本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，特別涉及一種人參皂苷rb1轉(zhuǎn)化制備人參皂苷rg3和rg5的方法。

背景技術(shù)：

1、天然產(chǎn)物人參(panax?ginseng)的有效成分是人參皂苷?，F(xiàn)代藥理研究的結(jié)果表明，人參皂苷有220種之多。人參皂苷的常量組分為rb1、rb2、rc、rd、rg1、re，這些成分占總皂苷的80-90％以上，但往往這些常量組分沒(méi)有或有較低的抗癌活性。人參皂苷的稀有成分如人參皂苷rh1、rh2、rg3、rg5、rg6由于在抗腫瘤方面作用顯著而日益受到關(guān)注。極稀有人參皂苷rg5一般存在于紅參中，具有抑制腫瘤細(xì)胞增長(zhǎng)，具有抗肝癌、胃癌、食管癌、宮頸癌等藥理作用。除此之外，人參皂苷rg5還具有抗過(guò)敏、抗炎、抗記憶障礙、抗抑郁、預(yù)防糖尿病、美白等作用。常規(guī)方法如酸水解、堿水解或直接從紅參中提取rg3和rg5存在著原藥材利用率低，產(chǎn)物產(chǎn)率低等問(wèn)題。目前，獲得稀有人參皂苷較直接的方法是微生物或酶轉(zhuǎn)化方法。相對(duì)于化學(xué)轉(zhuǎn)化而言，微生物/酶轉(zhuǎn)化條件溫和，反應(yīng)周期短，專(zhuān)屬性強(qiáng)，反應(yīng)無(wú)需大量的化學(xué)試劑。但是微生物/酶的制備需要有特定的反應(yīng)水解酶，并且反應(yīng)的產(chǎn)物取決于微生物或酶的活性，若規(guī)?；a(chǎn)時(shí)，需要培養(yǎng)和消耗大量的微生物菌種/生物酶。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是針對(duì)于現(xiàn)有人參皂苷rg3和rg5獲得和提取方法存在的問(wèn)題，提供了一種人參皂苷rb1轉(zhuǎn)化制備人參皂苷rg3和rg5的方法。該方法使用低共熔溶劑-緩沖鹽作為反應(yīng)溶媒，制備過(guò)程和下游處理過(guò)程簡(jiǎn)單、產(chǎn)品轉(zhuǎn)化產(chǎn)率高、純度高，可高效制備稀有人參皂苷rg3和rg5混合物并可進(jìn)一步分離得到人參皂苷rg3和rg5單一成分。

2、一種人參皂苷rb1轉(zhuǎn)化制備人參皂苷rg3和rg5的方法，將人參皂苷rb1于反應(yīng)溶媒中經(jīng)轉(zhuǎn)化反應(yīng)生成人參皂苷rg3和rg5。

3、進(jìn)一步的，上述的人參皂苷rb1轉(zhuǎn)化制備人參皂苷rg3和rg5的方法，包括如下步驟：

4、1)將人參皂苷rb1粗提物加入反應(yīng)溶媒中溶解，人參皂苷rb1粗提物與反應(yīng)溶媒的質(zhì)量體積比為1-20mg/ml；

5、2)將混合液加熱，進(jìn)行轉(zhuǎn)化反應(yīng)；

6、3)反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)溶液冷卻至室溫，經(jīng)分離處理，得到人參皂苷rg3和rg5的混合物。

7、進(jìn)一步的，上述的人參皂苷rb1轉(zhuǎn)化制備人參皂苷rg3和rg5的方法，包括如下步驟：

8、1)將人參皂苷rb1粗提物加入反應(yīng)溶媒中溶解，人參皂苷rb1粗提物與反應(yīng)溶媒的質(zhì)量體積比為1-20mg/ml；

9、2)將混合液加熱，進(jìn)行轉(zhuǎn)化反應(yīng)；

10、3)反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)溶液冷卻至室溫，經(jīng)分離處理，得到人參皂苷rg3和rg5的混合物；

11、4)將人參皂苷rg3和rg5的混合物分離得到人參皂苷rg3和人參皂苷rg5單一成分。

12、進(jìn)一步的，上述的人參皂苷rb1轉(zhuǎn)化制備人參皂苷rg3和rg5的方法，所述步驟1)中，反應(yīng)溶媒為低共熔溶劑(des)-酸性緩沖溶液。

13、進(jìn)一步的，上述的人參皂苷rb1轉(zhuǎn)化制備人參皂苷rg3和rg5的方法，所述的des以氯化膽堿作為氫鍵受體，以醇類(lèi)、尿素或醇類(lèi)和尿素的混合物為供體。較好的，所述醇類(lèi)為乙二醇、丙二醇或甘油。酸性緩沖溶液為ph?3至5的緩沖溶液。

14、進(jìn)一步的，上述的人參皂苷rb1轉(zhuǎn)化制備人參皂苷rg3和rg5的方法，反應(yīng)溶媒中des的質(zhì)量百分含量為1-20wt％。

15、進(jìn)一步的，上述的人參皂苷rb1轉(zhuǎn)化制備人參皂苷rg3和rg5的方法，所述步驟2)中，首先，將混合液加熱至30～50℃，反應(yīng)40～60min；然后，升溫至80～85℃，反應(yīng)10～30min；

16、進(jìn)一步的，上述的人參皂苷rb1轉(zhuǎn)化制備人參皂苷rg3和rg5的方法，所述步驟3)中，

17、分離處理的方法為：

18、方法一：

19、a、將冷卻后的反應(yīng)溶液用濾膜過(guò)濾，收集絮狀沉淀和上清液；

20、b、將絮狀沉淀用水洗滌，以除去反應(yīng)溶液中的鹽成分，再將清洗后的沉淀烘干；

21、c、將上清液置于透析膜中透析，以除去上清液中的鹽成分，再將透析后的上清液干燥；

22、d、收集步驟b和c烘干和干燥得到的產(chǎn)品，即為人參皂苷rg3和rg5混合物；

23、或者，方法二：

24、a、將冷卻后的反應(yīng)溶液全部轉(zhuǎn)移至透析膜中進(jìn)行透析，以除去反應(yīng)溶液中的鹽成分；

25、b、透析后的反應(yīng)溶液經(jīng)過(guò)濾，得到沉淀及濾液，沉淀和濾液分別干燥，收集干燥得到的產(chǎn)品，即為人參皂苷rg3和rg5混合物；

26、或者，方法三：

27、a、將冷卻后的反應(yīng)溶液用濾膜過(guò)濾，收集絮狀沉淀和上清液；

28、b、將絮狀沉淀用水洗滌，以除去反應(yīng)溶液中的鹽成分，再將清洗后的沉淀烘干；

29、c、將上清液經(jīng)過(guò)離子交換樹(shù)脂柱吸附和除鹽，再用有機(jī)溶劑洗脫人參皂苷rg3和rg5，洗脫液經(jīng)過(guò)除去有機(jī)溶劑、干燥；優(yōu)選的，將上清液在離子交換樹(shù)脂柱中吸附一段時(shí)間，然后用去離子水除去上清液中的鹽成分，再用有機(jī)溶劑如甲醇洗脫吸附的人參皂苷rg3和rg5，洗脫液經(jīng)過(guò)除去有機(jī)溶劑、干燥，得到人參皂苷rg3和rg5混合物；

30、d、收集步驟b和c烘干和干燥得到的產(chǎn)品，即為人參皂苷rg3和rg5混合物。

31、進(jìn)一步的，上述的人參皂苷rb1轉(zhuǎn)化制備人參皂苷rg3和rg5的方法，步驟4)將人參皂苷rg3和rg5的混合物分離，分別得到人參皂苷rg3和人參皂苷rg5的方法為：

32、方法1、將步驟3)得到的人參皂苷rg3和rg5混合物，以有機(jī)溶劑提取，將提取液經(jīng)過(guò)磺酸基色譜柱或c18色譜柱梯度洗脫分離，分別得到人參皂苷rg5和r-型人參皂苷rg3；

33、或者，方法2、取所述分離處理的方法一、二或三中步驟b得到的干燥沉淀，以有機(jī)溶劑提取，將提取液經(jīng)過(guò)磺酸基色譜柱或c18色譜柱梯度洗脫分離，分別得到單一成分的人參皂苷rg5和r-型人參皂苷rg3；

34、或者，方法3、取所述分離處理的方法一中步驟c的透析后的上清液、方法二中步驟b的濾液、或方法三中步驟c的洗脫液，經(jīng)過(guò)磺酸基色譜柱或c18色譜柱梯度洗脫分離，得到單一成分的人參皂苷rg5和s-型人參皂苷rg3。

35、進(jìn)一步的，上述的人參皂苷rb1轉(zhuǎn)化制備人參皂苷rg3和rg5的方法，濾膜規(guī)格為0.45-10微米。

36、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)勢(shì)在于：

37、1.本發(fā)明所得的產(chǎn)品單一，產(chǎn)率高、產(chǎn)品提純方便。

38、2.本發(fā)明方法簡(jiǎn)單，原料成本低廉、產(chǎn)品價(jià)值高。

39、3.本發(fā)明產(chǎn)品反應(yīng)和純化過(guò)程綠色環(huán)保。

技術(shù)特征：

1.一種人參皂苷rb1轉(zhuǎn)化制備人參皂苷rg3和rg5的方法，其特征在于，將人參皂苷rb1于反應(yīng)溶媒中經(jīng)轉(zhuǎn)化反應(yīng)生成人參皂苷rg3和rg5。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人參皂苷rb1轉(zhuǎn)化制備人參皂苷rg3和rg5的方法，其特征在于，包括如下步驟：

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人參皂苷rb1轉(zhuǎn)化制備人參皂苷rg3和rg5的方法，其特征在于，包括如下步驟：

4.根據(jù)權(quán)利要求1至3任意一項(xiàng)所述的人參皂苷rb1轉(zhuǎn)化制備人參皂苷rg3和rg5的方法，其特征在于，反應(yīng)溶媒為des-緩沖溶液。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的人參皂苷rb1轉(zhuǎn)化制備人參皂苷rg3和rg5的方法，其特征在于，所述的des以氯化膽堿作為氫鍵受體，以醇類(lèi)、尿素或醇類(lèi)和尿素的混合物為供體；所述緩沖溶液為ph?3至5的緩沖溶液。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的人參皂苷rb1轉(zhuǎn)化制備人參皂苷rg3和rg5的方法，其特征在于，反應(yīng)溶媒中des的質(zhì)量百分含量為1-20wt％。

7.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的人參皂苷rb1轉(zhuǎn)化制備人參皂苷rg3和rg5的方法，其特征在于，所述步驟2)中，首先，將混合液加熱至30～50℃，反應(yīng)40～60min；然后，升溫至80～85℃，反應(yīng)10～30min。

8.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的人參皂苷rb1轉(zhuǎn)化制備人參皂苷rg3和rg5的方法，其特征在于，步驟3)中分離處理的方法為：

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的人參皂苷rb1轉(zhuǎn)化制備人參皂苷rg3和rg5的方法，其特征在于，步驟4)將人參皂苷rg3和rg5的混合物分離，分別得到人參皂苷rg3和人參皂苷rg5的方法為：

10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的人參皂苷rb1轉(zhuǎn)化制備人參皂苷rg3和rg5的方法，其特征在于，分離處理的方法中，濾膜規(guī)格為0.45-10微米。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明的目的是針對(duì)于現(xiàn)有人參皂苷Rg3和Rg5獲得和提取方法存在的問(wèn)題，提供了一種人參皂苷Rb1轉(zhuǎn)化制備人參皂苷Rg3和Rg5的方法。本發(fā)明的人參皂苷Rb1轉(zhuǎn)化制備人參皂苷Rg3和Rg5的方法，將人參皂苷Rb1于反應(yīng)溶媒中經(jīng)轉(zhuǎn)化反應(yīng)生成人參皂苷Rg3和Rg5。該方法使用低共熔溶劑?緩沖鹽溶液作為反應(yīng)溶媒，制備過(guò)程和下游處理過(guò)程簡(jiǎn)單、產(chǎn)品轉(zhuǎn)化產(chǎn)率高、純度高，可高效制備稀有人參皂苷Rg3和Rg5混合物，并可進(jìn)一步分離得到人參皂苷Rg3和Rg5單一成分。

技術(shù)研發(fā)人員：吳秀紅,王紹艷,楊亞寧,叢景香,張偉
受保護(hù)的技術(shù)使用者：遼寧科技大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/6