本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥，具體涉及用于防治蜂巢小甲蟲的dsrna及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、蜂巢小甲蟲(aethina?tumida，small?hive?beetle，shb)，又名蜂箱小甲蟲或蜂房小甲蟲，是一種完全變態(tài)(發(fā)育歷程：卵期、幼蟲期、蛹期和成蟲期)的鞘翅目昆蟲且寄生在蜂群內(nèi)的重要害蟲，原分布于非洲南部，隨后擴(kuò)散至澳洲、美洲、亞洲等各州多個(gè)國(guó)家，在世界各地均引起不同程度的蜂群危害和經(jīng)濟(jì)損失，被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(oie)列為蜜蜂六大重要病原體之一。蜂巢小甲蟲幼蟲和成蟲均會(huì)對(duì)蜜蜂造成嚴(yán)重的危害，它們?nèi)∈郴ǚ邸⒎涿酆兔鄯溆紫x，因而會(huì)導(dǎo)致蜜蜂幼蟲死亡、蜂蜜發(fā)酵和巢脾損毀，常造成整個(gè)蜂巢坍塌、蜂群棄巢飛逃。

2、目前，治理蜂巢小甲蟲的主要手段是化學(xué)防治，但大面積地使用化學(xué)殺蟲劑導(dǎo)致抗藥性的產(chǎn)生、對(duì)蜜蜂的危害以及生態(tài)環(huán)境的破壞等，不利于蜂巢小甲蟲防治的可持續(xù)治理。因此，研發(fā)綠色分子靶標(biāo)對(duì)于防治蜂巢小甲蟲是迫在眉睫的。

3、rna干擾(rnainterference，rnai)是一種由雙鏈rna(double?strand?rna，dsrna)分子引起的特異性轉(zhuǎn)錄后基因沉默的現(xiàn)象，是研究基因功能的有力工具，同時(shí)在害蟲防治方面也具有極大潛力?；趓nai技術(shù)的害蟲防治手段具有專一性，且對(duì)非靶標(biāo)生物安全。蜂巢小甲蟲屬于鞘翅目昆蟲具有高效的rnai機(jī)制，將dsrna注射蜂巢小甲蟲卵、幼蟲、蛹或成蟲均可以抑制目的基因的表達(dá)。因此，篩選出影響蜂巢小甲蟲生長(zhǎng)發(fā)育的關(guān)鍵靶標(biāo)，對(duì)于加速rnai技術(shù)在保護(hù)蜜蜂、防治蜂巢小甲蟲具有重要意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于旨在至少解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)問題之一。本發(fā)明人以atcyp4g279基因?yàn)榘袠?biāo)，設(shè)計(jì)dsrna，將其注入蜂巢小甲蟲體內(nèi)，發(fā)現(xiàn)明顯抑制蜂巢小甲蟲的存活率。表明atcyp4g279基因是影響蜂巢小甲蟲的重要靶標(biāo)基因。

2、本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是：

3、本發(fā)明的第一方面，提供atcyp4g279基因抑制劑在(a1)～(a8)任一項(xiàng)中的應(yīng)用，

4、(a1)抑制昆蟲羽化成蟲；

5、(a2)制備抑制昆蟲羽化成蟲的產(chǎn)品；

6、(a3)抑制昆蟲生長(zhǎng)；

7、(a4)制備抑制昆蟲生長(zhǎng)的產(chǎn)品；

8、(a5)降低昆蟲存活率；

9、(a6)制備降低昆蟲存活率的產(chǎn)品；

10、(a7)防治有害昆蟲；

11、(a8)制備防治有害昆蟲的產(chǎn)品。

12、在本發(fā)明的一些實(shí)施方式中，所述atcyp4g279基因抑制劑包括抑制atcyp4g279基因表達(dá)、沉默或敲除基因的物質(zhì)，和/或，抑制atcyp4g279基因編碼的蛋白含量和/或活性的物質(zhì)；

13、優(yōu)選地，所述抑制劑包括shrna、sirna、dsrna、sgrna、mirna、cdna、反義rna/dna、小分子化合物、肽、抗體中的至少一種；

14、在本發(fā)明的一些實(shí)施方式中，所述有害昆蟲為鞘翅目昆蟲。

15、在本發(fā)明的一些實(shí)施方式中，所述鞘翅目昆蟲為蜂巢小甲蟲。

16、在本發(fā)明的一些實(shí)施方式中，所述dsrna的核苷酸序列如seq?id?no：2所示。

17、本發(fā)明的第二方面，提供一種dsrna，所述dsrna的核苷酸序列如seq?id?no：2所示。

18、在本發(fā)明的一些實(shí)施方式中，合成所述dsrna的引物序列如seq?id?no:3和seq?idno:4所示。

19、本發(fā)明的第三方面，提供本發(fā)明第二方面所述的dsrna的相關(guān)生物材料，所述相關(guān)生物材料為下述(b1)～(b8)中的任一種：

20、(b1)編碼所述dsrna的核酸分子；

21、(b2)含有(b1)所述核酸分子的表達(dá)盒；

22、(b3)含有(b1)所述核酸分子的重組載體；

23、(b4)含有(b2)所述表達(dá)盒的重組載體；

24、(b5)含有(b1)所述核酸分子的重組微生物；

25、(b6)含有(b2)所述表達(dá)盒的重組微生物；

26、(b7)含有(b3)所述重組載體的重組微生物；

27、(b8)含有(b4)所述重組載體的重組微生物。

28、本發(fā)明的第四方面，提供本發(fā)明第二方面所述的dsrna或第三方面所述的相關(guān)生物材料在(a1)～(a8)任一項(xiàng)中的應(yīng)用，

29、(a1)抑制昆蟲羽化成蟲；

30、(a2)制備抑制昆蟲羽化成蟲的產(chǎn)品；

31、(a3)抑制昆蟲生長(zhǎng)；

32、(a4)制備抑制昆蟲生長(zhǎng)的產(chǎn)品；

33、(a5)降低昆蟲存活率；

34、(a6)制備降低昆蟲存活率的產(chǎn)品；

35、(a7)防治有害昆蟲；

36、(a8)制備防治有害昆蟲的產(chǎn)品。

37、在本發(fā)明的一些實(shí)施方式中，所述有害昆蟲為鞘翅目昆蟲。

38、在本發(fā)明的一些實(shí)施方式中，所述鞘翅目昆蟲為蜂巢小甲蟲。

39、本發(fā)明的第五方面，提供一種產(chǎn)品，包括本發(fā)明第四方面所述的dsrna或第五方面所述的相關(guān)生物材料。

40、在本發(fā)明的一些實(shí)施方式在，所述產(chǎn)品的功能為(a1)～(a8)任一項(xiàng)，

41、(a1)抑制昆蟲羽化成蟲；

42、(a2)制備抑制昆蟲羽化成蟲的產(chǎn)品；

43、(a3)抑制昆蟲生長(zhǎng)；

44、(a4)制備抑制昆蟲生長(zhǎng)的產(chǎn)品；

45、(a5)降低昆蟲存活率；

46、(a6)制備降低昆蟲存活率的產(chǎn)品；

47、(a7)防治有害昆蟲；

48、(a8)制備防治有害昆蟲的產(chǎn)品。

49、在本發(fā)明的一些實(shí)施方式中，所述有害昆蟲為鞘翅目昆蟲。

50、在本發(fā)明的一些實(shí)施方式中，所述鞘翅目昆蟲為蜂巢小甲蟲。

51、在本發(fā)明的一些實(shí)施方式中，所述產(chǎn)品為噴灑式制劑或餌劑。

52、本發(fā)明的第六方面，提供一種防治有害昆蟲的方法，所述方法包括：所述方法包括：下調(diào)有害昆蟲體內(nèi)atcyp4g279基因的表達(dá)或活性。

53、在本發(fā)明的一些實(shí)施方式中，所述下調(diào)有害昆蟲體內(nèi)atcyp4g279基因的表達(dá)或活性的方法包括：在有害昆蟲的基因組中敲除或沉默atcyp4g279基因；或?qū)⑾抡{(diào)atcyp4g279基因轉(zhuǎn)錄、多肽表達(dá)或多肽活性的下調(diào)劑轉(zhuǎn)入有害昆蟲體內(nèi)。

54、在本發(fā)明的一些實(shí)施方式中，所述方法利用本發(fā)明第一方面中所述的atcyp4g279基因抑制劑轉(zhuǎn)入有害昆蟲體內(nèi)。

55、在本發(fā)明的一些實(shí)施方式中，所述atcyp4g279基因抑制劑包括本發(fā)明第二方面所述應(yīng)用中的dsrna或dsrna的相關(guān)生物材料。

56、在本發(fā)明的一些實(shí)施方式中，所述有害昆蟲為鞘翅目昆蟲。

57、在本發(fā)明的一些實(shí)施方式中，所述鞘翅目昆蟲為蜂巢小甲蟲。

58、本發(fā)明的有益效果是：

59、本發(fā)明以atcyp4g279基因?yàn)榘袠?biāo)，設(shè)計(jì)dsrna并注射入蜂巢小甲蟲體內(nèi)，觀察對(duì)蜂巢小甲蟲生長(zhǎng)發(fā)育的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，注射atcyp4g279?dsrna后，蜂巢小甲蟲的存活率降低，蜂巢小甲蟲羽化發(fā)育后死亡率顯著提高；這在影響昆蟲防治方面有重要的作用；例如用于制備防治蜂巢小甲蟲的制劑等，在蜂巢小甲蟲防治過程中具有重要作用。