一種含黃芪甲苷藥物分離制備及定性、定量測試前處理方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種藥物分離制備及定性、定量前處理方法，具體涉及一種含黃芪甲苷藥物在分離制備及定性、定量測試前的前處理方法。
【背景技術(shù)】
[0002]黃苗是常用中藥，包括豆科植物亞歷山大黃苗(AstragalusalexandrinusBoiss)根、深裂黃苗如tragalus dissectus 的根、膜莢黃苗 dtragalusmembranaceus(Fisch.)Bungede)的根、綿毛黃苗(Astragalussieversianus Pal1.)的根、多刺黃苗Astragalus spinosus Vahl地上部分。主要成分包括阜苷、黃酮及多糖等，而黃苗甲苷
而)是皂苷類的主要成分之一。具有顯著降低血糖、糖化血紅蛋白和尿蛋白的作用；可降低腎皮質(zhì)和血清中的AGEs、具有抗氧化作用；對醛糖還原酶有抑制作用；抑制系膜細(xì)胞增生、減輕腎臟肥大的作用；增強機體免疫力、提高機體的抗病能力、抗病毒作用、抗應(yīng)激功效等?？捎糜陬A(yù)防和治療糖尿病腎病。
[0003]目前，處方中包含黃芪的藥物種類及數(shù)目越來越多，而黃芪甲苷是黃芪中的主要指標(biāo)成分之一，常作為定性定量指標(biāo)。若直接對其進行分析，則因雜質(zhì)干擾太大而不能滿足分析的要求?！吨袊幍洹?010版一部黃芪藥材項下黃芪甲苷的前處理包括索氏提取、蒸干后水溶解、正丁醇萃取、氨試液洗滌、大孔樹脂柱層析等過程，該方法具有操作繁瑣、處理效率低、準(zhǔn)確度低、重復(fù)性差等缺點。《香港中藥材標(biāo)準(zhǔn)》中雖然對黃芪甲苷的處理方法進行了改進，用甲醇超聲取代索氏提取的方法，但依然采用正丁醇萃取等操作，依然具有操作繁瑣、重復(fù)性差等缺點。實踐證明，萃取是決定準(zhǔn)確度、重復(fù)性結(jié)果及處理效率最重要的關(guān)鍵步驟，在萃取過程中，容易產(chǎn)生乳化、分層不明顯等現(xiàn)象影響結(jié)果的準(zhǔn)確度。因此，兩種法定前處理方法均未避免萃取這一關(guān)鍵步驟，因此均存在上述缺陷。
[0004]發(fā)明人根據(jù)黃芪甲苷的結(jié)構(gòu)特征，采用弱堿性溶液去除有機酸類、酚類等物質(zhì)；再用較低濃度的乙醇溶液洗脫層析柱，繼續(xù)除去一部分雜質(zhì)，達到消除雜質(zhì)干擾、實現(xiàn)分離制備及定性、定量分析的目的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是提供一種含黃芪甲苷藥物的前處理方法，克服目前黃芪甲苷前處理方法中存在的缺陷。
[0006]本發(fā)明運用一種簡便易行、準(zhǔn)確度高、重復(fù)性好的方法對其進行處理，主要涉及黃芪甲苷的純化過程。
[0007]為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下:
1.黃芪甲苷提取物的制備:取含黃芪甲苷藥物，采用常規(guī)提取工藝提取、濃縮獲得黃芪甲苷提取物浸膏或溶液。
[0008]2.上樣液的制備:取含黃芪甲苷的浸膏或溶液，加入10~100倍的氨試液，搖勻，即得;
3.純化:將上樣液轉(zhuǎn)移至大孔樹脂中，至上樣完畢，用1~10倍柱體積稀乙醇沖洗樹脂柱，棄去洗脫液；
4.收集:待稀乙醇除雜完畢，再用較高濃度乙醇沖洗樹脂柱，收集洗脫液，獲得黃芪甲苷。
[0009]上述步驟I中所述的含黃芪甲苷提取物浸膏為含黃芪甲苷藥物經(jīng)提取制備所得，可采用已知的超聲提取、回流提取、索氏提取等多種提取工藝。
[0010]上述步驟2中所述的氨試液為市售常規(guī)試劑。
[0011]上述步驟3大孔樹脂為市售通用規(guī)格，型號可包括AB-8、HPD100, D-10U HP20、H20、D1400。
[0012]上述步驟3所述的稀乙醇為市售乙醇加水稀釋，濃度為10?50%，優(yōu)選40%。
[0013]上述步驟4所述的高濃度乙醇為市售乙醇加水稀釋，濃度為60?95%，優(yōu)選70%。
[0014]通過上述過程制成的黃芪甲苷可用于含黃芪藥物的分離制備及定性、定量測定。
[0015]本發(fā)明具有以下有益效果:
1.含黃芪藥物的前處理采用一次柱層析分離即可實現(xiàn)，制得的黃芪甲苷可用于分離制備及定性、定量測定，相比于《中國藥典》2010版一部、《香港中藥材標(biāo)準(zhǔn)》及其它文獻方法操作更為簡便；
2.本發(fā)明方法制得的黃芪甲苷在開展定性、定量測試研究中重復(fù)性好，加樣回收率合格，優(yōu)于其它已知的前處理工藝。
【附圖說明】
[0016]圖1為黃芪甲苷結(jié)構(gòu)式。
[0017]圖2為黃芪甲苷專屬性試驗(1.空白溶劑；2.陰性對照；3.黃芪甲苷對照品；4.陽性供試品)。
[0018]圖3為黃芪甲苷線性關(guān)系結(jié)果。
[0019]圖4為實施例1結(jié)果。
[0020]圖5為實施例2結(jié)果。
[0021]圖6為實施例3結(jié)果。
[0022]圖7為實施例4結(jié)果。
[0023]圖8為實施例5結(jié)果。
[0024]圖9為實施例6結(jié)果。
[0025]圖10為黃芪甲苷薄層定性檢測結(jié)果。
【具體實施方式】
[0026]實施例1:
取含黃芪甲苷的浸膏l(xiāng)g，加1ml氨試液，搖勻，制成上樣液，轉(zhuǎn)移至D1400大孔樹脂(濕法裝柱，直徑1.0 X 30cm,柱體積24ml)上，用24ml (I倍柱體積)10%乙醇洗脫樹脂，再用120ml (5倍柱體積)60%乙醇洗脫，收集洗脫液，即得。
[0027]實施例2:
取含黃芪甲苷的浸膏l(xiāng)g，加50ml氨試液，搖勻，制成上樣液，轉(zhuǎn)移至HPD100大孔樹脂(濕法裝柱，直徑1.0 X 30cm,柱體積24ml)上，用60ml (2.5倍柱體積)30%乙醇洗脫樹脂，再用24ml (I倍柱體積)95%乙醇洗脫，收集洗脫液，即得。
[0028]實施例3:
取含黃芪甲苷的浸膏l(xiāng)g，加10ml氨試液，搖勻，制成上樣液，轉(zhuǎn)移至HP20大孔樹脂(濕法裝柱，直徑1.0 X 30cm,柱體積24ml)上，用120ml (5倍柱體積)30%乙醇洗脫樹脂，再用60ml (2.5倍柱體積)80%乙醇洗脫，收集洗脫液即得。
[0029]實施例4:
取含黃芪甲苷的浸膏l(xiāng)g，加10ml氨試液，搖勻，制成上樣液，轉(zhuǎn)移至H20大孔樹脂(濕法裝柱，直徑1.0 X 30cm,柱體積24ml)上，用240ml (10倍柱體積)50%乙醇洗脫樹脂，再用120ml (5倍柱體積)70%乙醇洗脫，收集洗脫液，即得。
[0030]實施例5:
取含黃芪甲苷的浸膏l(xiāng)g，加10ml氨試液，搖勻，制成上樣液，轉(zhuǎn)移至DlOl大孔樹脂(濕法裝柱，直徑1.0 X 30cm,柱體積24ml)上，用120ml (5倍柱體積)40%乙醇洗脫樹脂，再用120ml (5倍柱體積)70%乙醇洗脫，收集洗脫液，即得。
[0031]實施例6:
取含黃芪甲苷的浸膏l(xiāng)g，加10ml氨試液，搖勻，制成上樣液，轉(zhuǎn)移至AB-8大孔樹脂(濕法裝柱，直徑1.0 X 30cm,柱體積24ml)上，用240ml (10倍柱體積)50%乙醇洗脫樹脂，再用240ml (10倍柱體積)80%乙醇洗脫，收集洗脫液，即得。
[0032]黃芪甲苷的定量定性分析
對本發(fā)明實施例下制備的黃芪甲苷樣品進行定量測定，并按照《中國藥典》2010版黃芪項下黃芪甲苷的定性定量檢測方法進行檢測。結(jié)果表明，該檢測方法具有良好的專屬性、線性(r=0.9992)、精密度(RSD=L 1%)、重復(fù)性(RSD=L 2%)、穩(wěn)定性(RSD=L 5)及加樣回收率(RSD=L 8%)。專屬性結(jié)果見附圖2，線性結(jié)果見附圖3，不同實施例均能滿足定量要求，結(jié)果見附圖4?9。
[0033]對本發(fā)明實施例制備的黃芪甲苷樣品進行薄層定性分析，結(jié)果表明，該檢測方法能夠很好地將黃芪甲苷的斑點顯現(xiàn)出來，具有良好的可行性和準(zhǔn)確度結(jié)果見附圖10。
[0034]本發(fā)明適用于含黃芪甲苷藥物中黃芪甲苷的分離制備及定性定量工作中的樣品前處理，本發(fā)明能大大簡化黃芪甲苷前處理流程及提高處理效率，具有簡便易行、可操作性好、實用性強、準(zhǔn)確度高等優(yōu)點，對含黃芪甲苷的藥物中黃芪甲苷的前處理具有一定的指導(dǎo)意義。
【主權(quán)項】
1.一種含黃芪甲苷藥物分離制備及定性定量測試前處理方法，其特征在于:取含黃芪甲苷提取物浸膏，加入其重量10?100倍的氨試液，搖勻制成上樣液；將上樣液轉(zhuǎn)移到大孔樹脂柱中，至上樣完畢；用I?10倍柱體積稀乙醇沖洗樹脂柱以除去雜質(zhì)；最后用I?10倍柱體積高濃度乙醇洗脫獲得黃芪甲苷。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:大孔樹脂為市售通用規(guī)格，型號可包括AB-8、HPD100, D-101、HP20、H20、D1400。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:稀乙醇為市售乙醇加水稀釋，濃度為10 ?50%，優(yōu)選 40%。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:高濃度乙醇為市售乙醇加水稀釋，濃度為60 ?95%，優(yōu)選 70%。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:所述的含黃芪甲苷提取物浸膏為含黃芪甲苷藥物經(jīng)提取制備所得，可采用已知的多種提取工藝。6.根據(jù)權(quán)利要求1?5所述，其特征在于:制成的黃芪甲苷可用于含黃芪藥物的分離制備及定性、定量測定。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種黃芪甲苷的前處理方法，該方法適用于含黃芪甲苷藥物的分離制備及定性定量工作中的樣品前處理。方法內(nèi)容主要是將藥物提取，濃縮得浸膏，浸膏用氨試液溶解，搖勻制成上樣液，轉(zhuǎn)移至大孔樹脂層析柱上，待上樣完畢，用稀乙醇沖洗樹脂柱以除去雜質(zhì)，最后用高濃度乙醇洗脫獲得黃芪甲苷。本發(fā)明相比于已公開的其它方法，操作簡便、準(zhǔn)確度高、實用性強，對藥物中黃芪甲苷的分離制備及定性、定量測試均具有較高的應(yīng)用價值。
【IPC分類】G01N30/90, C07J53/00, G01N30/06
【公開號】CN105085600
【申請?zhí)枴緾N201410203169
【發(fā)明人】張繼全, 劉春林, 周升永, 阮克鋒, 馮怡, 吳飛
【申請人】上海張江中藥現(xiàn)代制劑技術(shù)工程研究中心
【公開日】2015年11月25日
【申請日】2014年5月14日