一種抗高血壓活性肽、其制備方法及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種抗高血壓活性肽、其制備方法及應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 高血壓是我國(guó)最常見(jiàn)的心血管疾病，其發(fā)生率在成年人中高達(dá)20%，高血壓患者 由于動(dòng)脈血壓長(zhǎng)期高于正常血壓，不僅能引起頭痛、頭昏、心悸等癥狀，而且能引起患者心、 腦、腎等器官損害，導(dǎo)致出血性腦卒中、心肌梗死、心力衰竭和腦血栓并發(fā)癥，使患者偏癱 或死亡，明顯降低患者生活質(zhì)量。高血壓病的病因復(fù)雜，已知體內(nèi)許多系統(tǒng)與血壓的調(diào)節(jié) 有密切關(guān)系，抗高血壓藥物可以作用于影響血壓調(diào)節(jié)的任一環(huán)節(jié)而使血壓下降。當(dāng)前常 見(jiàn)的治療尚血壓的藥物有以下八種：利尿劑（可能引起低血鐘癥，影響糖代謝，使糖耐量 下降），β -阻滯劑（可帶來(lái)中樞神經(jīng)系統(tǒng)、消化系統(tǒng)以及血管系統(tǒng)的不良反應(yīng)），α - 阻滯劑、鈣拮抗劑（會(huì)導(dǎo)致水腫、頭痛、潮紅、多尿、低血壓以及心臟傳導(dǎo)受阻），血管緊張 素 II受體阻滯劑（可引起干咳、血鉀高、甚至血管性水腫）和血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑 (ACEI)。由于現(xiàn)有大部分藥物都有較強(qiáng)的副作用，所以科學(xué)家們一直致力于開(kāi)發(fā)高效低毒 的藥品或食品，含有抑制血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（ACE)活性的小肽的功能食品或藥品，使高血 壓患者得益，研究表明，該類(lèi)藥物優(yōu)于一般血管擴(kuò)張藥，在使血壓下降時(shí)，心、腎血流量不 下降；優(yōu)于鈣拮抗劑，不會(huì)引起水鈉潴留，不加快心率；優(yōu)于α -阻滯劑，不會(huì)引起體位性 低血壓；優(yōu)于老一代降壓藥，無(wú)中樞作用；優(yōu)于硝酸酯類(lèi)藥物，無(wú)耐藥性、無(wú)肝臟首過(guò)效應(yīng) 和無(wú)停藥反跳現(xiàn)象[吳金珊，李佳.抗高血壓藥物的研究進(jìn)展和臨床應(yīng)用[J].中國(guó)實(shí)用 醫(yī)藥，2009, 4(23) :231-232.]。專(zhuān)利CN200710047836. 7通過(guò)水解酪蛋白得到的抗高血壓 活性三肽Asn-Pro-Trp，其具有一定的降血壓效果，具體地，該活性三肽對(duì)ACE抑制活性為 85. 5%，其采用5mg/kg的劑量給藥5天后，大鼠的血壓穩(wěn)定在176mmHg，并且后續(xù)血壓有所 回升；亦有專(zhuān)利CN201210247822. 0通過(guò)合成方法制備得到抗高血壓活性三肽：纈氨酸-異 亮氨酸-脯氨酸，其ACE抑制活性為僅為36. 58 ±4. 66%。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種結(jié)構(gòu)不同且具有良好的ACE抑制活性和 明顯的降血壓效果的抗高血壓活性肽、其制備方法及應(yīng)用。
[0004] 為解決以上技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采取如下技術(shù)方案：
[0005] -種抗高血壓活性肽，所述的活性肽的氨基酸序列為：茶氨酸-γ -氨基丁酸-脯 氨酸。
[0006] -種抗高血壓活性肽的制備方法，其通過(guò)將脯氨酸二氯樹(shù)脂和芴甲氧羰基γ-氨 基丁酸在偶聯(lián)劑和有機(jī)溶劑的存在下，進(jìn)行偶聯(lián)得到中間產(chǎn)物；再將所述的中間產(chǎn)物和芴 甲氧羰基茶氨酸在偶聯(lián)劑和有機(jī)溶劑的存在下，進(jìn)行偶聯(lián)，經(jīng)純化后得到所述的抗高血壓 活性肽。
[0007] 具體地，一種抗高血壓活性肽的制備方法，其通過(guò)將脯氨酸二氯樹(shù)脂和芴甲氧羰 基γ -氨基丁酸在偶聯(lián)劑和有機(jī)溶劑的存在下，進(jìn)行偶聯(lián)50~70分鐘，然后經(jīng)洗滌得到中 間產(chǎn)物；再將所述的中間產(chǎn)物和芴甲氧羰基茶氨酸在偶聯(lián)劑和有機(jī)溶劑的存在下，進(jìn)行偶 聯(lián)50~70分鐘，經(jīng)洗滌、純化后得到所述的抗高血壓活性肽。
[0008] 進(jìn)一步地，所述的偶聯(lián)劑為0-苯并三氮唑-Ν，Ν，Ν'，Ν' -四甲基脲四氟硼酸，所述 的有機(jī)溶劑為N，N-二異丙基乙胺。
[0009] 進(jìn)一步地，經(jīng)所述洗滌得到所述的中間產(chǎn)物的具體方法為：將所述的脯氨酸二氯 樹(shù)脂和所述的芴甲氧羰基γ-氨基丁酸進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)后，用體積比為1:4~6的哌啶和 二甲基甲酰胺混合液洗滌多次，然后用六氫吡啶進(jìn)行脫保護(hù)，脫保護(hù)結(jié)束后再用體積比為 1:4~6的哌啶和二甲基甲酰胺混合液洗滌多次，得到所述的中間產(chǎn)物。
[0010] 進(jìn)一步地，經(jīng)所述的洗滌、純化后得到所述的抗高血壓活性肽的具體方法為：將所 述的中間產(chǎn)物和所述的芴甲氧羰基茶氨酸進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)后，用體積比為1:4~6的哌啶和 二甲基甲酰胺混合液洗滌多次，然后用六氫吡啶進(jìn)行脫保護(hù)，脫保護(hù)結(jié)束后再用體積比為 1:4~6的哌啶和二甲基甲酰胺混合液洗滌多次，然后經(jīng)抽干、純化后得到所述的抗高血壓 活性肽。
[0011] 進(jìn)一步地，采用半制備型反相高效液相色譜進(jìn)行所述的純化。
[0012] 更進(jìn)一步地，所述的半制備型反相高效液相色譜的反相柱為=VYDAC - C18柱；流 動(dòng)相為：溶液A為溶解于分析純級(jí)乙腈的0.05%~0.15% (v/v)的三氟乙酸，溶液B為溶 解于純水的0.05%~0.15%(￥八）的三氟乙酸；洗脫梯度為：0111；[11~25111；[11:5%~30%的 溶液4,95%~70%的溶液8;2611^11~551^11:100%的溶液八；流速 ：0.5~1.5毫升/分 鐘。
[0013] 此外，本發(fā)明還涉及該抗高血壓活性肽在制備抗高血壓的藥品或食品中的應(yīng)用。
[0014] 此外，本發(fā)明還涉及一種抗高血壓的藥物組合物，其包括有效成分和輔料，所述的 有效成分包括如權(quán)利要求1所述的抗高血壓活性肽。
[0015] 其中，所述的輔料包括常規(guī)的藥用輔料或食品添加劑。
[0016] 由于以上技術(shù)方案的采用，本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)勢(shì)：
[0017] 本發(fā)明提出了一種不同的活性肽，該活性肽的ACE抑制活性能夠達(dá)到64. 5%，采 用2mg/kg劑量給藥5天后血壓值能夠基本穩(wěn)定在165mmHg左右。
【附圖說(shuō)明】
[0018] 附圖1為抗高血壓大鼠實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果圖。
【具體實(shí)施方式】
[0019] 下面結(jié)合具體的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明，但本發(fā)明不限于以下實(shí)施 例。以下實(shí)施例中，在沒(méi)有特別說(shuō)明時(shí)，" ％ "均指質(zhì)量百分比。
[0020] 實(shí)驗(yàn)材料：
[0021] 新西蘭大白兔：上海交通大學(xué)藥學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供；
[0022] 20周齡雄性高血壓模式大鼠（SHR):上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供；
[0023] 微量移液器（100 ~1000 μ L，20 ~200 μ L，10 ~100 μ L，0· 5 ~10 μ L)，Eppendorf Ltd ；
[0024] 過(guò)濾器（Φ 50mm)，上海醫(yī)藥工業(yè)研究所；
[0025] 微孔濾膜（Φ50πιπι，孔徑為0. 22 μπι)，上海摩速科學(xué)器材有限公司；
[0026] Centrifuge 5415D 小型高速離心機(jī)，Eppendorf Ltd ;
[0027] 10 層析系統(tǒng)，Superdex 3Oprep grade 層析柱（GE Healthcare, USA);
[0028] Zorbax SB-C18 反相色譜柱（Agilent);
[0029] 摩爾超純水機(jī)，上海摩勒科學(xué)儀器有限公司；
[0030] GL-22M高速冷凍離心機(jī)，上海盧湘儀離心機(jī)儀器廠(chǎng)；
[0031] JY2002型電子天平，上海良平儀器儀表有限公司；
[0032] 手提式壓力蒸汽滅菌器，上海醫(yī)用核子儀器廠(chǎng)；
[0033] HWS26型電熱恒溫水浴鍋，上海一恒科技有限公司；