一種用于微藻凍存的非滲透保護(hù)劑的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于微藻藻種保存技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種用于微藻凍存的非滲透保護(hù) 劑。
【背景技術(shù)】
[0002] 由于藻類具有豐富的、多樣性的基因資源以及它們?cè)谏锛夹g(shù)上的潛力與日俱 增，藻類種質(zhì)保存的研宄近年來(lái)日益受到重視。保種方法有繼代培養(yǎng)法、固定化保存、超低 溫保存法。這些方法在實(shí)際應(yīng)用中存在諸多弊端，如繼代培養(yǎng)在長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)、多次接種下， 易導(dǎo)致藻種污染或者遺傳漂變，生命力減退等失去良種的價(jià)值。固定化培養(yǎng)程序較復(fù)雜，需 要細(xì)心操作，而且大多數(shù)微藻在培養(yǎng)后期常會(huì)從膠珠中溢出，有的膠珠還會(huì)融解，導(dǎo)致保種 失敗。超低溫凍存法可以將存活率提高到30%以上，但同樣存在一些缺陷。如常用的兩步 冷凍法，需要復(fù)雜的預(yù)冷凍程序，費(fèi)用較高，耗時(shí)長(zhǎng)且不可避免凍融過(guò)程中晶體的形成，對(duì) 保存材料造成損傷。而玻璃化凍存法不僅可以克服前幾種保存技術(shù)中費(fèi)時(shí)、費(fèi)力、易污染等 弊病，而且經(jīng)過(guò)玻璃化凍存的藻種相當(dāng)于進(jìn)行了一次優(yōu)勝劣汰的復(fù)壯作用，復(fù)蘇后存活下 來(lái)的藻細(xì)胞一般會(huì)比未凍存的長(zhǎng)得更好、更高產(chǎn)和抗凍性更強(qiáng)。但目前還沒(méi)有有效的用于 微藻凍存的非滲透保護(hù)劑。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的是提供一種用于微藻凍存的非滲透保護(hù)劑，從而彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)的不 足。
[0004] 本發(fā)明首先提供紅藻糖苷在制備微藻凍存保護(hù)劑中的應(yīng)用，其中紅藻糖苷的化學(xué) 結(jié)構(gòu)式如下：
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種紅藻糖苷的用途，其特征在于，是紅藻糖苷在制備微藻凍存保護(hù)劑中的應(yīng)用。
2. -種用于微藻凍存的保護(hù)劑，其特征在于，所述的保護(hù)劑包含有紅藻糖苷和滲透性 保護(hù)劑。
3. 如權(quán)利要求2所述的保護(hù)劑，其特征在于，所述的滲透性保護(hù)劑為DMSO。
4. 一種微藻凍存的保護(hù)劑，其特征在于，所述的保護(hù)劑是將權(quán)利要求2所述的保護(hù)劑 用鹽度為25~30%。的海水進(jìn)行稀釋，稀釋后紅藻糖苷的濃度為5-15%，DMSO的濃度為 10%〇
5. -種藻類細(xì)胞的保存方法，其特征在于，是用權(quán)利要求4所述的保護(hù)劑進(jìn)行保存。
6. 如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，是將收集的藻類細(xì)胞用培養(yǎng)基懸浮，然后將 權(quán)利要求2所述的保護(hù)劑加入，混勻后室溫平衡30min;4°C放置30min后置于-80°C過(guò)夜， 投入液氮保存。
7. 如權(quán)利要求5或6所述的方法，其特征在于，所述的藻類為顆石藻、紫球藻或小球藻。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種用于微藻凍存的非滲透保護(hù)劑—紅藻糖苷，以及它作為微藻玻璃態(tài)凍存時(shí)的應(yīng)用；所述紅藻糖苷是與一種滲透保護(hù)劑二甲基亞砜共同協(xié)同使用，在微藻處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)加入。本發(fā)明采用的紅藻糖苷來(lái)源于紅藻，資源豐富，且具有抗?jié)B透壓、抗氧化、保護(hù)生物大分子等多種作用，與微藻的相容性好。能很好的提高微藻，特別是紅藻在凍存后的存活率、生長(zhǎng)狀況。
【IPC分類】C12N1-04, C12R1-89
【公開(kāi)號(hào)】CN104789473
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510255705
【發(fā)明人】陳海敏, 李九零, 周成旭, 嚴(yán)小軍, 駱其君
【申請(qǐng)人】寧波大學(xué)
【公開(kāi)日】2015年7月22日
【申請(qǐng)日】2015年5月18日