【
技術(shù)領(lǐng)域：
】本發(fā)明涉及醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種β-咔啉化合物及其合成方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：慢性腎臟病以腎功能進行性喪失、細(xì)胞外基質(zhì)(ecm)大量聚積所導(dǎo)致的腎纖維化為特征，主要包括腎小球硬化和小管間質(zhì)纖維化。腎間質(zhì)纖維化幾乎是所有慢性腎臟疾病發(fā)展的最終結(jié)果，與腎功能衰竭進展密切相關(guān)，是導(dǎo)致終末期腎衰竭的主要病因。若早期對腎臟纖維化進行干預(yù)治療，將有助于延緩慢性腎臟病進展，極大減少終末期腎病的發(fā)生率及其并發(fā)癥，減輕其所造成的社會經(jīng)濟負(fù)擔(dān)。研究發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)化生長因子-β(tgf-β)及其介導(dǎo)的smad信號通路在腎間質(zhì)纖維化中起重要作用，被認(rèn)為是最關(guān)鍵、最強的纖維化誘導(dǎo)因子，參與腎纖維化的各個環(huán)節(jié)中。它的過度表達(dá)能夠刺激系膜細(xì)胞、間質(zhì)成纖維細(xì)胞合成大量膠原蛋白(collagen)、纖連蛋白(fn)和層粘連蛋白(ln)，刺激成纖維細(xì)胞增殖并活化成肌成纖維細(xì)胞，促進ecm的分泌與沉積。tgf-β還能介導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞向間質(zhì)細(xì)胞的轉(zhuǎn)分化(emt)。目前臨床上尚無有效的抗腎臟纖維化的治療方法。拮抗tgf-β及其介導(dǎo)的信號通路，抑制ecm合成或促進其降解，可能為尋找治療腎臟纖維化提供一個有效的途徑。β-咔啉類生物堿是從新疆藥用植物駱駝蓬(peganumharmala)中分離出來的一種活性成分。具有廣譜的藥理學(xué)活性，如抗焦慮、抗抑郁、抗痙攣、以及抗腫瘤、抗瘧疾、抗寄生蟲、抗艾滋病等。在中草藥配方中，用駱駝蓬種子來治療癌癥由來已久。β-咔啉類生物堿的結(jié)構(gòu)修飾一直備受科研工作者的關(guān)注。一般認(rèn)為，大多數(shù)β-咔啉類生物堿的平面共軛結(jié)構(gòu)以及不同取代基團(如芐基(-c6h5)、甲氧基(-och3))的存在與其抗腫瘤活性具有顯著關(guān)系。目前對β-咔啉類生物堿的研究主要包括以下幾個方面：一是基于天然產(chǎn)物化學(xué)研究從不同科屬的植物中發(fā)現(xiàn)并進行分離提純；二是通過有機合成方法對β-咔啉類生物堿進行全合成或半合成，對其結(jié)構(gòu)進行修飾。另外則是對其藥理活性(如抗腫瘤活性)進行分子機理研究。如插入dna，抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶、抑制cdk等。但從目前的研究進展來看，β-咔啉類生物堿在天然植物中的含量一般都比較低，而且提取相對比較復(fù)雜，不利于對其進行深入研究，而有機半合成方法在產(chǎn)率上雖具有一定的優(yōu)勢，但受到制取成本的限制，因此目前對β-咔啉類生物堿的拓展研究尚顯不足。該類化合物有著良好的發(fā)展前景，但是目前還未見有1-吡啶-6-甲氧基-9-(4-甲基芐)β-咔啉及其合成和應(yīng)用的相關(guān)報道。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的發(fā)明目的在于：針對上述存在的問題，提供一種β-咔啉化合物及其合成方法和應(yīng)用。本發(fā)明生產(chǎn)過程環(huán)保，生產(chǎn)成本低，操作安全性高，反應(yīng)條件溫和，操作簡單；得到的β-咔啉化合物可用于制備抗腎纖維化藥物和/或抗慢性腎病藥物。為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：一種式i的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：上述式i所示化合物的化學(xué)名稱為：1-吡啶-6-甲氧基-9-(4-甲基芐)β-咔啉。分子量為：379.17。本發(fā)明還提供了所述式i的化合物的合成方法，包括如下步驟：將氫化鈉溶于n，n-二甲基甲酰胺中，然后加入式ⅱ所示化合物1-吡啶-6-甲氧基-β-咔啉和4-甲基芐基溴，于常溫或加熱條件下一鍋反應(yīng)，即得所述式i的化合物。上述合成方法的合成路線如下：上述式i所示化合物合成方法的步驟中，原料1-吡啶-6-甲氧基-β-咔啉和另一原料4-甲基芐基溴的物質(zhì)的量之比通常為1：1.5或1:1，優(yōu)選4-甲基芐基溴的摩爾量稍大于1-吡啶-6-甲氧基-β-咔啉的物質(zhì)的量，以使反應(yīng)充分進行。進一步地，所述反應(yīng)在40℃至有機溶劑的回流溫度下進行。反應(yīng)是否完全可以采用薄層層析(tlc)跟蹤檢測，通?？刂品磻?yīng)時間為20min～2h較合適。反應(yīng)的方式優(yōu)選采用回流反應(yīng)，當(dāng)采用回流反應(yīng)時，反應(yīng)更優(yōu)選在有機溶劑的回流溫度下進行。本發(fā)明所述的合成方法，還包括分離和純化步驟，所述分離和純化為將一鍋反應(yīng)所得產(chǎn)物滴加堿性溶液調(diào)至中性或堿性，用乙酸乙酯或氯仿萃取，收集有機相，除去溶劑，然后采用硅膠柱層析或重結(jié)晶的方式來進行純化；當(dāng)采用硅膠柱層析的方式進行純化時，以體積比為1000：50～500的石油醚和乙酸乙酯組成的洗脫劑進行洗脫，洗脫液除去溶劑，得到純化后的目標(biāo)物。本發(fā)明還提供了所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備抗腎纖維化藥物和/或抗慢性腎病藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，其包括治療有效量的權(quán)利要求1所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽以及藥學(xué)上可接受的輔料。綜上所述，由于采用了上述技術(shù)方案，本發(fā)明的有益效果是：與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供了一種β-咔啉化合物及其合成方法和應(yīng)用。發(fā)明人對本發(fā)明所述化合物的抗腎纖維化、抗慢性腎病活性研究表明，該化合物體外抗腎纖維化活性顯著，具有較好的潛在藥用價值，可用于各種抗腎纖維化、抗慢性腎病藥物的制備?！靖綀D說明】圖1為本發(fā)明實施例1制得的最終產(chǎn)物的核磁共振氫譜圖；圖2為本發(fā)明實施例1制得的最終產(chǎn)物的核磁共振碳譜圖；圖3為本發(fā)明實施例1制得的最終產(chǎn)物的電噴霧質(zhì)譜譜圖；圖4為本發(fā)明實施例1制得的最終產(chǎn)物的細(xì)胞蛋白質(zhì)免疫印跡實驗圖?！揪唧w實施方式】實施例1結(jié)構(gòu)如式i所示化合物的制備1)將200mg(8.3mmol)的nah，溶于1mln，n-二甲基甲酰胺中，攪拌10min，并逐漸加入275mg(1mmol)的1-吡啶-6-甲氧基-β-咔啉，室溫攪拌10min，然后再逐滴加入277.5mg(1.5mmol)的4-甲基芐基溴，常溫繼續(xù)反應(yīng)約20min；反應(yīng)結(jié)束后所得產(chǎn)物用300ml的氨水調(diào)節(jié)至中性，并用乙酸乙酯萃取，收集有機相，減壓除去溶劑，得黃色粉末的粗產(chǎn)物；2)粗產(chǎn)物以石油醚：乙酸乙酯＝1000:100(體積比)組成的溶劑作為洗脫劑，硅膠柱層析，得到淡黃色粉末產(chǎn)物(245mg，產(chǎn)率64.6％，純度99.92％)。對所得淡黃色粉末產(chǎn)物進行核磁表征，其核磁共振氫譜和碳譜分別如圖1和2所示。1hnmr(500mhz，cdcl3)δ8.70–8.65(m，1h)，8.55(d，j＝5.2hz，1h)，8.08(d，j＝5.2hz，1h)，7.71(dd，j＝7.6，1.7hz，1h)，7.66(t，j＝5.1hz，2h)，7.38(d，j＝9.0hz，1h)，7.36–7.32(m，1h)，7.25(dd，j＝9.0，2.5hz，1h)，6.84(d，j＝7.9hz，2h)，6.41(d，j＝8.0hz，2h)，5.46(s，2h)，3.98(s，3h)，2.22(s，3h).13cnmr(126mhz，cdcl3)δ154.44，148.19，138.39，136.76，136.70，134.60，134.09，128.97，125.52，125.36，123.26，121.42，119.28，114.67，111.60，103.22，77.29，77.24，77.04，76.78，56.01，48.58，20.99.對所得淡黃色粉末產(chǎn)物進行質(zhì)譜分析，結(jié)果分別如圖3所示。因此，可確定上述淡黃色粉末產(chǎn)物為：1-吡啶-6-甲氧基-9-(4-甲基芐)β-咔啉，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下式i所示：實施例2結(jié)構(gòu)如式i所示化合物的制備將400mg(16.6mmol)的nah，溶于1mln，n-二甲基甲酰胺中，攪拌10min，并逐漸加入550mg(2mmol)的1-吡啶-6-甲氧基-β-咔啉，室溫攪拌10min，然后再逐滴加入555mg(3mmol)的4-甲基芐基溴，常溫繼續(xù)反應(yīng)約20min；反應(yīng)結(jié)束后所得產(chǎn)物用用400ml氨水調(diào)節(jié)至中性，并用乙酸乙酯萃取，收集有機相，減壓除去溶劑，得黃色油狀液體的粗產(chǎn)物；粗產(chǎn)物以石油醚：乙酸乙酯＝1000:200(體積比)組成的溶劑作為洗脫劑，硅膠柱層析，得到淡黃色粉末產(chǎn)物(470mg，產(chǎn)率62.0％，純度99.91％)。所得淡黃色粉末產(chǎn)物經(jīng)過核磁表征，確定為本發(fā)明所述的1-吡啶-6-甲氧基-9-(4-甲基芐)β-咔啉。實施例3結(jié)構(gòu)如式i所示化合物的制備1)將200mg(8.33mmol)的nah，溶于5mln，n-二甲基甲酰胺中，攪拌10min，并逐漸加入275mg(1mmol)的1-吡啶-6-甲氧基-β-咔啉，室溫攪拌10min，然后再逐滴加入370mg(2mmol)的4-甲基芐基溴，常溫繼續(xù)反應(yīng)約20min；反應(yīng)結(jié)束后所得產(chǎn)物用用400ml氨水調(diào)節(jié)至中性，并用乙酸乙酯萃取，收集有機相，減壓除去溶劑，得黃色油狀液體的粗產(chǎn)物；2)粗產(chǎn)物以石油醚：乙酸乙酯＝1000:50(體積比)組成的溶劑作為洗脫劑，硅膠柱層析，得到淡黃色粉末產(chǎn)物(134mg，產(chǎn)率35.4％，純度99.93％)。所得淡黃色粉末產(chǎn)物經(jīng)過核磁表征，確定為本發(fā)明所述的1-吡啶-6-甲氧基-9-(4-甲基芐)β-咔啉。實施例4結(jié)構(gòu)如式i所示化合物的制備1)將200mg(8.33mmol)的nah，溶于8mln，n-二甲基甲酰胺中，攪拌10min，并逐漸加入275mg(1mmol)的1-吡啶-6-甲氧基-β-咔啉，室溫攪拌10min，然后再逐滴加入185mg(1mmol)的4-甲基芐基溴，常溫繼續(xù)反應(yīng)約20min；反應(yīng)結(jié)束后所得產(chǎn)物用用400ml氨水調(diào)節(jié)至中性，并用乙酸乙酯萃取，收集有機相，減壓除去溶劑，得黃色油狀液體的粗產(chǎn)物；2)粗產(chǎn)物以石油醚：乙酸乙酯＝1000:300(體積比)組成的溶劑作為洗脫劑，硅膠柱層析，得到淡黃色粉末產(chǎn)物(211mg，產(chǎn)率55.7％，純度99.90％)。所得淡黃色粉末產(chǎn)物經(jīng)過核磁表征，確定為本發(fā)明所述的1-吡啶-6-甲氧基-9-(4-甲基芐)β-咔啉。實施例5結(jié)構(gòu)如式i所示化合物的制備1)將200mg(8.33mmol)的nah，溶于10mln，n-二甲基甲酰胺中，攪拌10min，并逐漸加入275mg(1mmol)的1-吡啶-6-甲氧基-β-咔啉，室溫攪拌20min，然后再逐滴加入370mg(2mmol)的4-甲基芐基溴，常溫繼續(xù)反應(yīng)約40min；反應(yīng)結(jié)束后所得產(chǎn)物用用500ml氨水調(diào)節(jié)至中性，并用乙酸乙酯萃取，收集有機相，減壓除去溶劑，得黃色油狀液體的粗產(chǎn)物；2)粗產(chǎn)物以石油醚：乙酸乙酯＝1000:500(體積比)組成的溶劑作為洗脫劑，硅膠柱層析，得到淡黃色粉末產(chǎn)物(127mg，產(chǎn)率33.5％)。所得淡黃色粉末產(chǎn)物經(jīng)過核磁表征，確定為本發(fā)明所述的1-吡啶-6-甲氧基-9-(4-甲基芐)β-咔啉。實施例6結(jié)構(gòu)如式i所示化合物的制備1)將200mg(8.3mmol)的nah，溶于1mln，n-二甲基甲酰胺中，攪拌10min，并逐漸加入275mg(1mmol)的1-吡啶-6-甲氧基-β-咔啉，室溫攪拌10min，然后再逐滴加入277.5mg(1.5mmol)的4-甲基芐基溴，加熱至40℃繼續(xù)反應(yīng)約20min；反應(yīng)結(jié)束后所得產(chǎn)物用350ml的氨水調(diào)節(jié)至堿性，并用氯仿萃取，收集有機相，減壓除去溶劑，得黃色粉末的粗產(chǎn)物；2)粗產(chǎn)物以石油醚：乙酸乙酯＝1000:100(體積比)組成的溶劑作為洗脫劑，硅膠柱層析，得到淡黃色粉末產(chǎn)物(254mg，產(chǎn)率65.2％，純度99.92％)。所得淡黃色粉末產(chǎn)物經(jīng)過核磁表征，確定為本發(fā)明所述的1-吡啶-6-甲氧基-9-(4-甲基芐)β-咔啉1-吡啶-6-甲氧基-9-(4-甲基芐)β-咔啉。實施例7結(jié)構(gòu)如式i所示化合物1-吡啶-6-甲氧基-9-(4-甲基芐)β-咔啉的抗腎纖維化實驗一、1-吡啶-6-甲氧基-9-(4-甲基芐)β-咔啉對大鼠正常腎成纖維細(xì)胞nrk-49f的增殖抑制活性實驗：1、細(xì)胞株與細(xì)胞培養(yǎng)本實驗選用大鼠正常腎成纖維細(xì)胞nrk-49f細(xì)胞株。所用細(xì)胞株培養(yǎng)在含10wt％小牛血清、100u/ml青霉素、100u/ml鏈霉素的dmem/f-12培養(yǎng)液內(nèi)，置37℃含體積濃度5％co2孵箱中培養(yǎng)。2、待測化合物的配制所用的1-吡啶-6-甲氧基-9-(4-甲基芐)β-咔啉為本發(fā)明實施例1制得產(chǎn)物，由柱層析提純所得，純度≥95％。將待測的受試化合物以dmso溶解后，再用直徑d＝0.22μm的微孔濾膜過濾除菌，置于4℃下保存。將其dmso儲液(濃度為0.002mol/l)通過無血清dmem/f-12培養(yǎng)基依次稀釋成五個濃度梯度，分別為20、10、5、2.5、1.25μmol/l，其中助溶劑dmso終濃度≤1％。首先測試不同濃度下的目標(biāo)產(chǎn)物對于nrk-49f細(xì)胞增殖的抑制率，視為初篩結(jié)果；再分別測試不同梯度濃度下目標(biāo)產(chǎn)物對nrk-49f細(xì)胞的增殖抑制程度，用以擬合計算半數(shù)抑制濃度，即ic50值。3、細(xì)胞生長抑制實驗(mtt法)(1)取對數(shù)生長期的細(xì)胞，經(jīng)胰蛋白酶消化后，用含10％小牛血清的培養(yǎng)液配制成濃度為5000個/ml的細(xì)胞懸液，以每孔180μl接種于96孔培養(yǎng)板中，使待測細(xì)胞密度至1000～10000個/孔(邊緣孔用無菌pbs填充)；(2)5％co2，37℃孵育12h，待細(xì)胞貼壁后，換無血清dmem/f-12培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)12h，每孔加入一定濃度梯度的藥物20μl，每個濃度梯度設(shè)5個復(fù)孔；(3)5％co2，37℃孵育48小時，倒置顯微鏡下觀察；(4)每孔加入10μl的mtt溶液(5mg/mlpbs，即0.5％mtt)，繼續(xù)培養(yǎng)4～8h；(5)終止培養(yǎng)，小心吸去孔內(nèi)培養(yǎng)液，每孔加入200μldmso充分溶解甲瓚沉淀，振蕩器混勻后，在酶標(biāo)儀用波長為570nm，參比波長為450nm測定各孔的光密度值；(6)同時設(shè)置調(diào)零孔(培養(yǎng)基、mtt、dmso)，對照孔(細(xì)胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、mtt、dmso)。(7)根據(jù)測得的光密度值(od值)，來判斷活細(xì)胞數(shù)量，od值越大，細(xì)胞活性越強。利用公式：計算化合物對細(xì)胞生長的抑制率。其測試結(jié)果如以下表1所示。表1：化合物在不同濃度下對nrk-49f細(xì)胞株的生長抑制率(％)進一步通過spss軟件對三個濃度梯度的抑制率數(shù)據(jù)進行擬合，求出產(chǎn)物對nrk-49f細(xì)胞株的半數(shù)抑制濃度(ic50值，單位μmol/l)，化合物對于nrk-49f細(xì)胞株的ic50值如表2所示。表2：化合物對nrk-49f細(xì)胞株的ic50值(μm)從體外測試結(jié)果來看，1-吡啶-6-甲氧基-9-(4-甲基芐)β-咔啉對大鼠正常腎成纖維細(xì)胞nrk-49f細(xì)胞株都表現(xiàn)出顯著的增殖抑制活性，用mtt法測得在20、10、5、2.5、1.25μmol/l濃度時抑制率分別為79.88％、57.18％、27.96％、13.11％、0.28％，計算得到ic50值為8.597μm。二、1-吡啶-6-甲氧基-9-(4-甲基芐)β-咔啉對大鼠腎成纖維化細(xì)胞nrk-49f的腎纖維化相關(guān)蛋白的蛋白質(zhì)免疫印跡實驗：本發(fā)明用tgf-β1(2ng/ml)刺激nrk-49f細(xì)胞，建立體外纖維化模型，同時加入不同濃度(4μm，8μm，12μm)的上述(i)所示化合物，共同作用48小時后，將細(xì)胞裂解后抽提蛋白，進行蛋白質(zhì)免疫印跡實驗，分析纖連蛋白(fibronectin，fn)、α-平滑肌肌動蛋白(α-sma)、膠原蛋白ⅰ(collagenⅰ)等蛋白的表達(dá)情況，具體操作如下：1.蛋白提取(1)接種細(xì)胞：選擇收集生長狀態(tài)良好的nrk-49f細(xì)胞，種于直徑為10cm的培養(yǎng)皿，置于37℃，co2濃度為5％的恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)12h，換無血清dmem/f-12培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)12h。(2)給藥：待細(xì)胞貼壁增殖達(dá)對數(shù)生長期時，分別加入2ng/ml的tgf-β1和不同體積、濃度為2×10-3m的化合物ⅰ(由實施例1制得)，充分混合均勻后在恒溫培養(yǎng)箱中孵育48h。(3)收集細(xì)胞：待細(xì)胞給藥處理48h后，用濃度為0.25％胰蛋白酶消化貼壁細(xì)胞，轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，轉(zhuǎn)至離心機，2000rpm離心10min。(4)細(xì)胞裂解：用細(xì)胞裂解液(ripa)：pmsf(苯甲基磺酰氟)＝100:1的體積比分別加入，混勻懸浮細(xì)胞，置于冰上低溫環(huán)境下裂解30～50min。(5)收集蛋白：將裂解好的細(xì)胞懸液低溫4℃，12000r離心10min；上清液用bca蛋白濃度測定試劑盒(增強型)進行蛋白定量，-80℃儲存。2.sds-page電泳(1)濃縮膠與分離膠的制備：根據(jù)實驗需要，配制10％、12％分離膠與5％的濃縮膠。將分離膠灌入垂直玻璃槽中，用蒸餾水進行液封。分離膠凝固后，棄去蒸餾水，再將濃縮膠灌入垂直玻璃槽插入梳子，待膠凝固。待分離膠凝固后，拔出梳子，將垂直電泳裝置放入電泳槽中等待后續(xù)加待測樣品進行電泳。(2)上樣與電泳：取20μg樣品用5×上樣緩沖液按體積比為4:1比例稀釋，沸水浴中加熱5min，冷卻后上樣，在膠板左側(cè)，加入5μl蛋白預(yù)染。加入電泳液，電泳槽灌滿，按濃縮膠60v，60min，分離膠80v，160min進行電泳。(3)轉(zhuǎn)膜：取出玻璃板，將凝膠剝離并浸于轉(zhuǎn)膜緩沖液中平衡10min；根據(jù)彩色預(yù)染蛋白條帶進行切膠。取8張濾紙剪裁成與轉(zhuǎn)膜海綿相同大小，在轉(zhuǎn)膜緩沖液中浸濕備用；取合適孔徑大小(0.45μm或0.22μm)醋酸纖維素膜(pvdf)，剪裁成與切割的page膠相同大小。取8張濾紙剪裁成與轉(zhuǎn)膜海綿相同大小，在轉(zhuǎn)膜緩沖液中浸濕備用；取合適孔徑大小(0.45μm或0.22μm)醋酸纖維素膜(pvdf)，剪裁成與切割的page膠相同大小。將轉(zhuǎn)膜夾放入轉(zhuǎn)膜槽中，加入轉(zhuǎn)膜緩沖液，恒流200ma，進行轉(zhuǎn)膜電泳。待轉(zhuǎn)膜結(jié)束，可用考馬斯亮藍(lán)染膠，用麗春紅染液染膜，檢測轉(zhuǎn)膜效果；pvdf膜用清水洗過后，進行下一步操作。(4)免疫反應(yīng)：待轉(zhuǎn)膜結(jié)束，pvdf膜用pbs漂洗后再用快速封閉液封閉30min。pbst漂洗5min，轉(zhuǎn)至按適當(dāng)比例配置的一抗纖連蛋白(fibronectin，fn)、α-平滑肌肌動蛋白(α-sma)、膠原蛋白ⅰ(collagenⅰ)和膠原蛋白ⅲ(col3a1))溶液中，4℃孵育過夜。用二抗稀釋液稀釋二抗，室溫下在脫色搖床上孵育約1h，用pbst和pbs漂洗后進行化學(xué)發(fā)光反應(yīng)。(5)化學(xué)發(fā)光：取化學(xué)發(fā)光試劑(superecl超敏發(fā)光液，普利萊基因技術(shù)有限公司)，與膜蛋白面充分接觸，在化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)上顯影。實驗結(jié)果如圖4所示。從抗腎纖維化測試結(jié)果來看，1-吡啶-6-甲氧基-9-(4-甲基芐)β-咔啉可顯著抑制tgf-β1誘導(dǎo)的nrk-49f細(xì)胞的fn、α-sma、collageni的表達(dá)，且呈劑量依賴關(guān)系，表明該化合物體外抗腎纖維化活性顯著，具有較好的潛在藥用價值，可用于各種抗腎纖維化、抗慢性腎臟病藥物的制備。實施例10藥物組合物本發(fā)明提供的式i所示化合物15％淀粉40％微晶纖維素25％羧甲基淀粉納19％硬脂酸鎂1％以上藥物和輔料粉碎后過篩，混合即得。實施例11藥物組合物本發(fā)明提供的式i所示化合物8％淀粉47％微晶纖維素22％羧甲基淀粉納20％硬脂酸鎂3％以上藥物和輔料粉碎后過篩，混合即得。實施例11藥物組合物本發(fā)明提供的式i所示化合物15％淀粉40％微晶纖維素25％羧甲基淀粉納19％硬脂酸鎂1％以上藥物和輔料粉碎后過篩，混合后于壓片機上壓片，即得。實施例11藥物組合物本發(fā)明提供的式i所示化合物15％干淀粉65％硬脂酸鎂20％以上藥物和輔料粉碎后過篩，混合后填充入硬明膠膠囊中，即得。實施例12藥物組合物本發(fā)明提供的式i所示化合物1％氯化鈉1％注射用水98％將本發(fā)明提供的化合物加氯化鈉及適量注射用水，攪拌均勻，加入0.1％針用活性炭，吸附，過濾脫碳，補加注射用水至規(guī)定量，微孔過濾膜過濾，按1ml/支灌封，100℃濕熱滅菌20min，經(jīng)燈檢合格，即得。實施例13藥物組合物本發(fā)明提供的式i所示化合物0.1％乙醇0.4％氯化鈉0.1％甘露醇0.6％注射用水99％將本發(fā)明提供的化合物加乙醇攪拌溶解，加氯化鈉、甘露醇及適量注射用水，攪拌均勻，加入0.1％針用活性炭，吸附，過濾脫碳，補加注射用水至規(guī)定量，微孔過濾膜過濾，按4ml/支分裝，冷凍干燥，封裝，經(jīng)檢驗合格，即得。上述說明是針對本發(fā)明較佳可行實施例的詳細(xì)說明，但實施例并非用以限定本發(fā)明的專利申請范圍，凡本發(fā)明所提示的技術(shù)精神下所完成的同等變化或修飾變更，均應(yīng)屬于本發(fā)明所涵蓋專利范圍。當(dāng)前第1頁12