一種2-乙?；?2-去氨甲基四環(huán)素的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物制藥技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種2-乙?；?2-去氨甲基四環(huán)素的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]鹽酸四環(huán)素(Tetracycline hydrochloride)是一種四環(huán)類(lèi)抗生素，對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌、陰性菌、立克次體、濾過(guò)性病毒、螺旋體及原蟲(chóng)類(lèi)都有很好的抑制作用。鹽酸四環(huán)素是由金色鏈球菌在32°C發(fā)酵170小時(shí)，發(fā)酵液在pHl.7-1.9酸化處理，過(guò)濾，濾液調(diào)節(jié)pH結(jié)晶得四環(huán)素，四環(huán)素與尿素反應(yīng)生成四環(huán)素尿素復(fù)鹽，四環(huán)素尿素復(fù)鹽在丁醇中加入鹽酸后，反應(yīng)生成鹽酸四環(huán)素。鹽酸四環(huán)素的制備過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生雜質(zhì)，主要包括4-差向四環(huán)素(4-epitetracycline)、4_ 差向脫水四環(huán)素(4_epianhydrotetracycline)、脫水四環(huán)素(Anhydrotetracycline)、土霉素(Oxytetracycline)和 2_ 乙?；?2-去氨甲基四環(huán)素(2-acetyl-2_decarbamoyltetracycline)，這些雜質(zhì)毒性大，抗菌活性差。其中2_乙?；?2-去氨甲基四環(huán)素在中國(guó)藥典和美國(guó)藥典中均未檢測(cè)，歐洲藥典中對(duì)該雜質(zhì)采用4-差向四環(huán)素做對(duì)照進(jìn)行了檢測(cè)，限度為彡1.5%。
[0003]近年來(lái)，各國(guó)藥典對(duì)原料藥中雜質(zhì)控制越來(lái)越嚴(yán)格，在此背景下，制備2-乙酰基-2-去氨甲基四環(huán)素對(duì)照品，對(duì)鹽酸四環(huán)素中該雜質(zhì)的定性及定量，顯得越來(lái)越重要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的就在于提供一種工藝簡(jiǎn)便，產(chǎn)品純度高，可作為鹽酸四環(huán)素定性及定量檢測(cè)對(duì)照品的2-乙?；?2-去氨甲基四環(huán)素的制備方法。
[0005]為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的所采取的技術(shù)方案為:
一種2-乙酰基-2-去氨甲基四環(huán)素的制備方法，其特征在于其工藝步驟為:
將鹽酸四環(huán)素生產(chǎn)過(guò)程中的尿素復(fù)鹽母液減壓濃縮至原體積的1/4，后注入高效液相色譜儀中，收集2-乙?；?2-去氨甲基四環(huán)素出峰時(shí)段的溶液；
將分離出來(lái)的2-乙?；?2-去氨甲基四環(huán)素溶液pH調(diào)至中性，逐漸加入氯化鈉，直至使乙腈與水分離，分取乙腈層，再往水層加入適量乙腈，振搖，靜置，分取乙腈層，合并兩次乙腈層，在-15°C?_30°C靜置14-18小時(shí)，后立即過(guò)濾，所得濾液減壓濃縮至近干，58°C?62°C干燥得2-乙?；?2-去氨甲基四環(huán)素純品。
[0006]所述高效液相色譜的色譜條件為:
流動(dòng)相:體積比為80?85:20?15的0.05%磷酸溶液-乙腈溶液；
色譜柱:Sinochrom ODS-AP 1um ；
流動(dòng)相流速:20-30ml/min ；
檢測(cè)波長(zhǎng):254nm。
[0007]所述減壓濃縮條件為:壓力0.06?0.09MPa，58°C?62°C水浴中加熱。
[0008]上述萃取過(guò)程，加入氯化鈉后，使乙腈與水分層，2-乙?；?2-去氨甲基四環(huán)素被萃取至乙腈層中，連續(xù)萃取兩次，使水層接近無(wú)色。在-15°C?-30°C靜置的目的是使溶解在乙腈中微量鹽類(lèi)結(jié)晶析出。
[0009]在上述體系中，乙腈層在減壓濃縮干燥后，所得2-乙?；?2-去氨甲基四環(huán)素的純度高達(dá)85%。
[0010]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于:1、通過(guò)本方法可制備出2-乙?；?2-去氨甲基四環(huán)素純品，以它作為2-乙?；?2-去氨甲基四環(huán)素定性的對(duì)照品，從而解決了分析人員在分析過(guò)程中該雜質(zhì)定位問(wèn)題。2、本發(fā)明工藝簡(jiǎn)便，具有高效、快速等特點(diǎn)。
【具體實(shí)施方式】
[0011]為了更好的理解本發(fā)明，下面通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)行一步說(shuō)明，但所舉實(shí)施例并不限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0012]下述實(shí)施例中鹽酸四環(huán)素生產(chǎn)過(guò)程中的尿素復(fù)鹽母液是四環(huán)素與尿素反應(yīng)生成尿素復(fù)鹽后的廢液，其中4-差向四環(huán)素、2-乙?；?2-去氨甲基四環(huán)素等雜質(zhì)較多。
[0013]實(shí)施例1
色譜條件:色譜柱:Sinochrom ODS-AP 1um ;流動(dòng)相:以0.05%磷酸溶液-乙腈(85:15);流速:24 ml/min ;檢測(cè)波長(zhǎng):254nm。
[0014]儀器型號(hào):大連依利特P230制備液相色譜儀。
[0015]制備方法:
將鹽酸四環(huán)素生產(chǎn)過(guò)程中的尿素復(fù)鹽母液經(jīng)0.08MPa，60°C減壓濃縮至原體積的1/4后，注入制備高效液相色譜儀中，收集2-乙?；?2-去氨甲基四環(huán)素出峰時(shí)段的溶液。
[0016]將分離出來(lái)的2-乙酰基-2-去氨甲基四環(huán)素溶液用乙酸調(diào)至中性，逐漸加入氯化鈉固體并攪拌，直至使乙腈與水分層，分取乙腈層，再往水層加入等體積乙腈，振搖，靜置，分取乙腈層，合并兩次乙腈，置-15°C?_30°C靜置14-18小時(shí)，取出后立即過(guò)濾，取濾液在0.07MPa、58°C?62°C水浴條件下減壓濃縮至近干，并在58°C?62°C干燥，得2-乙酰基-2-去氨甲基四環(huán)素純品，經(jīng)測(cè)定，含量為85.6%,87.4%。
[0017]實(shí)施例2
色譜條件:色譜柱:Sinochrom ODS-AP 1um ;流動(dòng)相:以0.05%磷酸溶液-乙腈(85:20);流速:20 ml/min ;檢測(cè)波長(zhǎng):254nm。
[0018]儀器型號(hào):大連依利特P230制備液相色譜儀。
[0019]制備方法:
將鹽酸四環(huán)素生產(chǎn)過(guò)程中的尿素復(fù)鹽母液經(jīng)0.06MPa，58°C減壓濃縮至原體積的1/4后，注入制備高效液相色譜儀中，收集2-乙?；?2-去氨甲基四環(huán)素出峰時(shí)段的溶液。
[0020]將分離出來(lái)的2-乙?；?2-去氨甲基四環(huán)素溶液用乙酸調(diào)至中性，逐漸加入氯化鈉固體并攪拌，直至使乙腈與水分層，分取乙腈層，再往水層加入等體積乙腈，振搖，靜置，分取乙腈層，合并兩次乙腈，置-15°C?_30°C靜置14-18小時(shí)，取出后立即過(guò)濾，取濾液在0.09MPa、58°C?62°C水浴條件下減壓濃縮至近干，并在58°C?62°C干燥，得2-乙酰基-2-去氨甲基四環(huán)素純品，經(jīng)測(cè)定，含量為86.2%、85.3%。
[0021]實(shí)施例3
色譜條件:色譜柱:Sinochrom ODS-AP 1um ;流動(dòng)相:以0.05%磷酸溶液-乙腈(85:20);流速:20 ml/min ;檢測(cè)波長(zhǎng):254nm。
[0022]儀器型號(hào):大連依利特P230制備液相色譜儀。
[0023]制備方法:
將鹽酸四環(huán)素生產(chǎn)過(guò)程中的尿素復(fù)鹽母液經(jīng)0.09MPa，62°C減壓濃縮至原體積的1/4后，注入制備高效液相色譜儀中，收集2-乙?；?2-去氨甲基四環(huán)素出峰時(shí)段的溶液。
[0024]將分離出來(lái)的2-乙?；?2-去氨甲基四環(huán)素溶液用乙酸調(diào)至中性，逐漸加入氯化鈉固體并攪拌，直至使乙腈與水分層，分取乙腈層，再往水層加入等體積乙腈，振搖，靜置，分取乙腈層，合并兩次乙腈，置-15°C?_30°C靜置14-18小時(shí)，取出后立即過(guò)濾，取濾液在0.06MPa、58°C?62°C水浴條件下減壓濃縮至近干，并在58°C?62°C干燥，得2-乙酰基-2-去氨甲基四環(huán)素純品，經(jīng)測(cè)定，含量為85.5%,87.0%。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種2-乙?；?2-去氨甲基四環(huán)素的制備方法，其特征在于其工藝步驟為: 將鹽酸四環(huán)素生產(chǎn)過(guò)程中的尿素復(fù)鹽母液減壓濃縮至原體積的1/4，后注入高效液相色譜儀中，收集2-乙?；?2-去氨甲基四環(huán)素出峰時(shí)段的溶液； 將分離出來(lái)的2-乙酰基-2-去氨甲基四環(huán)素溶液pH調(diào)至中性，逐漸加入氯化鈉，直至使乙腈與水分離，分取乙腈層，再往水層加入適量乙腈，振搖，靜置，分取乙腈層，合并兩次乙腈層，在-15°C?_30°C靜置14-18小時(shí)，后立即過(guò)濾，所得濾液減壓濃縮至近干，58°C?62°C干燥得2-乙?；?2-去氨甲基四環(huán)素純品。
2.按照權(quán)利要求1所述的2-乙?；?2-去氨甲基四環(huán)素的制備方法，其特征在于所述高效液相色譜的色譜條件為: 流動(dòng)相:體積比為80?85:20?15的0.05%磷酸溶液-乙腈溶液； 色譜柱:Sinochrom ODS-AP 1um ； 流動(dòng)相流速:20-30ml/min ； 檢測(cè)波長(zhǎng):254nm。
3.按照權(quán)利要求1所述的2-乙?；?2-去氨甲基四環(huán)素的制備方法，其特征在于所述減壓濃縮條件為:壓力0.06?0.09MPa，58°C?62°C水浴中加熱。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及一種2-乙?；?2-去氨甲基四環(huán)素的制備方法，該方法是以將鹽酸四環(huán)素生產(chǎn)過(guò)程中的尿素復(fù)鹽母液經(jīng)減壓濃縮后，注入高效液相色譜儀中，收集2-乙酰基-2-去氨甲基四環(huán)素溶液；將分離出來(lái)的2-乙?；?2-去氨甲基四環(huán)素溶液pH調(diào)至中性，逐漸加入氯化鈉，使乙腈與水分層，2-乙?；?2-去氨甲基四環(huán)素被萃取至乙腈層中，分取乙腈層，再往水層加入適量乙腈，振搖，靜置，分取乙腈層，合并兩次乙腈，置冰箱冷凍室中靜置過(guò)夜，取出后立即過(guò)濾，取濾液減壓濃縮并干燥，得2-乙酰基-2-去氨甲基四環(huán)素純品。本發(fā)明工藝簡(jiǎn)便，具有高效、快速、回收率高等特點(diǎn)。
【IPC分類(lèi)】C07C231-24, C07C237-26
【公開(kāi)號(hào)】CN104529813
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410744314
【發(fā)明人】周紅, 鄒學(xué)鋒, 李鑫
【申請(qǐng)人】寧夏啟元藥業(yè)有限公司
【公開(kāi)日】2015年4月22日
【申請(qǐng)日】2014年12月9日