三苯膦。將所得溶液加熱至62°C持續(xù)2 天。在真空中濃縮反應(yīng)混合物并且殘余物經(jīng)硅膠急驟管柱色譜法純化（通過薄層色譜法監(jiān) 測）并且用l:l(v/V)己烷：乙酸乙酯洗脫。蒸發(fā)所收集的級分獲得2.99g(36%產(chǎn)率）呈 幾何異構(gòu)體混合物（約1:1)形式的（EV(Z)-2-(7-氧代呋喃并[3,4-b]吡嗪-5(7H)_亞 基）乙酸叔丁酯（化合物1)，其未經(jīng)分離ANMR(CDC13, 300MHz) :Sppni 9. 03 (d，J= 2. 4Hz, 1H), 8. 96 (d,J= 2. 4Hz, 1H), 8. 92 (d,J= 2. 4Hz, 1H), 8. 90 (d,J= 2. 4Hz, 1H), 6. 32 ( s, 2H), 1. 58(s, 18H) 〇
[0238] 制備2- (8-氧代-7, 8-二氫吡嗪并[2, 3-d]噠嗪-5-基）乙酸叔丁酯（化合物2)
[0239] 向 9. 42g(37. 99mmol) (E)AZ) -2- (7-氧代呋喃并[3, 4-b]吡嗪-5 (7H)-亞基）乙 酸叔丁酯（化合物1)于600mL乙醇中的攪拌溶液中添加1. 25mL(39. 90mmol)肼。使所得溶 液達到80°C持續(xù)3小時。接著，在真空中濃縮反應(yīng)混合物并且殘余物經(jīng)硅膠急驟管柱色譜 法純化（通過薄層色譜法監(jiān)測）并且用19:1 (v/v)二氯甲烷：甲醇洗脫。蒸發(fā)所收集的級分 獲得7. 78g(78 %產(chǎn)率）2-(8-氧代-7, 8-二氫吡嗪并[2, 3-d]噠嗪-5-基）乙酸叔丁酯（化 合物 2)NMR(CDC13, 300MHz) :S_ 10. 67(brs, 1H)，9. 06 (d,J= 2. 1Hz, 1H)，9. 04 (d，J =2. 1Hz，1H)，4. 02 (s，2H)，1. 43 (s，9H)。
[0240] 制備2-(8-氧代-7-((5-(三氟甲基）苯并[d]噻唑-2-基）甲基）-7, 8-二氫吡 嗪并[2, 3-d]噠嗪-5-基）乙酸叔丁酯（化合物4)
[0241] 向 7. 78g(29. 58mmol) 2-(8-氧代-7, 8-二氫吡嗪并[2, 3-d]噠嗪-5-基）乙酸叔 丁酯（化合物2)于300mLDMF中的攪拌溶液中添加3. 49g(31. 06mmol)叔丁醇鉀。所得反 應(yīng)混合物在環(huán)境溫度下攪拌0. 5小時。接著，添加7. 80g(31. 06mmol)2-(氯甲基）-5-(三 氟甲基）苯并[d]噻唑（化合物3)于20mLDMF中的溶液且在環(huán)境溫度下攪拌所得反應(yīng) 混合物隔夜。接著將反應(yīng)混合物分配于乙酸乙酯與水之間，分離各層，并且用大量水洗滌 乙酸乙酯層（3x)。有機層經(jīng)Na2S04干燥，過濾并且在真空中濃縮。殘余物經(jīng)硅膠急驟管 柱色譜法純化（通過薄層色譜法監(jiān)測）并且用3:1 (v/v)己烷：乙酸乙酯至1:1 (v/v)己 烷：乙酸乙酯的梯度洗脫。所獲得的殘余物接著再次進行硅膠色譜法并且用49:l(v/v) 二氯甲烷：甲醇洗脫。蒸發(fā)所收集的級分獲得6.88g(48%產(chǎn)率）2-(8_氧代-7-((5-(三 氟甲基）苯并[d]噻唑-2-基）甲基）-7,8_二氫吡嗪并[2, 3-d]噠嗪-5-基）乙酸 叔丁酯（化合物 4),HNMR(CDC13, 300MHz) :S_ 9. 08 (d，J= 2. 1Hz，1H)，9. 04 (d，J= 2. 1Hz, 1H), 8. 27 (s, 1H), 7. 94 (d,J= 8. 4Hz, 1H), 7. 61 (d,J= 8. 4Hz, 1H), 5. 89 (s, 2H), 4. 04 (s, 2H), 1. 42(s, 9H) 〇
[0242] 制備2-(8-氧代-7-((5-(三氟甲基）苯并[d]噻唑-2-基）甲基）-7, 8-二氫吡 嗪并[2, 3-d]噠嗪-5-基）乙酸（化合物A)
[0243] 向 6. 0g(12. 55mmol)2-(8-氧代 _7-((5-(三氟甲基）苯并-[d]噻唑-2-基） 甲基）-7,8_二氫吡嗪并[2,3-d]噠嗪-5-基）乙酸叔丁酯（化合物4)于41mLCH2C12 中的攪拌溶液中添加82mLTFA。所得反應(yīng)混合物在環(huán)境溫度下攪拌1小時。接著，在真 空中濃縮反應(yīng)混合物并且將殘余物分配于乙酸乙酯與1.0MK0H水溶液之間。分離各層 并且用乙酸乙酯（2x)萃取水層。用濃HC1將水層酸化至pH~2并且接著用乙酸乙酯 (3x)萃取。將來自第二次萃取的有機物經(jīng)Na2S04干燥，過濾并且在真空中濃縮。殘余物 經(jīng)硅膠急驟管柱色譜法純化（通過薄層色譜法監(jiān)測）并且用19 :l(v/v)二氯甲烷：含 有1% (按體積計）乙酸的甲醇洗脫。蒸發(fā)所收集的級分獲得2. 30g(44%產(chǎn)率）呈固 體狀的2-(8-氧代-7-((5-(三氟甲基）苯并[d]噻唑-2-基）甲基）-7, 8-二氫吡嗪 并[2, 3-d]噠嗪-5-基）乙酸（化合物A),HNMR(DMS0-d6, 300MHz) :Sppn 9. 26(d，J= 2. 1Hz, 1H), 9. 22 (d,J= 2. 1Hz, 1H), 8. 37 (s, 1H), 8. 35 (d,J= 8. 4Hz, 1H), 7. 79 (d,J= 8. 4Hz, 1H), 5. 88 (s, 2H), 4. 03 (s, 2H) ;m.p. = 192 - 193°C。
[0244] 實施例2 :化合物A的替代制備。
[0245]
[0246] 制備2-(碘甲基）-5-(三氟甲基）苯并[d]噻唑（化合物5)
[0247] 向10.798(42.97臟〇1)2-(氯甲基）-5-(三氟甲基）苯并[(1]噻唑（化合物3)于 86mL丙酮中的攪拌溶液中添加7. 40g(49. 42mmol)碘化鈉。將所得反應(yīng)混合物加熱至55°C 持續(xù)1小時。將反應(yīng)混合物冷卻至環(huán)境溫度并且在真空中濃縮。將殘余物分配于EtOAc與 水之間，分離各層，并且用水（lx)洗滌有機層?；厥盏挠袡C層接著用1.0MNa2S203處理并 且劇烈攪拌15分鐘。接著分離各層并且將有機層用水（lx)和鹽水（lx)依序洗滌。有機 層經(jīng)Na2S04干燥，過濾并且在真空中濃縮獲得14. 28g(97%粗產(chǎn)率）2-(碘甲基）-5-(三氟 甲基）苯并[d]噻唑（化合物5)，其未經(jīng)進一步純化即使用NMR(⑶Cl3, 300MHz) :S_ 8. 26 (s，1H)，7. 95 (d，J= 8. 4Hz，1H)，7. 66 (d，J= 8. 4Hz，1H)，4. 80 (s，2H)。
[0248] 制備3-(甲氧羰基）吡嗪-2-羧酸（化合物6)
[0249] 將12. 0g(79. 95mmol)2, 3-吡嗪二羧酸酐于282mLMeOH中的溶液加熱至65°C隔 夜。將反應(yīng)混合物冷卻至環(huán)境溫度并且在真空中濃縮。向所獲得的殘余物中添加水，接著 緩慢的添加固體NaHC03。在氣體停止逸出后，用EtOAc(lx)萃取水層。接著通過添加濃 HC1將水層酸化至pH2。水層用Et0Ac(2x)萃取并且用鹽水（lx)洗滌來自第二次萃取的 經(jīng)合并有機物。有機層經(jīng)Na2S04干燥，過濾并且在真空中濃縮獲得12. 41g(85 %粗產(chǎn)率） 呈白色粉末狀的3-(甲氧羰基）吡嗪-2-羧酸（化合物6)，其未經(jīng)進一步純化即使用 NMR(DMS0, 300MHz) :S_8. 91 (d，J= 2. 7Hz，1H)，8. 89 (d，J= 2. 7Hz，1H)，3. 91 (s，3H)。
[0250] 制備2- (8-氧代-7, 8-二氫吡嗪并[2, 3-d]噠嗪-5-基）乙酸叔丁酯（化合物2)
[0251] 在 1 號燒瓶中，用 12. 53g(77. 28mmol)CDI緩慢處理 12. 23g(67. 22mmol)3-(甲氧 羰基）吡嗪-2-羧酸（化合物6)于88mLDMF中的溶液。反應(yīng)混合物在環(huán)境溫度下攪拌2 小時。
[0252] 在單獨燒瓶（2號燒瓶）中，向147mL冷卻至0 °C的DMF中逐份添加 8. 32g(87. 39mmol)MgCl2。在 0°C下攪拌 5 分鐘后，添加 13. 5mL(87. 39mmol)丙二酸單叔丁 酯和37. 4mL(269mmol)三乙胺，并且在環(huán)境溫度下攪拌所得反應(yīng)混合物2小時。2小時后， 將1號燒瓶的內(nèi)容物添加至2號燒瓶中，并且在環(huán)境溫度下攪拌經(jīng)合并的反應(yīng)混合物隔夜。 接著，將反應(yīng)混合物倒入冷卻至〇°C的1. 0MHC1水溶液中并且攪拌15分鐘。向混合物中添 加Et20,分離各層，并且醚層用水（lx)、NaHC03飽和水溶液（lx)、水（lx)和鹽水（lx)依序 洗滌。有機有機層經(jīng)Na2S04干燥，過濾并且在真空中濃縮獲得粗3- (3-(叔丁氧基）-3-氧 代丙?；┻拎?2-羧酸甲酯（化合物7)，其未經(jīng)進一步純化即使用。
[0253] 將粗3-(3-(叔丁氧基）-3-氧代丙酰基）吡嗪-2-羧酸甲酯（化合物7)溶解于 250mLMeOH中且將所得溶液冷卻至0°C。接著，以逐滴方式添加2. 2mL(70. 58mmol)肼且將 反應(yīng)混合物升溫至環(huán)境溫度持續(xù)1小時。1小時后，在真空中濃縮反應(yīng)混合物并且殘余物 經(jīng)硅膠急驟管柱色譜法純化（通過薄層色譜法監(jiān)測）并且用19 :l(v/v)二氯甲烷：甲醇洗 脫。蒸發(fā)所收集的級分獲得黃色固體，其經(jīng)在EtOAc中再結(jié)晶進一步純化獲得13. 23g(75% 產(chǎn)率）2-(8_氧代-7, 8-二氫吡嗪并[2, 3-d]噠嗪-5-基）乙酸叔丁酯（化合物2) NMR(CDC13, 300MHz) :Sppn 10. 3(brs，1H)，9. 06 (d，J= 2. 1Hz，1H)，9. 04 (d，J= 2. 1Hz，1H) ，4. 02(s，2H), 1. 43(s，9H)。
[0254] 制備2-(8-氧代-7-((5-(三氟甲基）苯并[d]噻唑-2-基）甲基）-7, 8-二氫吡 嗪并[2, 3-d]噠嗪-5-基）乙酸叔丁酯（化合物4)
[0255] 向 2. 5g(9. 54mmol) 2- (8-氧代-7, 8-二氫吡嗪并[2, 3-d]噠嗪-5-基）乙酸叔丁 酯（化合物2)于67mLNMP中的劇烈攪拌溶液中添加3. 12g(9. 09mmol) 2-(碘甲基）-5-(三 氟甲基）苯并[d]噻唑（化合物5)和1. 51g(10. 9mmol)K2C03。遮住所得反應(yīng)混合物免受光 照并且在環(huán)境溫度下攪拌5小時。接著，向反應(yīng)混合物中添加Et20和水，分離各層，并且用 Et20(lx)萃取水層。經(jīng)合并的醚層接著fflH20(lx)、1.0MK0H(lx)、1.0MNa2S203 (lx)、1.0M HC1 (lx)和鹽水（lx)依序洗滌。有機層經(jīng)Na2S04干燥，過濾并且在真空中濃縮。殘余物經(jīng) 硅膠急驟管柱色譜法純化（通過薄層色譜法監(jiān)測）并且用49:1 (v/v)二氯甲烷：甲醇洗 脫。蒸發(fā)所收集的級分獲得4.03(93%產(chǎn)率）2-(8-氧代-7-((5-(三氟甲基）苯并[(1]噻 唑-2-基）甲基）-7, 8-二氫吡嗪并[2, 3-d]噠嗪-5-基）乙酸叔丁酯（化合物4)。
[0256] 制備2-(8-氧代-7-((5-(三氟甲基）苯并[d]噻唑-2-基）甲基）-7, 8-二氫吡 嗪并[2, 3-d]噠嗪-5-基）乙酸（化合物A)
[0257] (將存在于兩個獨立燒瓶中的化合物4脫保護，但是在處理和純化之前將兩份反 應(yīng)混合物合并在一起）。
[0258] 在一個燒瓶中，將3. 09g(6. 49mmol)2-(8-氧代-7-((5-(三氟甲基）苯并[d]噻 唑-2-基）甲基）-7, 8-二氫吡嗪并[2, 3-d]噠嗪-5-基）乙酸叔丁酯（化合物4)溶解于 30mL甲酸（水中88% )和3.OmL水中。在單獨燒瓶中，將4. 95g(10. 37mmol)化合物4溶 解于48mL甲酸（水中88% )和5.OmL水中。反應(yīng)混合物單獨在環(huán)境溫度下攪拌22小時。 將反應(yīng)混合物在真空中濃縮并且合并殘余物。將經(jīng)合并的殘余物分配于Et20與NaHCOjt 和水溶液之間，分離各層，并且用Et20(lx)萃取水層。通過添加濃HC1將水層酸化至pH2 并且用Et0Ac(3x)萃取。將來自第二次萃取的有機層經(jīng)Na2S04干燥，過濾并且在真空中濃 縮。殘余物經(jīng)硅膠急驟管柱色譜法純化（通過薄層色譜法監(jiān)測）并且用97 :3(v/v)二氯 甲烷：含有1%AcOH的甲醇洗脫。蒸發(fā)所收集的級分獲得5. 29g(75%產(chǎn)率）呈固體狀的 2_(8-氧代-7-((5-(三氟甲基）苯并[d]噻唑-2-基）甲基）-7, 8-二氫吡嗪并[2, 3-d] 噠嗪-5-基）乙酸（化合物A)。固體可經(jīng)從MeOH再結(jié)晶進一步純化獲得灰白色固體： m.p. =210-211。(：。4NMR(丙酮-d6, 400MHz) :5_ 9.19 (d，J= 2.0Hz，1H)，9.17 (d，J =2. 0Hz, 1H), 8. 30-8. 27 (m, 2H), 7. 74 (dd,J= 8Hz, 1. 2Hz, 1H), 5. 90 (s, 2H), 4. 12 (s, 2H)； ESI-MS422(M+H)+;m.p. =210-211°C。
[0259] 實施例3:制備化合物8。
[0260] 如下制備下文所示的化合物8 :
[0261]
[0262] 重復(fù)針對化合物4所述的制備，但采用試劑5-氯_2_(氯甲基）_苯并[d]噻唑代 替2-(氯甲基）-5-(三氟甲基）苯并[d]噻唑，使用與上文相同的摩爾比例。在這一情形 中，獲得的最終產(chǎn)物為2-(7-((5-氯苯并[d]噻唑-2-基）甲基）-8-氧代-7, 8-二氫吡嗪 并[2, 3-d]噠嗪-5-基）乙酸叔丁酯（化合物 8)，75%產(chǎn)率NMR(CDC13, 300MHz) :Sppni 9. 08 (s, 1H), 9. 05 (s, 1H), 8. 00 (s, 1H), 7. 74 (d,J= 8. 7Hz, 1H), 7. 36 (d,J= 8. 7Hz, 1H), 5. 8 7 (s, 2H