本技術(shù)涉及生物，更具體地說，它涉及一種山茱萸多肽的制備方法及其產(chǎn)品。

背景技術(shù)：

1、山茱萸作為一種中草藥材，具有健胃、補(bǔ)肝腎、治貧血、腰痛、神經(jīng)及心臟衰弱等多種藥理作用。其果肉不僅營養(yǎng)成分豐富，還富含多種人體必需氨基酸，是一種名貴的藥食同源植物。

2、然而，盡管山茱萸的營養(yǎng)價值極高，但關(guān)于其蛋白質(zhì)的提取和利用卻面臨一些挑戰(zhàn)。目前，對于山茱萸的研究主要集中在提取其中的皂苷、多糖、蘋果酸、酚類、酒石酸、鞣質(zhì)、糖蛋白等含有生理活性的物質(zhì)。而對于蛋白質(zhì)含量豐富的山茱萸來說，關(guān)于其蛋白質(zhì)的提取研究卻相對較少。在提取這些生理活性物質(zhì)的過程中，蛋白質(zhì)往往被視為雜質(zhì)而被去除，這導(dǎo)致了山茱萸中蛋白質(zhì)資源的極大浪費。同時其大分子植物蛋白質(zhì)被纖維素等覆蓋包裹，導(dǎo)致溶解度較低、粘度大且具有一定抗原性，使得人體的吸收和消化效率遠(yuǎn)低于動物性蛋白質(zhì)，這極大地限制了山茱萸果肉的開發(fā)利用。

3、與蛋白質(zhì)分子相比，多肽具有更高的吸收效率和生物效價，且具備降低膽固醇、降血壓、抗氧化等多種生理功能，更適合人體吸收利用。然而，傳統(tǒng)的提取方法往往難以獲得高純度的多肽，普通提取方法會使多糖與蛋白質(zhì)共同沉淀析出，導(dǎo)致得到的蛋白質(zhì)不純，雜質(zhì)較多，這嚴(yán)重限制了山茱萸多肽的提取率和純度。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、為了提高山茱萸多肽的提取率與純度，本技術(shù)提供一種山茱萸多肽的制備方法及其產(chǎn)品。

2、第一方面，本技術(shù)提供的一種山茱萸多肽的制備方法，采用如下的技術(shù)方案：

3、一種山茱萸多肽的制備方法，包括如下步驟：

4、(1)將山茱萸清洗、磨粉、干燥、過篩，制得山茱萸粉備用；使用超臨界二氧化碳作為溶劑對干燥過篩后的山茱萸粉萃取，收集析出物；

5、(2)在析出物中加入酸化甲醇，攪拌混勻，離心分離，收集沉淀；在沉淀中加入堿化甲醇超聲溶解，過濾提取，收集過濾后的濾渣，在濾渣中加水溶解后浸泡，水洗3-5次，水洗后的濾渣離心脫水后加入乙醇調(diào)節(jié)ph為6，浸泡處理6-8h，固液比1:5，浸泡處理完成后加入nacl溶液，離心分離，收集沉淀物；將沉淀物用純凈水洗凈后離心分離，收集沉淀得到山茱萸粗蛋白；

6、(3)將所述山茱萸粗蛋白放入水中攪拌分散，加入鏈霉蛋白酶和胰蛋白酶進(jìn)行雙酶酶解，加入穩(wěn)定劑，控制酶解溫度為50-60℃，ph為7.5-8.0，酶解1-2h；

7、(4)收集酶解液，加熱滅活，通過微濾膜，再通過超濾膜截取分子量小于1000da的多肽溶液后，旋蒸濃縮、真空冷凍干燥，粉碎過篩后，得到山茱萸多肽干粉。

8、其中堿化甲醇可通過500ml甲醇加入10ml氨水制備；酸化甲醇可通過500ml甲醇加入10ml甲酸制備。

9、通過采用上述技術(shù)方案，山茱萸粉經(jīng)過超臨界二氧化碳萃取處理，去除山茱萸中的油脂、色素等雜質(zhì)成分，為后續(xù)酶解過程提供更為純凈的底物。同時超臨界二氧化碳能夠滲透進(jìn)入山茱萸細(xì)胞內(nèi)部，通過其高擴(kuò)散性和流動性，破壞山茱萸粉的結(jié)構(gòu)，便于后續(xù)進(jìn)一步的提取步驟，提高提取率。進(jìn)一步的加入酸化甲醇去除粗蛋白中少量的環(huán)烯醚萜類物質(zhì)，加入堿化甲醇去除山茱萸中黃酮、綠原酸、異綠原酸、鞣酸、多糖等物質(zhì)，得到較為純凈的粗蛋白。在這個過程中也能將山茱萸中的其他有效成分有效分離提取，實現(xiàn)了對山茱萸中營養(yǎng)物質(zhì)的有效分離與利用，最大化地發(fā)揮了山茱萸的潛在價值。后續(xù)加入乙醇進(jìn)一步浸泡提取得到蛋白質(zhì)溶液，加入氯化鈉鹽溶液使得到的蛋白質(zhì)沉淀析出，得到山茱萸粗蛋白。將得到的粗蛋白酶解反應(yīng)，鏈霉蛋白酶和胰蛋白酶協(xié)同作用雙酶酶解，將粗蛋白水解成多肽片段，純化、濃縮、干燥、粉碎后得到所述山茱萸多肽。

10、通過超臨界二氧化碳、有機(jī)溶劑等前處理方式結(jié)合雙酶酶解技術(shù)，不僅保留了山茱萸中的寶貴營養(yǎng)成分，還顯著提高了多肽的純度。最終，經(jīng)過真空冷凍干燥等精細(xì)處理，獲得了易于保存、應(yīng)用廣泛的山茱萸多肽干粉，為醫(yī)藥、保健及功能性食品等領(lǐng)域提供了高質(zhì)量的原料，具有顯著的經(jīng)濟(jì)效益與健康價值。

11、可選的，所述步驟(1)超臨界二氧化碳萃取過程中設(shè)置加熱溫度為31.2-36℃，壓力為7.38-10mpa，選擇co2流速為0.4-0.6l/min。

12、通過采用上述技術(shù)方案，不僅能夠有效提高萃取效率，使山茱萸中的雜質(zhì)成分更加充分地溶解在超臨界co2中，同時由于其操作條件溫和，接近室溫且壓力適中，對有效成分的破壞較小，有助于保持原料的天然活性與純度。超臨界萃取過程中二氧化碳與山茱萸粉的接觸時間越長，傳質(zhì)越充分，因此選擇流速在0.4-0.6l/min之間既保證了傳質(zhì)的效果又提高了超臨界萃取的效果，進(jìn)一步提高除雜效果，為后續(xù)步驟提供優(yōu)質(zhì)的原料基礎(chǔ)。

13、可選的，所述步驟(1)超臨界流體萃取過程中還加入了乙酸乙酯，與山茱萸粉的加入重量份之比為2-3：100。

14、通過采用上述技術(shù)方案，乙酸乙酯的加入顯著增強(qiáng)了超臨界co2的溶解能力，促使山茱萸中的雜質(zhì)成分能夠被充分去除，加入比例的進(jìn)一步限定優(yōu)化了萃取效果，有利于乙酸乙酯充分發(fā)揮夾帶作用，提高除雜效果，同時乙酸乙酯具有一定的穩(wěn)定性，能夠一定程度上保護(hù)山茱萸中的活性成分，從而更多的提取雜質(zhì)，有利于后續(xù)多肽的提取，進(jìn)一步提高提取率。

15、可選的，所述步驟(1)中過篩后的山茱萸粉的粒徑為80-100目。

16、通過采用上述技術(shù)方案，山茱萸粉的顆粒大小會影響萃取的收率，粒徑小的山茱萸粉具有較好的萃取效果，通過對山茱萸粉粒徑的控制確保山茱萸粉具有均勻的顆粒大小和較高的比表面積，有利于超臨界流體在萃取過程中更好的滲透和擴(kuò)散，使萃取物中的有效成分更均勻的釋放和溶解。

17、可選的，所述山茱萸粉末與酸化甲醇以及堿化甲醇的加入重量份之比為1：1.5-2:1.5-2；

18、所述山茱萸粉末與氯化鈉溶液加入重量份之比為1:8-10，所述氯化鈉溶液的質(zhì)量濃度為5-10％。

19、通過采用上述技術(shù)方案，確保山茱萸中的有效成分能夠充分溶解或提取，同時避免溶劑的過度使用。通過調(diào)節(jié)氯化鈉溶液的濃度和混合比例，能夠優(yōu)化山茱萸中蛋白質(zhì)的溶解狀態(tài)，進(jìn)而促進(jìn)蛋白質(zhì)的有效提取。氯化鈉溶液作為鹽析劑，有助于蛋白質(zhì)從植物組織中釋放出來，提高提取率。

20、可選的，所述加酶量的重量份占山茱萸粉末加入量的3％，其中鏈霉蛋白酶和胰蛋白酶體積比為1.5-3:1；

21、所述山茱萸粉末與穩(wěn)定劑的加入重量份之比為1：0.7-0.8。

22、通過采用上述技術(shù)方案，酶的使用可以加速山茱萸中有效成分的釋放，鏈霉蛋白酶和胰蛋白酶的相互配合，鏈霉蛋白酶能夠分解蛋白質(zhì)中的肽鍵，降解與多糖結(jié)合的蛋白質(zhì)，從而釋放出更多的多肽成分。而胰蛋白酶則對多種蛋白質(zhì)都有較強(qiáng)的水解作用，通過調(diào)整這兩種酶的比例，可以優(yōu)化對山茱萸中蛋白質(zhì)的降解效果，從而釋放出更多的多肽成分，進(jìn)一步提高山茱萸多肽的提取率。

23、穩(wěn)定劑的加入能夠保護(hù)多肽在提取和后續(xù)處理過程中的穩(wěn)定性和活性，防止其發(fā)生降解或失活，確保最終產(chǎn)品的質(zhì)量和生物活性。通過對上述物質(zhì)加入比例的控制能夠在較溫和的條件下實現(xiàn)多肽的高效提取，保證了提取效果。

24、可選的，所述穩(wěn)定劑中包括抗氧化劑、聚乙二醇，其重量份之比為1:1.2-2。

25、通過采用上述技術(shù)方案，抗氧化劑能夠中和或捕獲自由基，從而阻止自由基鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的發(fā)生，保護(hù)多肽不受自由基的攻擊，在后續(xù)的過程中維持多肽的穩(wěn)定性，保護(hù)多肽功能的完整性。加入聚乙二醇利用其良好的穩(wěn)定性和相容性與抗氧化劑協(xié)同配合，增強(qiáng)蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性，從而提高蛋白質(zhì)的提取率。

26、第二方面，本技術(shù)提供一種山茱萸多肽產(chǎn)品，采用上述技術(shù)方案得到。

27、綜上所述，本技術(shù)具有以下有益效果：

28、1、由于本技術(shù)通過超臨界二氧化碳預(yù)處理結(jié)合有機(jī)溶劑預(yù)處理，通過適宜試劑的選擇，有效去除了山茱萸中的非目標(biāo)物質(zhì)，如黃酮、綠原酸、異綠原酸、鞣酸等，保留了高活性的蛋質(zhì)成分白。同時，超臨界二氧化碳的高擴(kuò)散性和流動性破壞了山茱萸粉的結(jié)構(gòu)，使得有效成分更易釋放，從而顯著提高了山茱萸多肽的提取率。

29、2、通過采用超臨界二氧化碳萃取、有機(jī)溶劑處理以及雙酶酶解技術(shù)，該方法能夠高效地從山茱萸中提取并純化多肽成分。超臨界二氧化碳萃取技術(shù)能夠去除山茱萸中的油脂、色素等雜質(zhì)，為后續(xù)步驟提供純凈的底物。有機(jī)溶劑處理步驟進(jìn)一步去除了環(huán)烯醚萜類物質(zhì)、黃酮、綠原酸、異綠原酸、鞣酸、多糖等雜質(zhì)，得到較為純凈的粗蛋白。雙酶酶解技術(shù)則能夠?qū)⒋值鞍赘咝У厮獬啥嚯钠?，再通過微濾、超濾等純化步驟，最終得到高純度的山茱萸多肽。

30、3、采用鏈霉蛋白酶和胰蛋白酶協(xié)同作用的雙酶酶解技術(shù)，通過調(diào)整這兩種酶的比例和加入量，優(yōu)化了蛋白質(zhì)的降解效果，從而釋放出更多的多肽成分。

31、4、通過過控制山茱萸粉的粒徑、調(diào)節(jié)氯化鈉溶液的濃度和混合比例、優(yōu)化酶的種類和比例以及穩(wěn)定劑的加入等，實現(xiàn)了對山茱萸中蛋白質(zhì)的有效提取和純化。