本發(fā)明屬于創(chuàng)新藥物合成技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及N-甲基依諾沙星醛縮氨基硫脲類衍生物，同時還涉及N-甲基依諾沙星醛縮氨基硫脲類衍生物的制備方法，以及其在抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

新藥創(chuàng)新起源于先導(dǎo)物的發(fā)現(xiàn)，而基于優(yōu)勢藥效團(tuán)骨架的拼合構(gòu)建先導(dǎo)物分子是最經(jīng)濟和有效的策略。由醛或酮與氨基硫脲類構(gòu)建的縮氨基硫脲類衍生物因其與大分子或金屬離子易產(chǎn)生配合物或螯合作用而表現(xiàn)出廣泛的藥理活性備受關(guān)注。然而，構(gòu)建縮氨基硫脲分子的醛或酮多為常見的苯類或雜環(huán)芳香類的醛和酮，而對萘啶醛，尤其是氟萘啶酮醛類形成的縮氨基硫脲類目前尚未見報道。另一方面，萘啶作為喹啉的等排體，不僅是重要天然產(chǎn)物生物堿類的重要藥效團(tuán)結(jié)構(gòu)單元，也是抗菌氟喹諾酮類藥物的藥效團(tuán)骨架。同時，氟萘啶酮類藥物因有親水性的哌嗪基存在而增大其水溶性，提高生物利用度。尤其是氟萘啶酮類藥物的作用靶點—拓?fù)洚悩?gòu)酶也是抗腫瘤藥物的重要作用靶點，可將其抗菌活性轉(zhuǎn)化為抗腫瘤活性。為此，將氟萘啶酮C-3羧基轉(zhuǎn)化為甲酰基形成相應(yīng)的氟萘啶酮C-3醛，然后與氨基硫脲類縮合，進(jìn)而實現(xiàn)喹啉骨架與縮氨基硫脲藥效團(tuán)間的拼合，以期達(dá)到不同結(jié)構(gòu)藥效團(tuán)間的活性疊加，從中發(fā)現(xiàn)具有抗腫瘤活性的氟喹諾酮候選化合物。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

為此，本發(fā)明的目的是提供N-甲基依諾沙星醛縮氨基硫脲類類衍生物，具有抗腫瘤的作用和功效，同時提供N-甲基依諾沙星醛縮氨基硫脲類衍生物的制備方法。

為了實現(xiàn)以上目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：

N-甲基依諾沙星醛縮氨基硫脲類衍生物，具有如下式(I)的結(jié)構(gòu)通式：

式(I)中，R為氫原子或含1～5個碳原子的烴基。

上述的N-甲基依諾沙星醛縮氨基硫脲類衍生物，具體為以下典型結(jié)構(gòu)的化合物：

上述的N-甲基依諾沙星醛縮氨基硫脲類衍生物的制備方法，具體制備步驟包括：

(1)以式(II)所示的依諾沙星為原料，經(jīng)甲基化反應(yīng)制得式(III)所示的N-甲基依諾沙星；

(2)將式(III)所示的N-甲基依諾沙星經(jīng)肼解反應(yīng)制得式(IV)所示的N-甲基依諾沙星酰肼；再將式(IV)所示的N-甲基依諾沙星酰肼進(jìn)行酰肼基的氧化反應(yīng)，經(jīng)后處理可得式(V)所示的N-甲基依諾沙星醛；

(3)將式(V)所示的N-甲基依諾沙星醛與式(VI)所示的肼基二硫代甲酸甲酯進(jìn)行縮合反應(yīng)，經(jīng)后處理可得式(VII)所示的N-甲基依諾沙星醛縮肼基二硫代甲酸甲酯；

(4)將式(VII)所示的N-甲基依諾沙星醛縮肼基二硫代甲酸甲酯與胺類化合物進(jìn)行親核取代反應(yīng)，得式(I)所示的N-甲基依諾沙星醛縮氨基硫脲類衍生物；或?qū)⑹?V)所示的N-甲基依諾沙星醛與氨基硫脲進(jìn)行縮合反應(yīng)，得式(I)所示的N-甲基依諾沙星醛縮氨基硫脲類衍生物；

上述的N-甲基依諾沙星醛縮氨基硫脲類衍生物的制備方法，

步驟(2)中，酰肼基的氧化反應(yīng)的方法是：將式(IV)所示的N-甲基依諾沙星酰肼與鐵氰化鉀在氯仿和濃氨水的混合溶劑中常溫反應(yīng)；

其中，式(IV)所示的N-甲基依諾沙星酰肼與鐵氰化鉀的摩爾比為1:3.0～5.0。

上述的N-甲基依諾沙星醛縮氨基硫脲類衍生物的制備方法，步驟(4)中，式(VI)所示的N-甲基依諾沙星醛縮肼基二硫代甲酸甲酯5與胺類化合物的摩爾比為1:3.0～10.0。

上述的N-甲基依諾沙星醛縮氨基硫脲類衍生物的制備方法，所述胺類化合物為伯胺類化合物。

上述的N-甲基依諾沙星醛縮氨基硫脲類衍生物的制備方法，所述伯胺類化合物為甲胺、乙胺、異丙胺、環(huán)丙胺、叔丁胺、正丁胺或正戊胺。

上述的N-甲基依諾沙星醛縮氨基硫脲類衍生物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。

上述的N-甲基依諾沙星醛縮氨基硫脲類衍生物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，所述抗腫瘤藥物為治療胰腺癌、肝癌或白血病的藥物。

本發(fā)明的有益效果如下：

本發(fā)明所述N-甲基依諾沙星醛縮氨基硫脲類衍生物基于藥效團(tuán)的拼合原理，將氟萘啶酮、亞胺席夫堿及硫脲等三種不同藥效團(tuán)間的有效組合，進(jìn)而設(shè)計了N-甲基依諾沙星醛縮氨基硫脲類衍生物，實現(xiàn)了不同結(jié)構(gòu)藥效團(tuán)的互補和活性的疊加，從而達(dá)到了增效降毒的效果，可作為全新結(jié)構(gòu)的抗腫瘤藥物開發(fā)。

具體實施方式

本發(fā)明所述N-甲基依諾沙星醛縮氨基硫脲類衍生物的制備方法，以式(II)所示的依諾沙星為原料制備而成，

具體制備步驟如下：

1)將式(II)所示的依諾沙星與甲酸和甲醛發(fā)生哌嗪的甲基化反應(yīng)制得式(III)所示N-甲基依諾沙星；

具體操作步驟為：將式(II)所示的依諾沙星(50g,156.0mmol)溶于85％的甲酸(300mL)和37％的甲醛(19.0g,234.0mmol)混合溶劑中，回流反應(yīng)6小時，反應(yīng)結(jié)束后，減壓蒸除溶劑，加水(300mL)溶解，用活性炭(2.0g)回流脫色1小時，過濾，所得濾液用濃氨水(濃氨水濃度為22％～25％，下同)調(diào)中性，放置析出固體，過濾并收集固體，所得固體用去離子水洗滌3次，干燥，得黃色結(jié)晶，結(jié)構(gòu)式如式(III)，產(chǎn)率91.8％，m.p.174～176℃；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:15.56(s,1H,COOH),8.95(s,1H,2-H),8.14(d,1H,5-H),4.62(q,2H,NCH₂CH₃),3.57～3.13(m,8H,piperazine-H),2.32(s,3H,N-CH₃),1.46(t,3H,CH₃)；

MS(m/z):Calcd.for C₁₆H₁₉FN₄O₃:334.35[M]⁺；Found:335[M+H]⁺。

2)將式(III)所示的N-甲基依諾沙星與水合肼發(fā)生肼解反應(yīng)制得式(IV)所示N-甲依諾沙星酰肼；

具體操作步驟為：將式(III)所示的N-甲基依諾沙星(20g,60.0mmol)溶于85％的水合肼(50mL)和無水乙醇(200mL)的混合溶劑中，回流反應(yīng)12小時，反應(yīng)結(jié)束后，減壓蒸除溶劑，加水無水乙醇(100mL)和活性炭(1.0g)回流脫色1小時，過濾，濾液放置析出固體，過濾并收集固體，所得固體用無水乙醇洗滌2次，干燥，得黃色結(jié)晶，結(jié)構(gòu)式如式(IV)，產(chǎn)率72.3％，m.p.164～166℃；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:11.68(s,1H,CONH),8.93(s,1H,2-H),8.12(d,1H,5-H),5.46(s,2H,NH₂),4.58(q,2H,NCH₂CH₃),3.55～3.18(m,8H,piperazine-H),2.30(s,3H,N-CH₃),1.47(t,3H,CH₃)；

MS(m/z):Calcd.for C₁₆H₂₁FN₆O₂:348.38[M]⁺；Found:349[M+H]⁺。

3)將式(IV)所示N-甲基依諾沙星酰肼與鐵氰化鉀在氯仿和濃氨水(濃氨水的濃度為22％～25％，下同)的混合溶劑中常溫反應(yīng)8～12小時，分出有機層，用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸除溶劑，制得式(V)所示的N-甲基依諾沙星C-3醛粗品，直接用于下步反應(yīng)。

具體操作步驟為：將式(IV)所示N-甲基依諾沙星酰肼(10.0g，29.0mmol)懸浮于氯仿(200毫升)與濃氨水(20毫升)的混合溶劑中，常溫慢慢滴加鐵氰化鉀(38.0g，115.0mmol)的水(120毫升)溶液，常溫攪拌反應(yīng)8～10小時至原料消失(TLC檢測，V_氯仿：V_甲醇＝5:1)，反應(yīng)結(jié)束后，分出有機層，用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸除溶劑，得式(V)所示的N-甲基依諾沙星C-3醛粗品備用。

4)將水合肼與二硫化碳在堿性介質(zhì)中縮合后與硫酸二甲酯反應(yīng)制得式(VI)所示的肼基二硫代甲酸甲酯中間體；具體操作步驟可參考文獻(xiàn)(胡惟孝，等，縮氨基硫脲化合物的合成及其抗癌活性的研究，高等學(xué)校化學(xué)學(xué)報，2001，22(12)：2014-2017)；

5)將式(V)所示的N-甲基依諾沙星C-3醛粗品(10.0g)溶于無水乙醇(150毫升)中，加式(VI)所示的肼基二硫代甲酸甲酯(3.9g，32.0mmol)，回流反應(yīng)10小時，放置冷卻至室溫，濾集產(chǎn)生的固體，干燥，然后用體積比為3:1的甲醇-氯仿混合溶劑重結(jié)晶，得式(VII)所示N-甲基依諾沙星醛縮肼基二硫代甲酸甲酯，呈淡黃色結(jié)晶，結(jié)構(gòu)式如式(VII)所示，質(zhì)量為10.4g,m.p.226～228℃；

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：11.72(s,1H,CH＝N),8.95(s,1H，2-H)，8.52(s,1H,NH),8.17(d,1H,5-H),4.57(q,2H,CH₂),3.55～3.16(m,8H,piperazine-H),2.33(s,3H,N-CH₃),2.16(s,3H,SCH₃),1.48(t,3H,CH₃)；

MS(m/z):Calcd.for C₂₂H₂₈FN₆OS₂:422.55[M]⁺；Found:423[M+H]⁺。

6)將式(VII)所示的N-甲基依諾沙星醛縮肼基二硫代甲酸甲酯與胺類化合物在正丁醇中進(jìn)行親核取代反應(yīng)，或式(V)所示的N-甲基依諾沙星C-3醛粗品與氨基硫脲在乙醇中進(jìn)行縮合反應(yīng)，待反應(yīng)完全后經(jīng)處理得式(I)所示的N-甲基依諾沙星醛縮氨基硫脲類衍生物，其制備的具體操作步驟詳見實施例部分。

步驟5)中，所用的溶劑除正丁醇外，還可選用甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇或異丁醇，其中優(yōu)選乙醇或正丁醇。

實施例1

1-乙基-6-氟-7-(4-甲基-哌嗪-1-基)-萘啶-4(1H)-酮-3-醛縮氨基硫脲(I-1)，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：

即式I中的R為氫原子。

該化合物的制備方法為：取式(V)所示N-甲基依諾沙星C-3醛粗品(1.0g)溶于無水乙醇(20毫升)，加入氨基硫脲(0.5g,5.5mmol)，回流反應(yīng)10小時，趁熱過濾并收集固體，所得固體依次用乙醇洗滌2次，蒸餾水洗滌2次，干燥，用體積比為5:3的DMF-乙醇混合溶劑重結(jié)晶，制得淡黃色結(jié)晶，結(jié)構(gòu)式如式(I-1)所示，質(zhì)量為0.64g，m.p.256～258℃；

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ:11.78(s,1H,CH＝N),9.06(s,1H，2-H)，8.56(s,1H,NH),8.47(s,1H,NH₂),8.40(s,1H,NH₂),8.16(d,1H，5-H)，4.64(q,2H,CH₂),3.53～3.15(m,8H，piperazine-H)，2.32(s,3H，N-CH₃)，1.46(t,3H,CH₃)；

MS(m/z)：Calcd.for C₁₇H₂₂FN₇OS：391.47[M]⁺；Found：392[M+H]⁺。

實施例2

1-乙基-6-氟-7-(4-甲基-哌嗪-1-基)-萘啶-4(1H)-酮-3-醛縮4-甲氨基硫脲(I-2)，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：

即式I中的R為甲基。

該化合物的制備方法為：取式(VII)所示的N-甲基依諾沙星醛縮肼基二硫代甲酸甲酯(1.0g,2.40mmol)溶于無水正丁醇(20毫升)中，加入甲胺(0.74g,24.0mmol)后，回流反應(yīng)12小時，趁熱過濾并收集固體，所得固體依次用乙醇洗滌2次，蒸餾水洗滌2次，干燥，用體積比為1:5的DMF-乙醇混合溶劑重結(jié)晶，制得黃色結(jié)晶，結(jié)構(gòu)式如式(I-2)，質(zhì)量為0.53g，m.p.238～240℃；

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ:11.78(s,1H,CH＝N),9.05(s,1H，2-H)，8.54(s,1H,NH),8.38(s,1H,NH),8.16(d,1H，5-H)，4.56(q,2H,CH₂),3.58～3.18(m,11H，piperazine-H and CH₃)，2.34(s,3H，N-CH₃)，1.47(t,3H,CH₃)；

MS(m/z)：Calcd.for C₁₈H₂₄FN₇OS：405.50[M]⁺；Found：406[M+H]⁺。

實施例3

1-乙基-6-氟-7-(4-甲基-哌嗪-1-基)-萘啶-4(1H)-酮-3-醛縮4-乙氨基硫脲(I-3)，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：

即式I中的R為乙基。

該化合物的制備方法為：取式(VII)所示的N-甲基依諾沙星醛縮肼基二硫代甲酸甲酯(1.0g,2.40mmol)溶于溶于無水正丁醇(20毫升)中，加入乙胺(1.08g,24.0mmol)后混合反應(yīng)物回流反應(yīng)12小時，趁熱過濾并收集固體，所得固體依次用乙醇洗滌2次，蒸餾水洗滌2次，干燥，用體積比為1:5的DMF-乙醇混合溶劑重結(jié)晶，制得黃色結(jié)晶，結(jié)構(gòu)式如式(I-3)，質(zhì)量為0.48g，m.p.232～234℃；

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ:11.78(s,1H,CH＝N),9.04(s,1H，2-H)，8.53(s,1H,NH),8.37(s,1H,NH),8.15(d,1H，5-H)，4.56(q,2H,CH₂),3.55～3.16(m,10H，piperazine-H and CH₂)，2.33(s,3H，N-CH₃)，1.47～1.35(m,6H,2×CH₃)；

MS(m/z)：Calcd.for C₁₉H₂₆FN₇OS：419.53[M]⁺；Found：420[M+H]⁺。

實施例4

1-乙基-6-氟-7-(4-甲基-哌嗪-1-基)-萘啶-4(1H)-酮-3-醛縮(4-異丙基)氨基硫脲(I-4)，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：

即式I中的R為異丙基。

該化合物的制備方法為：取式(VII)所示的N-甲基依諾沙星醛縮肼基二硫代甲酸甲酯(VI)(1.0g，2.40mmol)溶于無水正丁醇(25毫升)中，加入異丙胺化合物(1.00g,17.0mmol)，回流反應(yīng)10h，放置冷卻至室溫，濾集產(chǎn)生的固體，所得固體依次用無水乙醇洗滌2次，蒸餾水洗滌2次，干燥，用體積比為1:5的DMF-乙醇混合溶劑重結(jié)晶，得淡黃色結(jié)晶，結(jié)構(gòu)式如式(I-4)，質(zhì)量為0.51g，m.p.226～228℃；

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ:11.78(s,1H,CH＝N),9.04(s,1H，2-H)，8.54(s,1H,NH),8.36(s,1H,NH),8.15(d,1H，5-H)，4.56(q,2H,CH₂),3.55～3.26(m,9H，piperazine-H and CH)，2.33(s,3H，N-CH₃)，1.47～1.13(m,9H,3×CH₃)；

MS(m/z)：Calcd.for C₂₀H₂₈FN₇OS：433.55[M]⁺；Found：434[M+H]⁺。

實施例5

1-乙基-6-氟-7-(4-甲基-哌嗪-1-基)-萘啶-4(1H)-酮-3-醛縮(4-環(huán)丙基)氨基硫脲(I-5)，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：

即式I中的R為環(huán)丙基。

該化合物的制備方法為：取式(VII)所示的N-甲基依諾沙星醛縮肼基二硫代甲酸甲酯(VI)(1.0g，2.40mmol)溶于無水正丁醇(25毫升)中，加入環(huán)丙胺化合物(0.97g,17.0mmol)，回流反應(yīng)12h，放置冷卻至室溫，濾集產(chǎn)生的固體，所得固體依次用無水乙醇洗滌2次，蒸餾水洗滌2次，干燥，用體積比為1；5的DMF-乙醇混合溶劑重結(jié)晶，制得淡黃色結(jié)晶，結(jié)構(gòu)式如式(I-5)，質(zhì)量為0.66g，m.p.236～238℃；

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ:11.78(s,1H,CH＝N),9.12(s,1H，2-H)，8.57(s,1H,NH),8.48(s,1H,NH),8.17(d,1H，5-H)，4.58(q,2H,CH₂),3.65～3.26(m,9H，piperazine-H and CH)，2.34(s,3H，N-CH₃)，1.48～1.02(m,7H,CH₃and CH₂CH₂)；

MS(m/z)：Calcd.for C₂₀H₂₆FN₇OS：431.54[M]⁺；Found：432[M+H]⁺。

實施例6

1-乙基-6-氟-7-(4-甲基-哌嗪-1-基)-萘啶-4(1H)-酮-3-醛縮(4-叔丁基)氨基硫脲(I-6)，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：

即式I中的R為叔丁基。

該化合物的制備方法為：取1-乙基-6-氟-7-(4-甲基-哌嗪-1-基)-萘啶-喹啉-4(1H)-酮-3-醛縮肼基二硫代甲酸甲酯(VII)1.0g(2.40mmol)溶于無水正丁醇(25毫升)中，加入叔丁胺化合物(0.88g,12.0mmol)，混合反應(yīng)物回流反應(yīng)10h，放置冷卻至室溫。濾集產(chǎn)生的固體，固體依次用乙醇洗滌2次，蒸餾水洗滌2次，干燥，用體積比為1:5的DMF-乙醇混合溶劑重結(jié)晶，得淡黃色結(jié)晶，結(jié)構(gòu)式如式(I-6)，質(zhì)量為0.63g，m.p.227～229℃；

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ:11.78(s,1H,CH＝N),9.10(s,1H，2-H)，8.55(s,1H,NH),8.42(s,1H,NH),8.15(d,1H，5-H)，4.57(q,2H,CH₂),3.53～3.26(m,8H，piperazine-H)，2.33(s,3H，N-CH₃)，1.47～1.32(m,12H,4×CH₃)；

MS(m/z)：Calcd.for C₂₁H₃₀FN₇OS：447.58[M]⁺；Found：448[M+H]⁺。

實施例7

1-乙基-6-氟-7-(4-甲基-哌嗪-1-基)-萘啶-4(1H)-酮-3-醛縮(4-正丁基)氨基硫脲(I-7)，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：

即式I中的R為正丁基。

該化合物的制備方法為：取1-乙基-6-氟-7-(4-甲基-哌嗪-1-基)-萘啶-4(1H)-酮-3-醛縮肼基二硫代甲酸甲酯(VII)1.0g(2.40mmol)溶于無水正丁醇(25毫升)中，加入正丁胺化合物(0.73g,10.0mmol)，回流反應(yīng)10h，放置冷卻至室溫，濾集產(chǎn)生的固體，所得固體依次用乙醇洗滌2次，蒸餾水洗滌2次，干燥，用體積比為5:3的DMF-乙醇混合溶劑重結(jié)晶，制得淡黃色結(jié)晶，結(jié)構(gòu)式如式(I-7)，質(zhì)量為0.58g，m.p.216～218℃；

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ:11.78(s,1H,CH＝N),9.07(s,1H，2-H)，8.52(s,1H,NH),8.44(s,1H,NH),8.16(d,1H，5-H)，4.56(q,2H,CH₂),3.52～3.15(m,10H，piperazine-H and CH₂)，2.33(s,3H，N-CH₃)，1.46～0.83(m,10H,CH₃and CH₂CH₂CH₃)；

MS(m/z)：Calcd.for C₂₁H₃₀FN₇OS：447.58[M]⁺；Found：448[M+H]⁺。

實施例8

1-乙基-6-氟-7-(4-甲基-哌嗪-1-基)-萘啶-4(1H)-酮-3-醛縮(4-正戊基)氨基硫脲(I-8)，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：

即式I中的R為正戊基。

該化合物的制備方法為：取1-乙基-6-氟-7-(4-甲基-哌嗪-1-基)-萘啶-4(1H)-酮-3-醛縮肼基二硫代甲酸甲酯(VII)1.0g(2.40mmol)溶于無水正丁醇(25毫升)中，加入正戊胺化合物(0.74g,8.5mmol)，回流反應(yīng)8h，放置冷卻至室溫，濾集產(chǎn)生的固體，所得固體依次用乙醇洗滌2次，蒸餾水洗滌2次，干燥，用體積比為1:5的DMF-乙醇混合溶劑重結(jié)晶，得淡黃色結(jié)晶，結(jié)構(gòu)式如式(I-8)，質(zhì)量為0.60g，m.p.207～209℃；

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ:11.78(s,1H,CH＝N),9.07(s,1H，2-H)，8.52(s,1H,NH),8.43(s,1H,NH),8.14(d,1H，5-H)，4.56(q,2H,CH₂),3.52～3.06(m,10H，piperazine-H and CH₂)，2.33(s,3H，N-CH₃)，1.46～0.72(m,12H,CH₃and CH₂CH₂CH₂CH₃)；

MS(m/z)：Calcd.for C₂₂H₃₂FN₇OS：461.61[M]⁺；Found：462[M+H]⁺。

試驗例

一、實施例1-8提供的N-甲基依諾沙星醛縮氨基硫脲類衍生物的體外抗腫瘤活性測定

1、供試樣品

以實施例1-8提供的N-甲基依諾沙星醛縮氨基硫脲類衍生物，及經(jīng)典抗腫瘤TOPO抑制劑10-羥基喜樹堿(HC)和依諾沙星(EX)為供試樣品，共10種，其中HC和EX為對照組，實施例1-8樣品為實驗組；

實驗癌細(xì)胞株分別為人肝癌Hep-3B細(xì)胞、人胰腺癌Panc-1細(xì)胞和人白血病HL60細(xì)胞株，均購自中國科學(xué)院上海細(xì)胞庫。

正常細(xì)胞采用非洲綠猴腎細(xì)胞(VERO細(xì)胞)，購買于上海通派生物科技有限公司。

2、測定方法

測定方法的具體步驟為：

(1)首先將上述10種供試樣品分別用二甲基亞砜(DMSO)溶解，配制成1.0×10^-2mol·L^-1濃度的儲備液，之后用質(zhì)量百分比濃度為10％的小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液(購自百靈威科技有限公司)將儲備液稀釋成具有5個濃度梯度(0.1、1.0、5.0、10.0、50.0，單位均為μmol·L^-1)的工作液；

(2)取對數(shù)生長期的人肝癌Hep-3B細(xì)胞、人胰腺癌Panc-1細(xì)胞和人白血病HL60細(xì)胞及VERO細(xì)胞株，以每孔6000個細(xì)胞接種于96孔板，隨后分別加入上述10種樣品的具有5個濃度梯度的工作液，培養(yǎng)48小時后每孔加入5g·L^–1MTT(噻唑藍(lán))溶液10μL，繼續(xù)培養(yǎng)4小時后加入100μL質(zhì)量百分比濃度為10％的十二烷基硫酸鈉(SDS)溶液再培養(yǎng)24小時，然后用酶標(biāo)儀在570nm波長處測定各自的吸光度(OD)值，每個數(shù)據(jù)平行測定三次，求其平均值；

(3)按下述所示公式計算不同濃度的供試樣品對癌細(xì)胞的抑制率，

癌細(xì)胞抑制率＝[(1－實驗組OD值)/對照組OD值]×100％，

然后以供試樣品的各濃度的對數(shù)值對各濃度對應(yīng)的癌細(xì)胞抑制率作線性回歸，得到劑量-效應(yīng)方程，從所得劑量-效應(yīng)方程計算出各供試樣品對實驗癌細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度(IC₅₀)，結(jié)果見表1所示。

表1各供試樣品的抗腫瘤活性(IC₅₀)

從表1可以看出，實施例1-8提供的化合物對3種實驗癌細(xì)胞的生長抑制活性顯著強于母體化合物依諾沙星(EX)的活性，尤其式I中的取代基R為較小取代基或環(huán)丙基時，對人胰腺癌Panc-1細(xì)胞的抑制活性與10-羥基喜樹堿(HC)的活性相當(dāng)，其IC₅₀值已達(dá)到微摩爾濃度。更有意義的是，實施例1-8提供的化合物對正常VERO細(xì)胞顯示出較低的毒性，表明對腫瘤細(xì)胞具有較強的選擇性，具有成藥性的開發(fā)潛力和新藥研發(fā)的價值。按照藥物開發(fā)的一般途徑是先進(jìn)行常規(guī)的抗腫瘤體外篩選，然后進(jìn)行針對性的研究，因此，鑒于本發(fā)明的化合物具有強的抗腫瘤活性和較低的毒性，可通過與人體可接受的酸成鹽或與藥用載體混合制備抗腫瘤藥物。

最后所應(yīng)說明的是：上述實施例僅用于說明而非限制本發(fā)明的技術(shù)方案，任何對本發(fā)明進(jìn)行的等同替換及不脫離本發(fā)明精神和范圍的修改或局部替換，其均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明權(quán)利要求保護(hù)的范圍之內(nèi)。