本發(fā)明涉及結(jié)縷草種質(zhì)親緣關(guān)系鑒別，更具體地說是涉及一種鑒別不同結(jié)縷草種質(zhì)親緣關(guān)系的方法。

背景技術(shù)：

1、結(jié)縷草屬(zoysiawilld.)隸屬于禾本科多年生低矮草本植物，一般分為11個種，多個變種以及變型，其中大多數(shù)結(jié)縷草可用于運(yùn)動場草坪、休憩草坪及保土草坪等的建植。結(jié)縷草屬植物在我國分布有5個種，2個變種和1個變型。5個種分別是結(jié)縷草(z.japonicasteud.)、細(xì)葉結(jié)縷草(z.tenuiflia?willd.extrin.)、溝葉結(jié)縷草(z.matrella(l.)merr.)、大穗結(jié)縷草(z.macorostachya?franch.etsva.)以及中華結(jié)縷草(z.sinicahance)；2個變種分別是青結(jié)縷草(z.japonica?var.pollida?nakai?et?honda)和長花結(jié)縷草(z.sinica?var.nipponica?ohwi.)；1個變型是大穗日本結(jié)縷草(z.japonicaf.macrostachya?h.d.dung?et?l.j.gong)。其中結(jié)縷草是該屬中分布范圍最廣、應(yīng)用面積最大的一個種，也是中國結(jié)縷草屬的代表種。

2、近年來，分子標(biāo)記技術(shù)在草坪草種質(zhì)資源的研究中的應(yīng)用越來越廣泛。在結(jié)縷草屬植物的研究中也有廣泛的應(yīng)用。est-ssr(expressed?sequence?tag-simplesequencerepeat)是基于表達(dá)序列標(biāo)簽開發(fā)微衛(wèi)星的一種分子標(biāo)記，與基因組ssr標(biāo)記相比具有更高的轉(zhuǎn)譯能力。由于est-ssr標(biāo)記是一類功能標(biāo)記，是以推測出est序列功能為基礎(chǔ)獲得的。目前，est-ssr被廣泛應(yīng)用于植物基因組學(xué)研究，遺傳圖譜的構(gòu)建、比較作圖、遺傳多樣性的評價等方面。很少應(yīng)用于結(jié)縷草屬種質(zhì)資源的研究。

3、因此，如何將est-ssr應(yīng)用于結(jié)縷草的分子標(biāo)記中，并開發(fā)鑒定不同結(jié)縷草種質(zhì)親緣關(guān)系的引物是本領(lǐng)域技術(shù)人員亟需解決的技術(shù)問題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、有鑒于此，基于est-ssr分子標(biāo)記的諸多優(yōu)越性，本發(fā)明采用est-ssr分子標(biāo)記的方法對不同地理來源的結(jié)縷草屬種質(zhì)進(jìn)行遺傳變異研究，從分子水平上探討了結(jié)縷草種質(zhì)資源的遺傳多樣性，為結(jié)縷草屬種質(zhì)資源的研究奠定了良好的基礎(chǔ)。

2、為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

3、一種鑒別不同結(jié)縷草種質(zhì)親緣關(guān)系的方法，以試劑盒進(jìn)行檢測，過程包括：

4、1)利用篩選出的20對est-ssr引物中任意3對引物對43份結(jié)縷草屬種質(zhì)進(jìn)行est-ssr的pcr擴(kuò)增，得到多態(tài)性條帶，并觀察每對引物擴(kuò)增出的等位基因數(shù)量；

5、2)根據(jù)est-ssr引物的多態(tài)性條帶，利用ntsys軟件對43份結(jié)縷草屬種質(zhì)進(jìn)行遺傳多樣性研究，確定遺傳系數(shù)，分析親緣關(guān)系的遠(yuǎn)近；

6、所述試劑盒包括seq?id?no.1～seq?id?no.40所示引物中任意一組或三組的結(jié)合；具體為：

7、

8、

9、優(yōu)選地，所述引物序列如seq?id?no.11～seq?id?no.12所示；

10、上游引物f：5’-tgctcaaacttgctttcctg-3’，如seq?id?no.11所示；

11、下游引物r：5’-ccgtgcaatcgtagtaccag-3’，如seq?id?no.12所示。

12、優(yōu)選地，seq?id?no.1～seq?id?no.10和seq?id?no.13～seq?id?no.40所述的引物中的任意兩組引物。

13、經(jīng)由上述的技術(shù)方案可知，與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明公開提供了一種鑒別不同結(jié)縷草種質(zhì)親緣關(guān)系的方法，該方法可以對不同種質(zhì)結(jié)縷草間的親緣關(guān)系進(jìn)行鑒定，為后續(xù)研究結(jié)縷草的遺傳性能奠定了基礎(chǔ)。

技術(shù)特征：

1.一種鑒別不同結(jié)縷草種質(zhì)親緣關(guān)系的方法，其特征在于，以試劑盒進(jìn)行檢測，過程包括：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鑒別不同結(jié)縷草種質(zhì)親緣關(guān)系的方法，其特征在于，所述引物序列如seq?id?no.11～seq?id?no.12所示；

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鑒別不同結(jié)縷草種質(zhì)親緣關(guān)系的方法，其特征在于，seq?idno.1～seq?id?no.10和seq?id?no.13～seq?id?no.40所述的引物中的任意兩組引物。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種鑒別不同結(jié)縷草種質(zhì)親緣關(guān)系的方法，屬于結(jié)縷草種質(zhì)親緣關(guān)系鑒定技術(shù)領(lǐng)域，引物序列如SEQ?ID?NO.11～SEQ?ID?NO.12所示，將該引物用于制備試劑盒，可以特定對結(jié)縷草的親緣關(guān)系進(jìn)行鑒定，為后續(xù)研究結(jié)縷草的遺傳性能奠定了基礎(chǔ)。

技術(shù)研發(fā)人員：黃春瓊,董榮書,何瀟,劉攀道,嚴(yán)琳玲,劉國道
受保護(hù)的技術(shù)使用者：中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物品種資源研究所
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/6