本發(fā)明涉及一種苯丙氨酸-天冬氨酸共聚物與聚賴氨酸離子交聯(lián)穩(wěn)定高內(nèi)相水包油乳液的方法，屬于肽表面活性劑、表面物理化學(xué)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

1、高內(nèi)相乳液(high?internal?phase?emulsion,hipe)通常是指內(nèi)相的體積分?jǐn)?shù)大于74％的乳狀液，由于高內(nèi)相乳液的非連續(xù)相體積過高，所以會導(dǎo)致乳液的內(nèi)部液滴尺寸不均勻或變形。某些顆粒穩(wěn)定的pickering高內(nèi)相乳液會隨著內(nèi)相體積的升高發(fā)生相反轉(zhuǎn)，而表面活性劑分子穩(wěn)定的高內(nèi)相乳狀液則會隨著內(nèi)相體積的升高繼續(xù)穩(wěn)定乳狀液或者破乳。由于連續(xù)相的比例低，高內(nèi)相乳液往往具有高粘度，因此也被稱為凝膠乳液。

2、現(xiàn)有技術(shù)中用于制備高內(nèi)相乳液的乳化劑有合成聚合物或無機顆粒等，但是由于其生物毒性而在化妝品、制藥和食品工業(yè)中的應(yīng)用有限。因此，開發(fā)環(huán)境友好的生物相容性顆粒作為有效的穩(wěn)定劑，近年來受到了特別關(guān)注。自然界中的蛋白質(zhì)和多糖衍生物可以作為高內(nèi)相乳液的乳化劑，通常蛋白質(zhì)顆粒穩(wěn)定水包油(o/w)高內(nèi)相乳液。高內(nèi)相乳液具有比同體積普通乳液更大的非連續(xù)相表面積，利用高內(nèi)相乳液的這種特性，可以將高內(nèi)相乳液用于多孔材料的模板，有機半導(dǎo)體、過濾膜、組織工程支架、食品和藥物輸送系統(tǒng)。

3、鄒亞男(食品科技,2022,47(7):129-133.)研究了不同水解度的綠豆蛋白多肽對水包油乳狀液在ph值在7.0下的10分鐘穩(wěn)定性的影響，結(jié)果表明，隨著水解度的增加，乳狀液的乳化活性、乳化穩(wěn)定性、zeta電位和表面疏水性呈現(xiàn)先增加后降低的趨勢。王丹等人(中國油脂,2024(003):049.)研究了大豆肽納米顆粒(spn)pickering乳液穩(wěn)定性，以大豆肽聚集體為原料，采用超聲法制備spn，在spn體系中引入大豆分離蛋白(spi)構(gòu)建復(fù)合乳化劑，研究不同乳化劑質(zhì)量濃度下spi對spn界面活性和在中性ph條件下的15天乳化穩(wěn)定性的影響。中國專利cn202111548661.4公開了以核桃粕為原料，經(jīng)脫脂后堿提酸沉，再使用胰蛋白酶限制性酶解，最后采用超濾分離和葡聚糖凝膠g25凝膠層析分離純化獲得核桃多肽，考察了中性條件下的乳化性質(zhì)。cn201811525882.8公開了一種殼聚糖酪蛋白磷酸肽復(fù)合納米顆粒穩(wěn)定pickering高內(nèi)相乳液及其制備.在ph為4～6范圍內(nèi)乳液穩(wěn)定性達(dá)到六個月以上。但這些現(xiàn)有技術(shù)報道的肽乳化乳液通常穩(wěn)定期短，或者乳液耐ph的變化能力弱，只能在有限ph范圍內(nèi)維持乳液。此外，從蛋白酶解制備肽需要對反應(yīng)條件進(jìn)行嚴(yán)格控制，才能保證獲得每批產(chǎn)品中的組成大致相同。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、[技術(shù)問題]

2、現(xiàn)有技術(shù)中穩(wěn)定pickering高內(nèi)相乳液的穩(wěn)定劑往往存在制備工藝復(fù)雜，成分不明確，雖然在一定程度上能夠維持維持pickering乳液的穩(wěn)定性，但穩(wěn)定期短或者乳液耐ph的變化能力弱，只能在有限ph范圍內(nèi)維持乳液。針對現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷與不足，本發(fā)明提供了一種苯丙氨酸-天冬氨酸共聚物與聚賴氨酸離子交聯(lián)穩(wěn)定高內(nèi)相水包油乳液的方法，該方法以苯丙氨酸-天冬氨酸共聚物的天冬氨酸β羧基與聚賴氨酸的氨基形成離心配對進(jìn)行交聯(lián)(如下圖1表示)，穩(wěn)定油水界面，制備的高內(nèi)相水包油乳液在ph＝1～11范圍內(nèi)穩(wěn)定6～24個月。

3、[技術(shù)方案]

4、為了實現(xiàn)上述目的，采用了如下技術(shù)方案：

5、一種苯丙氨酸-天冬氨酸共聚物與聚賴氨酸離子交聯(lián)穩(wěn)定高內(nèi)相水包油乳液的方法，所述方法包括如下步驟：

6、(1)配制苯丙氨酸-天冬氨酸共聚物與聚賴氨酸的水溶液作為水相；

7、(2)將油相和步驟(1)水相混合，得混合體系，其中油相和水相的體積比為7～9:1～3；然后將混合體系均質(zhì)，均質(zhì)后在60～90℃下加熱2～6小時，自然冷卻后，獲得苯丙氨酸-天冬氨酸共聚物與聚賴氨酸離子交聯(lián)穩(wěn)定的高內(nèi)相水包油乳液。

8、在一種實施方式中，步驟(1)所述水相中苯丙氨酸-天冬氨酸共聚物的濃度為0.5～6g/l，賴氨酸濃度為0.075～1g/l。

9、在一種實施方式中，步驟(1)所述水相的ph值為1～11。

10、在一種實施方式中，步驟(1)所述聚賴氨酸的分子量為30000da～300000da；優(yōu)選為30000da～70000da或70000da～150000da或150000da～300000da。

11、在一種實施方式中，步驟(1)苯丙氨酸-天冬氨酸共聚物的制備過程如下：在磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液中加入l-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽與l-天冬氨酸二甲酯鹽酸鹽，加入蛋白酶，在25～55℃下攪拌反應(yīng)3～6h，反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)液離心，取沉淀，用3～5倍體積的去離子水、無水乙醇洗滌三次，離心后冷凍干燥，得到無規(guī)共聚物；將得到的無規(guī)共聚物放入二氯甲烷/甲醇中，加入naoh，在25～65℃下攪拌反應(yīng)0.5-2h，反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)化合物經(jīng)減壓旋蒸，即得到苯丙氨酸-天冬氨酸共聚物。

12、在一種實施方式中，所述l-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽與l-天冬氨酸二甲酯鹽酸鹽與磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液的質(zhì)量體積比為4.3～6.5：7.9～23.7：60～150；g:g:ml。

13、在一種實施方式中，所述磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液濃度為0.2～0.5moi/l，ph＝6.5～9.0。

14、在一種實施方式中，所述蛋白酶為菠蘿蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、堿性蛋白酶中的任一種。

15、在一種實施方式中，所述蛋白酶與l-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽和l-天冬氨酸二甲酯鹽酸鹽的質(zhì)量比為0.5～2.5：4.3～6.5：7.9～23.7。

16、在一種實施方式中，所述離心條件：5000～8000rpm，時間5～10min。

17、在一種實施方式中，所述甲烷/甲醇的體積比為6:1～9:1。

18、在一種實施方式中，所述naoh與l-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽和l-天冬氨酸二甲酯鹽酸鹽的質(zhì)量比為0.8～6：4.3～6.5：7.9～23.7。

19、在一種實施方式中，步驟(2)所述油相為正辛烷、角鯊?fù)?、山茶油、椰子油、大豆油中的任一種。

20、在一種實施方式中，步驟(2)所述油水體積比為7.4:2.6或8:1或9:1。

21、在一種實施方式中，步驟(3)所述均質(zhì)條件：10000～15000rpm，2～5min。

22、本發(fā)明還提供了一種由上述所述方法制備獲得的苯丙氨酸-天冬氨酸共聚物與聚賴氨酸離子交聯(lián)穩(wěn)定高內(nèi)相水包油乳液。

23、本發(fā)明還提供了由上述所述的苯丙氨酸-天冬氨酸共聚物與聚賴氨酸離子交聯(lián)穩(wěn)定高內(nèi)相水包油乳液在化妝品、制藥和食品工業(yè)中的應(yīng)用。

24、有益效果：

25、本發(fā)明采用苯丙氨酸-天冬氨酸共聚物的天冬氨酸β羧基與聚賴氨酸的氨基形成離心配對進(jìn)行交聯(lián)，來穩(wěn)定油水界面形成穩(wěn)定的高內(nèi)向水包油乳液，其中苯丙氨酸-天冬氨酸共聚物由酶催化方法合成，工藝簡單，原料易獲得；并且制備的苯丙氨酸-天冬氨酸共聚物與聚賴氨酸穩(wěn)定的高內(nèi)相水包油乳液具備較高的穩(wěn)定性，在ph＝1～11范圍內(nèi)能夠穩(wěn)定6～24個月。