一種誘導(dǎo)制備胸苷磷酸化酶的方法及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及生物工程領(lǐng)域，具體設(shè)及一種誘導(dǎo)制備胸巧磯酸化酶的方法及應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 胸巧磯酸化酶（TPase)廣泛存在于原核W及真核生物的細(xì)胞中。Wase可特異性 作用于0-胸巧（0-TR)，催化0-TR可逆磯酸化反應(yīng)，由0-TR生成脫氧核糖-1-磯酸W 及胸腺喀晚（T)，亦可由脫氧核糖-1-磯酸和T生成0 -TR(①）若與其他核巧磯酸化酶共 同作用，可生成一系列其他核巧和磯酸基團(tuán)（Pi)(②）：
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種誘導(dǎo)胸苷磷酸化酶的方法，包括：將具有胸苷磷酸化酶的微生物在固體培養(yǎng)基 上培養(yǎng)，再接入液體培養(yǎng)基搖瓶培養(yǎng)，即得，其特征是：固體培養(yǎng)基中加入了誘導(dǎo)物，所述誘 導(dǎo)物是胸苷類的嘧啶核苷。
2. 權(quán)利要求1的方法，其中誘導(dǎo)物為β-胸苷或雙脫氧胸苷。
3. 權(quán)利要求1的方法，其中誘導(dǎo)物在固體培養(yǎng)基中濃度為5-80mmol/L。
4. 權(quán)利要求1的方法，包括：將具有胸苷磷酸化酶的乙酰短桿菌菌種接入加入了胸苷 類的嘧啶核苷作為誘導(dǎo)物的固體培養(yǎng)基中，28-36°C培養(yǎng)20-28h，誘導(dǎo)提高其TPase活性， 然后將提高了 TPase活性的菌接入液體培養(yǎng)基中28-36°C、150-250rpm，培養(yǎng)20-28h，離心 后獲得菌體用pH7. O的磷酸緩沖液洗滌，即得。
5. 權(quán)利要求4的方法，包括：將具有胸苷磷酸化酶的大腸桿菌菌種接入加入了胸苷類 的嘧啶核苷作為誘導(dǎo)物的固體培養(yǎng)基中，32°C培養(yǎng)24h，誘導(dǎo)提高其TPase活性，然后將提 高了 TPase活性的菌接入液體培養(yǎng)基中28-36°C、150-250rpm、培養(yǎng)20-28h，離心后獲得菌 體用pH7. O的磷酸緩沖液洗滌，即得。
6. 權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)的方法，其中固體培養(yǎng)基每100mL含牛肉膏1.0 克、蛋白胨 I. 0克、酵母浸粉0. 5克、氯化鈉0. 5克和瓊脂粉2. 0克，pH至7. 0 ;液體培養(yǎng)基每100mL含 酵母浸膏4. 0克、葡萄糖0. 4克和氯化鈉0. 3, pH為7. 0。
7. 權(quán)利要求1的方法，其中胸苷磷酸化酶來源于乙酰短桿菌或大腸桿菌。
8. -種制備2' -脫氧腺苷的方法，包括：先將乙酰短桿菌菌體用權(quán)利要求1的方法誘 導(dǎo)，誘導(dǎo)后的菌體再與β -胸苷和腺嘌呤在磷酸緩沖溶液中反應(yīng)，即得。
9. 一種制備阿糖腺苷的方法，包括：先將乙酰短桿菌菌體用權(quán)利要求1的方法誘導(dǎo)，誘 導(dǎo)后的菌體再與阿糖尿苷和腺嘌呤在磷酸緩沖溶液中反應(yīng)，即得。
10. -種制備2' -脫氧氟尿苷的方法，包括：先將乙酰短桿菌菌體用權(quán)利要求1的方法 誘導(dǎo)，誘導(dǎo)后的菌體再與β -胸苷和5-氟尿嘧啶在磷酸緩沖液中反應(yīng)，即得。
【專利摘要】本發(fā)明涉及生物工程領(lǐng)域，具體涉及一種誘導(dǎo)制備胸苷磷酸化酶的方法及應(yīng)用。其特征是：將作為TPase酶源的微生物在加入了誘導(dǎo)物的固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，然后再接入液體培養(yǎng)基搖瓶培養(yǎng)，即得，所述的誘導(dǎo)物胸苷類的嘧啶核苷，胸苷類嘧啶核苷能使TPase的酶活性得到顯著提高。
【IPC分類】C12P19-32, C12P19-38, C12P19-40, C12N9-12
【公開號(hào)】CN104630173
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510096101
【發(fā)明人】邱蔚然, 杜衛(wèi)群, 邱志云, 馬志娟, 馮璐, 周長林, 易鳳炎, 王歡
【申請(qǐng)人】南通秋之友生物科技有限公司, 中國藥科大學(xué)
【公開日】2015年5月20日
【申請(qǐng)日】2015年3月4日