um長，5天藻落直徑1mm，褐色。
[0027]圖13:約25um長，11天藻落直徑1mm，淺褐色。
[0028]圖14:約20um長，9天藻落直徑1mm，淡黃色。
[0029]圖15:約20um長，9天藻落直徑1mm，淡黃色，一圈一圈向外擴展。
[0030]圖16:約20um長，15天藻落直徑1mm，淡黃色。
[0031]圖17:約15um長，11天藻落直徑1mm，淡黃色。
[0032]圖18:約13um長，11天藻落直徑Imm ;褐色。
[0033]圖19:約12um長，4天藻落直徑1mm，淺褐色。
[0034]圖20:約30um長，5天藻落直徑1mm，墨綠色(綠藻)。
[0035]【I】Matthews I，Cook P A.Short Commuticat1n: Diatom diet of abalonepost-larvate (Hal1tis midae) and the effect of pre-grazing the diatomoverstory.Mar.freshwat.Res.1995，46:545-548.
【主權(quán)項】
1.一種混合底棲硅藻溶液中純種硅藻的分離方法，其特征在于:按照以下步驟進行: 首先將濃度為0.05-0.15g/ml的混合底棲硅藻溶液中75 μm以上的顆粒碎肩濾除，然后將混合底棲硅藻溶液分為三等份，分別放入離心管中，將第一支離心管中混合底棲硅藻溶液搖勻，在350-450g RCF的條件下離心處理4_5min，得到沉淀A和第一上清液； 對第一上清液在850-950g RCF的條件下離心處理4_5min，得到沉淀B ； 將第二支離心管中的混合底棲硅藻溶液搖勻，在850-950g RCF的條件下離心處理4-5min得到第二上清液，并對第二上清液在1650_1750g RCF的條件下離心處理4_5min，得到沉淀C ; 將第三支離心管中的混合底棲硅藻溶液搖勻，在1650-1750g RCF的條件下離心處理4-5min得到第三上清液，并對第三上清液在2650_2750gRCF的條件下離心處理4_5min，得到沉淀D ； 取0.05-0.2g沉淀A、全部的沉淀B、全部的沉淀C和全部的沉淀D，分別用20_40ml的無菌海水稀釋混勻，分別得到沉淀A海水溶液、沉淀B海水溶液、沉淀C海水溶液和沉淀D海水溶液； 將沉淀A海水溶液在350-450g RCF的條件下離心處理5_6min，得到沉淀A1，對得到的沉淀A1進行第一離心處理7次，得到沉淀A 2，所述的第一離心處理為將沉淀用適量無菌海水稀釋混勻，并對得到的該沉淀的海水溶液在350-450g RCF的條件下離心處理5_6min，獲取沉淀； 將沉淀B海水溶液在850-950g RCF的條件下離心處理5_6min，得到沉淀B1，對得到的沉淀B1進行第二離心處理7次，得到沉淀B2，所述的第二離心處理為將沉淀用適量無菌海水稀釋混勻，并對得到的該沉淀的海水溶液在850-950g RCF的條件下離心處理5_6min ；將沉淀C海水溶液在1650-1750g RCF的條件下離心處理5_6min，得到沉淀C1，對得到的沉淀C1進行第三離心處理7次，得到沉淀C2，所述的第三離心處理為將沉淀用適量無菌海水稀釋混勻，并對得到的該沉淀的海水溶液在1650-1750g RCF的條件下離心處理5_6min，獲取沉淀； 將沉淀D無菌海水溶液在2650-2750g RCF的條件下離心處理5_6min，得到沉淀D1，對得到的沉淀D1進行第四離心處理7次，得到沉淀D2，所述的第四離心處理為將沉淀用適量無菌海水稀釋混勻，并對得到的該沉淀的海水溶液在2650-2750g RCF的條件下離心處理5-6min，獲取沉淀； 將得到的沉淀A2、沉淀B2、沉淀C2和沉淀D 2以無菌操作法分別轉(zhuǎn)移到適量無菌海水中，形成A2、B2、CjP D2的海水母液，再按照海水中細菌總數(shù)測定時倍比稀釋的方法用無菌海水進行梯度稀釋，獲得沉淀A2、B2, CjPD2海水母液的ΙΟ'ΙΟ'ΙΟ'ΙΟ'ΚΓ4各濃度梯度藻液； 用平板分離法[1]培養(yǎng)A2、B2, CjP D 2各濃度梯度藻液中底棲硅藻，顯微鏡下觀察并收集平板上無細菌和其它單胞藻污染的藻落，即可獲得各種底棲硅藻純種。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的混合底棲硅藻溶液中純種硅藻的分離方法，其特征在于: 首先將濃度為0.lg/ml的混合底棲硅藻溶液中75 μm以上的顆粒碎肩濾除，然后將混合底棲硅藻溶液分為三等份，分別放入離心管中，將第一支離心管中混合底棲硅藻溶液搖勻，在400g RCF的條件下離心處理4min，得到沉淀A和第一上清液； 對第一上清液在900g RCF的條件下離心處理4min，得到沉淀B ； 將第二支離心管中的混合底棲硅藻溶液搖勻，在900g RCF的條件下離心處理4min得到第二上清液，并對第二上清液在1700g RCF的條件下離心處理4min，得到沉淀C ； 將第三支離心管中的混合底棲硅藻溶液搖勻，在1700g RCF的條件下離心處理4min得到第三上清液，并對第三上清液在2700g RCF的條件下離心處理4min，得到沉淀D ；取0.1g沉淀A、全部的沉淀B、全部的沉淀C和全部的沉淀D，分別用30ml的無菌海水稀釋混勻，分別得到沉淀A海水溶液、沉淀B海水溶液、沉淀C海水溶液和沉淀D海水溶液；將沉淀A海水溶液在400g RCF的條件下離心處理6min，得到沉淀A1，對得到的沉淀A1進行第一離心處理7次，得到沉淀A2，所述的第一離心處理為將沉淀用適量無菌海水稀釋混勻，并對得到的該沉淀的海水溶液在400g RCF的條件下離心處理6min，獲取沉淀； 將沉淀B海水溶液在900g RCF的條件下離心處理6min，得到沉淀B1，對得到的沉淀B1進行第二離心處理7次，得到沉淀B2，所述的第二離心處理為將沉淀用適量無菌海水稀釋混勻，并對得到的該沉淀的海水溶液在900g RCF的條件下離心處理6min ； 將沉淀C海水溶液在1700g RCF的條件下離心處理6min，得到沉淀C1，對得到的沉淀C1進行第三離心處理7次，得到沉淀C2，所述的第三離心處理為將沉淀用適量無菌海水稀釋混勻，并對得到的該沉淀的海水溶液在1700g RCF的條件下離心處理6min，獲取沉淀；將沉淀D無菌海水溶液在2700g RCF的條件下離心處理6min，得到沉淀D1，對得到的沉淀D1進行第四離心處理7次，得到沉淀D 2，所述的第四離心處理為將沉淀用適量無菌海水稀釋混勻，并對得到的該沉淀的海水溶液在2700g RCF的條件下離心處理6min，獲取沉淀；將得到的沉淀A2、沉淀B2、沉淀C2和沉淀D 2以無菌操作法分別轉(zhuǎn)移到適量無菌海水中，形成A2、B2、CjP D2的海水母液，再按照海水中細菌總數(shù)測定時倍比稀釋的方法用無菌海水進行梯度稀釋，獲得沉淀A2、B2, CjPD2海水母液的ΙΟ'ΙΟ'ΙΟ'ΙΟ'ΚΓ4各濃度梯度藻液； 用平板分離法[1]培養(yǎng)A2、B2, CjP D 2各濃度梯度藻液中底棲硅藻，顯微鏡下觀察并收集平板上無細菌和其它單胞藻污染的藻落，即可獲得各種底棲硅藻純種。
【專利摘要】本發(fā)明所公開的從混合底棲硅藻溶液中分離純種硅藻的方法，能夠一次性獲取混合底棲硅藻中幾乎所有可培養(yǎng)藻種的純種，并可以有效獲取其它分離方法中難以獲取的非優(yōu)勢小規(guī)格底棲硅藻純種；它基于不同規(guī)格和形態(tài)底棲硅藻及細菌離心時沉降速度不同的特性，先將不同規(guī)格形態(tài)藻類預(yù)分開；然后對預(yù)分的各組藻類經(jīng)過多次離心洗滌，去掉絕大部分細菌和非目標規(guī)格的藻種；從而保證在固體平板培養(yǎng)基上涂平板培養(yǎng)單藻落時，細菌和不同藻種之間的污染大大降低，使獲取無污染的純種藻類變得有效和容易。并且本方法操作簡單，方便適用，可直接應(yīng)用于生產(chǎn)和研究。
【IPC分類】C12N1-12, C12R1-89
【公開號】CN104789475
【申請?zhí)枴緾N201510085417
【發(fā)明人】張喜昌, 孫穎, 李丹
【申請人】大連海寶漁業(yè)有限公司
【公開日】2015年7月22日
【申請日】2015年2月17日