本公開涉及免疫原性多肽，且尤其是能夠刺激對(duì)人免疫缺陷病毒(hiv)的免疫應(yīng)答的免疫原性多肽。

背景技術(shù)：

1、從感染了hiv-1的人類供體克隆的單細(xì)胞抗體表明，廣泛中和抗hiv-1抗體(bnab)的獨(dú)特之處在于它們是高度體細(xì)胞突變的。此外，高度的體細(xì)胞突變對(duì)于與天然hiv-1?env的結(jié)合和bnab中和活性至關(guān)重要。大量突變的聚集表明，bnab進(jìn)化以應(yīng)對(duì)體細(xì)胞超突變的迭代和生發(fā)中心(gc)中的選擇。如人類的前瞻性研究所揭示的，bnab這樣做是為了應(yīng)對(duì)抗體壓力引起的病毒逃逸變體?？傊@些觀察表明，用以激發(fā)(elicit)bnab的疫苗接種需要一系列序貫(sequential)免疫原，其從誘導(dǎo)攜帶bnab的種系前體的b淋巴細(xì)胞的擴(kuò)增的免疫原開始。

2、序貫免疫(sequential?immunization)可以指導(dǎo)(shepherd)bnab開發(fā)的想法已通過(guò)攜帶人bnab的推斷種系(inferred?germline，igl)前體的遺傳修飾的小鼠實(shí)驗(yàn)得到證實(shí)。然而，用于啟動(dòng)應(yīng)答的啟動(dòng)免疫原(priming?immunogen)未能激活和擴(kuò)增在具有多克隆抗體庫(kù)(repertoires)的動(dòng)物中表達(dá)bnab的推斷前體(inferred?precursor)的b細(xì)胞。事實(shí)上，幾乎所有bnab的igl都無(wú)法結(jié)合天然樣hiv-1免疫原或中和hiv-1毒株。因此，hiv-1疫苗開發(fā)的關(guān)鍵目標(biāo)已在于設(shè)計(jì)在具有多克隆庫(kù)的動(dòng)物(包括靈長(zhǎng)類動(dòng)物)中募集表達(dá)bnab前體的b細(xì)胞至gc反應(yīng)的免疫原。

3、為此，針對(duì)免疫原設(shè)計(jì)的種系靶向方法已聚焦在產(chǎn)生以高親和力與特定bnab前體結(jié)合的免疫原上，其基本原理是b細(xì)胞募集至gc部分取決于受體對(duì)抗原的親和力。然而，這種方法在質(zhì)量和數(shù)量上有效地限制了所募集b細(xì)胞的庫(kù)。而且，它無(wú)法解釋以下發(fā)現(xiàn)：每個(gè)gc均能容納(accommodate)具有寬范圍親和力的多種不同的創(chuàng)始(founder)b細(xì)胞，并且gc進(jìn)入受限于競(jìng)爭(zhēng)而非絕對(duì)親和力。一種替代方法是設(shè)計(jì)增強(qiáng)所靶向表位的可用性同時(shí)掩蔽脫靶位點(diǎn)的免疫原。這種方法與種系靶向的不同之處在于它與特定種系抗體對(duì)抗原的親和力無(wú)關(guān)。相反，它旨在募集和擴(kuò)增對(duì)靶位點(diǎn)特異的不同組的前體。兩種方法皆旨在產(chǎn)生擴(kuò)增的b細(xì)胞克隆，其隨后可以通過(guò)序貫免疫原而被加強(qiáng)，以指導(dǎo)bnab產(chǎn)生。迄今為止，這些方法均未顯示能在野生型動(dòng)物中擴(kuò)增對(duì)目標(biāo)hiv-1靶標(biāo)特異的b細(xì)胞克隆。

4、因此，迫切需要能夠刺激對(duì)人免疫缺陷病毒(hiv)的免疫應(yīng)答的免疫原，例如通過(guò)擴(kuò)增對(duì)目標(biāo)hiv-1靶標(biāo)特異的b細(xì)胞克隆的方式。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本文件中描述的多個(gè)實(shí)施方案通過(guò)提供hiv免疫原及其用途來(lái)解決上述未滿足的需求和/或其他需求。

2、在一個(gè)方面，本公開涉及一種刺激有此需要的受試者的免疫應(yīng)答(例如，hiv免疫應(yīng)答)的免疫原。該免疫原包含具有與選自由seq?id?no：2、4、6、8、11和13組成的組的序列至少75％同一的序列的多肽。多肽包含在對(duì)應(yīng)于seq?id?no：1的n133、n137和n156的位置的取代。在一個(gè)實(shí)例中，多肽包含n156q取代或n156的保守性取代。在另一個(gè)實(shí)例中，多肽包含v134y、t135a、i138l、t139l、d140s、d141n、t320f、q328m、t415v取代或其保守性取代。

3、上述免疫原以(例如kd約50μm或更小的)親和力與廣泛中和抗體結(jié)合。廣泛中和抗體的實(shí)例可包括10-1074和pgt121廣泛中和抗體。

4、編碼上述多肽的分離的核酸、包含該核酸的載體和包含該核酸的宿主細(xì)胞也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。宿主細(xì)胞可以用于生產(chǎn)多肽的方法中。該方法包括在允許表達(dá)由核酸編碼的多肽的條件下在培養(yǎng)基中培養(yǎng)宿主細(xì)胞，和從培養(yǎng)的細(xì)胞或細(xì)胞的培養(yǎng)基中純化多肽。

5、在另一個(gè)方面，本公開提供了包含至少一種上述多肽的蛋白復(fù)合物和包含至少一種上述多肽的病毒顆粒。

6、在另一個(gè)方面，本公開提供了一種刺激有此需要的受試者的免疫應(yīng)答的免疫原性組合物。該免疫原性組合物包含(i)上述多肽、核酸、宿主細(xì)胞、蛋白復(fù)合物或病毒顆粒；和(ii)藥學(xué)上可接受的載體。該方法可以進(jìn)一步包括施用組合物兩次或更多次。組合物的施用可以導(dǎo)致血清中能夠識(shí)別v3-聚糖表位的廣泛中和抗體的數(shù)量增加。

7、在另一個(gè)方面，本公開提供了一種刺激有此需要的受試者的免疫應(yīng)答的方法。該方法包括向受試者施用有效量的包含上述多肽、核酸、宿主細(xì)胞、蛋白復(fù)合物或病毒樣顆粒(vlp)或其組合的組合物。

8、在另一個(gè)方面，本公開提供了一種治療或預(yù)防有此需要的受試者中的hiv感染的方法。該方法包括向受試者施用治療有效量的上述多肽、核酸、宿主細(xì)胞、蛋白復(fù)合物或病毒顆粒，或其組合。在一些實(shí)施方案中，該方法還可包括向受試者施用治療有效量的抗病毒劑。

9、在另一個(gè)方面，本公開提供了上述多肽、核酸、宿主細(xì)胞、蛋白復(fù)合物或病毒顆?；蚱浣M合在制備用于治療或預(yù)防受試者中的hiv感染的藥物中的用途。

10、在另一個(gè)方面，本公開提供了一種檢測(cè)或分離感染了hiv-1的受試者中的hiv-1結(jié)合抗體的方法。該方法包括：(i)提供上述多肽、核酸、宿主細(xì)胞、蛋白復(fù)合物或病毒顆粒，或其組合；(ii)使免疫原性組合物與一定量的來(lái)自受試者的體液接觸；和(iii)檢測(cè)hiv-1結(jié)合抗體與多肽的結(jié)合，從而檢測(cè)或分離受試者中的hiv-1結(jié)合抗體。

11、在另一個(gè)方面，本公開提供了一種用于刺激受試者的免疫應(yīng)答的試劑盒。該試劑盒包含(i)一個(gè)或多個(gè)單位劑量的上述多肽、核酸、宿主細(xì)胞、蛋白復(fù)合物或病毒顆粒；(ii)施用所述多肽、核酸、宿主細(xì)胞、蛋白復(fù)合物或病毒顆粒的說(shuō)明書；和(iii)任選地，佐劑。

12、本公開還提供了一種分離的抗hiv抗體或其抗原結(jié)合部分，其包含具有與表4、5、6、7、9、10和11中列出的多肽序列至少75％同一的序列的互補(bǔ)決定區(qū)。

13、包含所述分離的抗hiv抗體或其抗原結(jié)合部分，以及藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑的藥物組合物也在本公開范圍內(nèi)。

14、在另一個(gè)方面，本公開提供了一種預(yù)防或治療hiv感染或與hiv相關(guān)的疾病的方法，包括以下步驟：(i)鑒定需要這樣的預(yù)防或治療的患者，和(ii)向所述患者施用包含治療有效量的至少一種上述抗hiv抗體或其抗原結(jié)合部分的第一治療劑。本公開進(jìn)一步提供了一種包含藥學(xué)上可接受的劑量單位的藥學(xué)有效量的至少一種上述分離的抗hiv抗體或其抗原結(jié)合部分的試劑盒。

15、在以下描述中詳述了本發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案。根據(jù)說(shuō)明書和權(quán)利要求書，本發(fā)明的其他特征、目的和優(yōu)點(diǎn)將是顯而易見的。

技術(shù)特征：

1.一種分離的抗hiv抗體或其抗原結(jié)合片段，其包含選自由seq?id?no：22-49和110-283組成的組的重鏈互補(bǔ)決定區(qū)(cdr)3(cdrh3)和選自由seq?id?no：50-95和284-406組成的組的輕鏈cdr3(cdrl3)。

2.如權(quán)利要求1所述的分離的抗hiv抗體或其抗原結(jié)合片段，其結(jié)合具有選自由seq?idno：2、4、6、8、11和13組成的組的氨基酸序列的多肽。

3.如權(quán)利要求2所述的分離的抗hiv抗體或其抗原結(jié)合片段，其包含下述1)至57)的氨基酸序列的任一組：

4.一種藥物組合物，其包含權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的分離的抗hiv抗體或其抗原結(jié)合片段和藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。

5.用于預(yù)防或治療hiv感染或hiv相關(guān)疾病的方法的藥物組合物，其中所述方法包括以下步驟：

6.如權(quán)利要求5所述的藥物組合物，其中所述方法進(jìn)一步包括施用第二治療劑。

7.一種試劑盒，其包括藥學(xué)上可接受的劑量單位的藥學(xué)有效量的至少一種權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的分離的抗hiv抗體或其抗原結(jié)合片段。

技術(shù)總結(jié)
本公開涉及HIV疫苗免疫原，具體而言，半公開提供了HIV免疫原及其在受試者中產(chǎn)生免疫應(yīng)答的用途。還公開了分離抗HIV抗體的方法及其用途。本公開進(jìn)一步提供了使用所公開的HIV免疫原和/或抗體治療或預(yù)防受試者中的人免疫缺陷病毒1型(HIV?1)感染的方法。

技術(shù)研發(fā)人員：米歇爾·努森茲韋格,帕梅拉·J·比約克曼,A·埃斯科拉諾,H·格里斯蒂克
受保護(hù)的技術(shù)使用者：洛克菲勒大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/6