可以有效獲取其它分離方法中難以獲取的非優(yōu)勢(shì)小規(guī)格底棲硅藻純種；它基于不同規(guī)格和形態(tài)底棲硅藻及細(xì)菌離心時(shí)沉降速度不同的特性，先將不同規(guī)格形態(tài)藻類預(yù)分開；然后對(duì)預(yù)分的各組藻類經(jīng)過多次離心洗滌，去掉絕大部分細(xì)菌和非目標(biāo)規(guī)格的藻種；從而保證在固體平板培養(yǎng)基上涂平板培養(yǎng)單藻落時(shí)，細(xì)菌和不同藻種之間的污染大大降低，使獲取無污染的純種藻類變得有效和容易。并且本方法操作簡(jiǎn)單，方便適用，可直接應(yīng)用于生產(chǎn)和研宄。
【附圖說明】
[0008]圖1至19是利用本方法分離出的不同的底棲硅藻純種顯微圖。
[0009]圖20是利用本方法分離出的綠藻純種的顯微圖。
【具體實(shí)施方式】
[0010]下面將說明本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】:
一種混合底棲硅藻溶液中純種硅藻的分離方法，該方法按照以下步驟進(jìn)行:
首先將濃度為0.05-0.15g/ml的混合底棲硅藻溶液中75 μm以上的顆粒碎肩濾除，然后將混合底棲硅藻溶液分為三等份，分別放入離心管中，將第一支離心管中混合底棲硅藻溶液搖勻，在350-450g RCF (優(yōu)選為400g RCF)的條件下離心處理4_5min (優(yōu)選為4min)，得到沉淀A和第一上清液，
對(duì)第一上清液在850-950g RCF (優(yōu)選為900g RCF)的條件下離心處理4_5min (優(yōu)選為4min)，得到沉淀B，
將第二支離心管在850-950g RCF (優(yōu)選為900g RCF)的條件下離心處理4_5min (優(yōu)選為4min)得到第二上清液，并對(duì)第二上清液在1650-1750g RCF (優(yōu)選為1700g RCF)的條件下離心處理4-5min (優(yōu)選為4min)，得到沉淀C，
將第三支離心管在1650-1750g RCF(優(yōu)選為1700g RCF)的條件下離心處理4_5min(優(yōu)選為4min)得到第三上清液，并對(duì)第三上清液在2650-2750g RCF (優(yōu)選為2700g RCF)的條件下離心處理4-5min (優(yōu)選為4min)，得到沉淀D，
取0.02-0.2g (優(yōu)選為0.1g)沉淀A、全部沉淀B、全部沉淀C和全部沉淀D，分別用20-40ml (優(yōu)選為30ml)的無菌海水稀釋混勻，分別得到沉淀A海水溶液、沉淀B海水溶液、沉淀C海水溶液和沉淀D海水溶液；
將沉淀A海水溶液在350-450gRCF (優(yōu)選為400g RCF)的條件下離心處理5_6min (優(yōu)選為6min)，得到沉淀A1，對(duì)得到的沉淀A1進(jìn)行第一離心處理7次，得到沉淀A 2，這里的第一離心處理為將沉淀用適量無菌海水稀釋混勻，并對(duì)得到的該沉淀的海水溶液在350-450gRCF (優(yōu)選為400g RCF)的條件下離心處理5-6min (優(yōu)選為6min)，獲取沉淀；
將沉淀B海水溶液在850-950g RCF (優(yōu)選為900g RCF)的條件下離心處理5_6min (優(yōu)選為6min)，得到沉淀B1，對(duì)得到的沉淀B1進(jìn)行第二離心處理7次，得到沉淀B 2，這里的第二離心處理為將沉淀用適量無菌海水稀釋混勻，并對(duì)得到的該沉淀的海水溶液在850-950gRCF (優(yōu)選為900g RCF)的條件下離心處理5-6min (優(yōu)選為6min)，獲取沉淀；
將沉淀C海水溶液在1650-1750g RCF(優(yōu)選為1700g RCF)的條件下離心處理5_6min(優(yōu)選為6min)，得到沉淀C1，對(duì)得到的沉淀C1進(jìn)行第三離心處理7次，得到沉淀C 2，這里的第三離心處理為將沉淀用適量無菌海水稀釋混勻，并對(duì)得到的該沉淀的海水溶液在1650-1750gRCF (優(yōu)選為1700g RCF)的條件下離心處理5-6min (優(yōu)選為6min)，獲取沉淀；
將沉淀D無菌海水溶液在2650-2750g RCF (優(yōu)選為2700g RCF)的條件下離心處理
5-6min (優(yōu)選為6min)，得到沉淀D1，對(duì)得到的沉淀D1進(jìn)行第四離心處理7次，得到沉淀D 2，這里的第四離心處理為將沉淀用適量無菌海水稀釋混勻，并對(duì)得到的該沉淀的海水溶液在2650-2750g RCF (優(yōu)選為2700g RCF)的條件下離心處理5_6min (優(yōu)選為6min)，獲取沉淀；將得到的沉淀A2、沉淀B2、沉淀C2和沉淀D 2以無菌操作法分別轉(zhuǎn)移到適量無菌海水中，形成A2、B2、CjP D2的海水母液，再按照海水中細(xì)菌總數(shù)測(cè)定時(shí)倍比稀釋的方法用無菌海水進(jìn)行梯度稀釋，獲得沉淀A2、B2, CjPD2海水母液的ΙΟ'ΙΟ'ΙΟ'ΙΟ'ΚΓ4各濃度梯度藻液；
用平板分離法[1]培養(yǎng)A2、B2、CjP D 2各濃度梯度藻液中底棲硅藻。顯微鏡下觀察并收集平板上無細(xì)菌和其它單胞藻污染的藻落，即可獲得各種底棲硅藻純種。
[0011]舉例說明
從附有大量底棲硅藻的波紋板上采集底棲硅藻濃稠混合液(20ml)，加海水，用200目篩絹濾除75um以上顆粒碎肩，獲取90ml藻液，分成3等份，每份分別裝入I個(gè)滅菌的45ml
離心管中。
[0012]其中第一份搖勻后在400g RCF的條件下離心處理4min，得到沉淀A和第一上清液，將第一上清液在900g RCF的條件下離心處理4min，得到沉淀B。
[0013]第二份藻液搖勻后在900g RCF的條件下離心處理4 min得到第二上清液，取第二上清液在1700g RCF的條件下離心處理4min，得到沉淀C。
[0014]第三份藻液搖勻后在1700g RCF的條件下離心處理4 min得到第三上清液，取第三上清液在2700g RCF的條件下離心處理4 min，得到沉淀D。
[0015]取0.1g沉淀A、全部沉淀B、全部沉淀C和全部沉淀D，分別用30ml無菌海水稀釋混勻，分別得到沉淀A海水溶液、沉淀B海水溶液、沉淀C海水溶液和沉淀D海水溶液；
將沉淀A海水溶液在400g RCF的條件下離心處理6min，得到沉淀A1，對(duì)得到的沉淀A1進(jìn)行第一離心處理7次，得到沉淀A2;
將沉淀B海水溶液在900g RCF的條件下離心處理6min，得到沉淀B1，對(duì)得到的沉淀B1進(jìn)行第二離心處理7次，得到沉淀B2;
將沉淀C海水溶液在1700g RCF的條件下離心處理6min，得到沉淀C1，對(duì)得到的沉淀C1進(jìn)行第三離心處理7次，得到沉淀C 2；
將沉淀D海水溶液在2700g RCF的條件下離心處理6min，得到沉淀D1，對(duì)得到的沉淀D1進(jìn)行第四離心處理7次，得到沉淀D 2；
將得到的沉淀A2、沉淀B2、沉淀C2和沉淀D 2以無菌操作法分別轉(zhuǎn)移到0.4ml無菌海水中，形成A2、B2、CJPD2的海水母液，再按照海水中細(xì)菌總數(shù)測(cè)定時(shí)倍比稀釋的方法用無菌海水進(jìn)行梯度稀釋，獲得沉淀A2、B2、C#P D 2海水母液的10 °、10—\ 10—2、10—3、10—4各濃度梯度藻液；
用平板分離法[1]培養(yǎng)^42、(:2和02各濃度梯度藻液中底棲硅藻。顯微鏡下觀察并收集平板上無細(xì)菌和其它單胞藻污染的藻落，共分離出底棲硅藻純種19個(gè)(附圖1-19)，同時(shí)還分離出綠藻純種I個(gè)(附圖20)，詳細(xì)說明如下:
圖1:約70um長(zhǎng)，5天藻落直徑1mm，淡褐色。
[0016]圖2:約55um長(zhǎng)；5天藻落直徑1mm，淡褐色。
[0017]圖3:約45um長(zhǎng)，4天藻落直徑1mm，褐色。
[0018]圖4:約40um長(zhǎng)，5天藻落直徑1mm，淡黃色。
[0019]圖5:約40um長(zhǎng)，5天藻落直徑1mm，褐色。
[0020]圖6:約35um長(zhǎng)，9天藻落直徑1_，黃色。
[0021]圖7:約35um長(zhǎng)，5天藻落直徑1mm，淺褐色。
[0022]圖8:約30um長(zhǎng)，7天藻落直徑1mm，黃褐色。
[0023]圖9:約30um長(zhǎng)，11天落藻直徑1mm，黃色。
[0024]圖10:約30um長(zhǎng)，5天藻落直徑1mm，黃色。
[0025]圖11:約30um長(zhǎng)；6天藻落直徑1mm，黃色。
[0026]圖12:約25