本發(fā)明涉及化工技術(shù)領(lǐng)域，具體來說涉及一種噻二唑硫醚類楊梅素衍生物的其制備方法，以及在抑制植物病毒方面的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

在農(nóng)作物中煙草花葉病具有發(fā)病率高和防治困難的特點(diǎn)，被列為最具破壞性的植物病毒之一。然而，迄今為止所有已商品化的植物抗病毒劑在500μg/mL濃度下對植物病毒的治療活性僅僅為30～50％，其抑制結(jié)果顯然不盡人意。因此，如何開發(fā)出新型、高效和對環(huán)境友好的植物抗病毒劑依舊是擺在藥物創(chuàng)制工作者面前的一個重要挑戰(zhàn)。

楊梅素屬于天然產(chǎn)物中黃酮醇類化合物，在自然界中分布較為廣泛，其本身具有抑菌、抗病毒、抗腫瘤、抗氧化等生物活性，并且對環(huán)境友好等特點(diǎn)，受到廣泛科研工作者的青睞，現(xiàn)主要應(yīng)用在醫(yī)藥方面，而在農(nóng)藥方面研究較少?，F(xiàn)以楊梅素為先導(dǎo)化合物，取代芐氯、烷基、氯乙酸乙酯、二硫化碳為原料，合成一系列含噻二唑類楊梅素衍生物，并測試其抗病毒活性。

1990年，Ono等(Ono,K.；Nakane,H.；Fukushima,M.；Chermann,J.C.；Barre-Sinoussi,F.,Differential inhibitory effects of various flavonoids on the activities of reverse transcriptase and cellular DNA and RNA polymerases[J].European Journal of Biochemistry,1990,190(3):469-476)研究了楊梅素對勞舍爾鼠白血病毒、人類免疫缺陷病毒和莫洛尼氏鼠白血病毒的作用機(jī)制，研究表明：楊梅素對逆轉(zhuǎn)錄酶、DNA及RNA聚合酶具有有效的抑制作用。

2009年，齊娜等(齊娜,李瑛琦,劉廣,于治國.楊梅黃素的體外抑菌活性[J].華西藥學(xué)雜志,2008,23,681-682)研究了評價(jià)楊梅素的體外抑菌活性，主要以管碟法測定楊梅黃素對4種實(shí)驗(yàn)菌株的抑菌效果、以兩倍稀釋法測定楊梅黃素的最小抑菌濃度(MIC)，并與相同實(shí)驗(yàn)條件下鹽酸小檗堿、魚腥草素、黃芩苷的抑菌效果進(jìn)行比較；研究培養(yǎng)菌液的濃度對楊梅黃素抑菌作用的影響，結(jié)果表明:楊梅黃素對實(shí)驗(yàn)病株有較好的體外抑制作用，其作用較黃芩苷強(qiáng)；病菌液濃度增高，MIC隨之增高。

2012年，Yu等(Yu,M.S.；Lee,J.；Lee,J.M.；Kim,Y.；Chin,Y.W.；Jee,J.G.；Keum,Y.S.；Jeong,Y.J.Identification ofmyricetin and scutellarein as novel chemical inhibitors of the SARS coronavirus helicase,nsP13[J].Bioorganic&medicinal chemistry letters,2012,22:4049-4054)研究了楊梅素對體外SARS病毒作用的研究，研究表明：楊梅素對體外SARS病毒有有效的抑制作用。

2015年，吳月嬋(吳月禪.新型楊梅素衍生物的合成及其應(yīng)用功能研究[D].浙江大學(xué).)合成了一系列新型楊梅素衍生物，并測試其所合成的化合物和楊梅素對蠟狀芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、白菜軟腐病菌和大腸桿菌抑菌活性，其測試結(jié)果表明：楊梅素極其衍生物對以上6種細(xì)菌都有不同程度的抑制作用，其中MY-OR6的MIC范圍為1.95-31.25μg/mL，表現(xiàn)出廣譜的抑菌活性，其抑菌活性是楊梅素的2-8倍，陽性對照藥氨芐青霉素的2-12倍。

2015年，薛偉(Wei Xue,Bao-An Song,Hong-Ju Zhao；et al.Novel myricetin derivatives:Design,synthesis and anticancer activity[J].European Journal of Medicinal Chemistry,2015,97:155-163.)報(bào)道了一系列酰腙、雜環(huán)類楊梅素衍生物，利用MTT法，對所合成的化合物進(jìn)行了人類乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231的體外增殖抑制活性測試，研究結(jié)果表明：楊梅素酰腙類衍生物對人類乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231都表現(xiàn)較好的抑制活性。

綜上所述，楊梅素在醫(yī)藥研究方面具有較好的抗病毒、抑菌活性。但楊梅素及其衍生物在農(nóng)藥方面的研究較少，且對楊梅素的研究工作中未涉及植物病毒方面的研究。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種新型且具有高活性的噻二唑類楊梅素衍生物及其制備方法，以及該類化合物在抗病毒方面的應(yīng)用。

本發(fā)明的技術(shù)方案是：一種含噻二唑硫醚結(jié)構(gòu)的楊梅素衍生物，其通式如下所示：

通式中，R為H、烷基、芐基、4-(吡啶基)亞甲基、3-(吡啶基)亞甲基、2-(吡啶基)亞甲基、5-(2-氯吡啶基)亞甲基、5-(2-氯噻唑基)亞甲基或鄰、間和對位單取代或多取代甲氧基芐基、硝基芐基、甲基芐基、鹵原子芐基。

一種含噻二唑類楊梅素衍生物的制備方法，其制備含噻二唑硫醚類的楊梅素衍生物路線如下：

一種噻二唑類楊梅素衍生物的制備方法，其合成步驟和工藝條件為：

(1)以楊梅苷、碘甲烷為原料，碳酸鉀為縛酸劑，N,N-二甲基甲酰胺為溶劑，反應(yīng)，過濾，濾液用水分散，二氯甲烷萃取三次，合并有機(jī)層，加壓除去溶劑，得到的濃縮液用無水乙醇稀釋，攪拌回流至反應(yīng)液澄清，緩慢加入濃鹽酸，待有固體析出后，繼續(xù)反應(yīng)，冷卻至室溫，過濾、常溫下干燥，得到粗產(chǎn)物3-羥基-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮，中間體A；

(2)以中間體A和氯乙酸乙酯為原料，丙酮為溶劑，碳酸鉀為縛酸劑，在回流條件下反應(yīng)得到粗產(chǎn)物3-氧乙酸乙酯-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮，中間體B，

(3)以中間體B和水合肼為原料，甲醇為溶劑，在100℃下反應(yīng)2～2.5h，冷卻至室溫，靜置、過濾，得到中間體2-((5,7-二甲氧基-4-氧代-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-3-基)氧基)乙酰肼，中間體C；

(4)以中間體C、二硫化碳、氫氧化鉀為原料，甲醇為溶劑，在100℃下反應(yīng)16小時，冷卻至室溫，將反應(yīng)體系倒入水中，調(diào)pH至5左右，有大量固體析出，抽濾，得到粗產(chǎn)物3-((5-巰基-1,3,4-噻二唑-2-基)甲氧基)-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮，中間體D；

(5)以中間體D、烷基、芐基、4-(吡啶基)亞甲基、3-(吡啶基)亞甲基、2-(吡啶基)亞甲基、5-(2-氯吡啶基)亞甲基、5-(2-氯噻唑基)亞甲基或鄰、間和對位單取代或多取代甲氧基芐基、硝基芐基、甲基芐基、鹵原子芐基，碳酸鉀為縛酸劑，乙腈作溶劑，合成相應(yīng)的目標(biāo)化合物，

本發(fā)明的有益效果：

本發(fā)明對楊梅素結(jié)構(gòu)進(jìn)行優(yōu)化，設(shè)計(jì)合成含噻二唑結(jié)構(gòu)的楊梅素衍生物并進(jìn)行抑制植物病毒方面的研究，發(fā)現(xiàn)目標(biāo)化合物具有較高的抗病毒活性，可作為抑制植物病毒的藥物。

具體的，本發(fā)明將具有優(yōu)良活性的噻二唑硫醚結(jié)構(gòu)引入楊梅素的結(jié)構(gòu)中，設(shè)計(jì)合成了一系列結(jié)構(gòu)中含有噻二唑硫醚類的楊梅素化合物，并將所合成的含噻二唑硫醚結(jié)構(gòu)的楊梅素類化合物應(yīng)用于抗植物病毒方面的研究，發(fā)現(xiàn)此類化合物比當(dāng)前已有化合物在抗植物病毒方面(黃瓜花葉病毒和煙草花葉病毒)擁有較為突出的的活性，其中部分化合物在治療和保護(hù)活性方面對煙草花葉病毒的抑制活性超過其對照藥劑寧南霉素，具有一定的應(yīng)用價(jià)值。

具體實(shí)施方式

總實(shí)施例

(1)以楊梅苷、碘甲烷為原料，碳酸鉀為縛酸劑，N,N-二甲基甲酰胺為溶劑，在40℃下反應(yīng)2d，過濾，濾液用100mL水分散，二氯甲烷萃取三次(3×30mL)，合并有機(jī)層，加壓除去溶劑，得到的濃縮液用30mL無水乙醇稀釋，攪拌回流至反應(yīng)液澄清，緩慢加入濃鹽酸，待有固體析出后，繼續(xù)反應(yīng)2h。冷卻至室溫，過濾、常溫下干燥，得到粗產(chǎn)物3-羥基-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮(中間體A)；

(2)以中間體A和氯乙酸乙酯為原料，丙酮為溶劑，碳酸鉀為縛酸劑，在58℃回流條件下反應(yīng)10h得到粗產(chǎn)物3-氧乙酸乙酯-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮(中間體B)

(3)以中間體B和80％水合肼為原料，甲醇為溶劑，在100℃下反應(yīng)2～2.5h，冷卻至室溫，有大量固體析出，靜置、過濾，得到中間體2-((5,7-二甲氧基-4-氧代-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-3-基)氧基)乙酰肼(中間體C)；

(4)以中間體C、二硫化碳、氫氧化鉀為原料，甲醇為溶劑，在100℃下反應(yīng)16小時，冷卻至室溫，將反應(yīng)體系倒入50ml水中，調(diào)pH至5左右，有大量固體析出，抽濾，得到粗產(chǎn)物3-((5-巰基-1,3,4-噻二唑-2-基)甲氧基)-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮(中間體D)；

(5)以中間體D、芐氯、取代芐氯、鹵代烷等為原料，碳酸鉀為縛酸劑，乙腈作溶劑，合成相應(yīng)的目標(biāo)化合物。

以下以列表的方式列出具體實(shí)施例，見下表：

實(shí)施例一、3-((5-巰基-1,3,4-噻二唑-2-基)甲氧基)-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮(化合物編號為III₁)。

第一步：3-羥基-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮(中間體A)的制備；

在100mL圓底燒瓶中加入1.86g(4mmol)楊梅苷溶于50mL DMF中，加入8.86g(64mmol)K₂CO₃攪拌50min后，緩慢的加入3mL(48mmol)碘甲烷，完畢之后升溫至40℃，并在此溫度下攪拌48h，將反應(yīng)體系過濾沉淀，用二氯甲烷洗滌，合并濾液，將濾液倒入100mL水中，用二氯甲烷萃取(3×30mL)，合并有機(jī)相，減壓濃縮后將濃縮物用30mL無水乙醇稀釋，升溫至回流1h，溶液澄清后，回流下加入8mL濃鹽酸，有大量黃色固體析出，繼續(xù)反應(yīng)2h，靜止冷卻，過濾，得到粗產(chǎn)物A，直接用于下一步的反應(yīng)。

第二步：3-氧乙酸乙酯-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮(中間體B)的制備；

在50mL圓底燒瓶中，依次加入中間體A(2.57mmol)、無水碳酸鉀(3.09mmol)、20mL丙酮，常溫下攪拌0.5～1h，緩慢滴加氯乙酸乙酯(3.86mmol)溶液，升溫至58℃，反應(yīng)10h，TLC跟蹤反應(yīng)(反應(yīng)體系在紫外燈下顯熒光，展開劑:乙酸乙酯:石油醚＝1:1,V/V)，停止反應(yīng)，冷卻至室溫，抽濾，取液層，用甲醇洗滌，合并有機(jī)相，靜止5min，有大量的固體析出，過濾，得到產(chǎn)物B。

第三步：2-((5,7-二甲氧基-4-氧代-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-3-基)氧基)乙酰肼(中間體C)的制備；

在50ml圓底燒瓶中，依次加入中間體B1.0g(2.11mmol)、無水甲醇30ml、80％水合肼2.06mL(4.64mmol)，常溫下攪拌5min，加熱回流2～2.5h，TLC跟蹤反應(yīng)(反應(yīng)體系在紫外燈下顯熒光，展開劑:乙酸乙酯:石油醚＝1:5V/V)，停止反應(yīng)，冷卻至室溫，抽濾，可得到粗產(chǎn)物中間體C。

第四步：3-((5-巰基-1,3,4-噻二唑-2-基)甲氧基)-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮的制備。

在50mL圓底燒瓶中，依次加入0.5g(1.09mmol)、氫氧化鉀0.09g(1.63mmol)、無水甲醇25mL，常溫?cái)嚢?，并緩慢滴加含有二硫化?.1mL(1.74mmol)的甲醇溶液10mL，反應(yīng)5h，加熱回流20h，TLC跟蹤反應(yīng)(反應(yīng)體系在紫外燈下顯熒光，展開劑:二氯甲烷:甲醇＝7:1,V/V)，停止反應(yīng)，冷卻至室溫，將反應(yīng)體系倒入150mL燒杯中，加入30mL水?dāng)嚢?，調(diào)pH值至5,時，有大量的固體析出，靜止30min過濾，得到產(chǎn)物3-((5-巰基-1,3,4-噻二唑-2-基)甲氧基)-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮。熔點(diǎn)162.0～163.0℃。

實(shí)施例二、5,7-二甲氧基-3-((5-(甲硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)甲氧基)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮(化合物編號為III₂)。

以實(shí)施例一的步驟得到中間體D。在50mL圓底燒瓶中，依次加入中間體D(0.97mmol)、無水碳酸鉀(1.45mmol)、30mL乙腈，常溫下攪拌0.5h，緩慢滴加碘甲烷(1.45mmol)的乙腈(10mL)溶液，升溫至45℃，在此溫度下繼續(xù)反應(yīng)4～6h，TLC跟蹤反應(yīng)(反應(yīng)體系在紫外燈下顯熒光，展開劑:二氯甲烷:甲醇＝7:1,V/V)，停止反應(yīng)，冷卻至室溫，有大量的固體析出，靜置、過濾，甲醇重結(jié)晶，得到目標(biāo)化合物，收率52.2％，熔點(diǎn)165.0～166.0℃。

實(shí)施例三、5,7-二甲氧基-3-((5-((3-甲基芐基)硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)甲氧基)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮(化合物編號為III₃)。

如實(shí)施例二的條件和方法合成，得到5,7-二甲氧基-3-((5-((3-甲基芐基)硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)甲氧基)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮，收率46.2％，熔點(diǎn)105.0～106.0℃。

實(shí)施例四、5,7-二甲氧基-3-((5-((2-甲基芐基)硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)甲氧基)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮(化合物編號III₄)。

如實(shí)施例二的條件和方法合成，得到5,7-二甲氧基-3-((5-((2-甲基芐基)硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)甲氧基)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮，收率62.6％，熔點(diǎn)149.0～150.0℃。

實(shí)施例五、3-((5-((4-甲基芐基)硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)甲氧基)-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮(化合物編號為III₅)

如實(shí)施例二的條件和方法合成，得到3-((5-((4-甲基芐基)硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)甲氧基)-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮，收率59.0％，熔點(diǎn)127.0～128.0℃。

實(shí)施例六、3-((5-((2-氯芐基)硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)甲氧基)-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮(化合物編號為III₆)

如實(shí)施例二的條件和方法合成，得到3-((5-((2-氯芐基)硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)甲氧基)-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮，收率49.3％，熔點(diǎn)112.0～113.0℃。

實(shí)施例七、3-((5-((2-氟芐基)硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)甲氧基)-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮(化合物編號為III₇)

如實(shí)施例二的條件和方法合成，得到3-((5-((2-氟芐基)硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)甲氧基)-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮，收率56.4％，熔點(diǎn)124.0～125.0℃。

實(shí)施例八、5,7-二甲氧基-3-((5-((4-甲氧基苯基)硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)甲氧基)-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮(化合物編號為III₈)

如實(shí)施例二的條件和方法合成，得到5,7-二甲氧基-3-((5-((4-甲氧基苯基)硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)甲氧基)-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮，收率71.83％，熔點(diǎn)146.0～147.0℃。

實(shí)施例九3-((5-((2,4-二氯芐基)硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)甲氧基)-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮(化合物編號為III₉)

如實(shí)施例二的條件和方法合成，得到3-((5-((2,4-二氯芐基)硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)甲氧基)-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮，收率63.4％，熔點(diǎn)154.0～155.0℃。

實(shí)施例十、5,7-二甲氧基-3-((5-((3-硝基芐基)硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)甲氧基)-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮(化合物編號為III₁₀)

如實(shí)施例二的條件和方法合成，得到5,7-二甲氧基-3-((5-((3-硝基芐基)硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)甲氧基)-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮，收率42.0％，熔點(diǎn)120.0～121.0℃。

實(shí)施例十一、3-((5-((4-溴芐基)硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)甲氧基)-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮(化合物編號為III₁₁)

如實(shí)施例二的條件和方法合成，得到3-((5-((4-溴芐基)硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)甲氧基)-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮，收率47.2％，熔點(diǎn)131.0～132.0℃。

實(shí)施例十二、3-((5-((2-溴芐基)硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)甲氧基)-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮(化合物編號為III₁₂)

如實(shí)施例二的條件和方法合成，得到3-((5-((2-溴芐基)硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)甲氧基)-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮，收率64.7％，熔點(diǎn)116.0～117.0℃。

實(shí)施例十三、3-((5-(((2-氯噻唑-5-基)甲基)硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)甲氧基)-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮(化合物編號為III₁₃)

如實(shí)施例二的條件和方法合成，得到3-((5-(((2-氯噻唑-5-基)甲基)硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)甲氧基)-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮，收率30.8％，熔點(diǎn)180.0～181.0℃。

實(shí)施例十四、3-((5-(芐硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)甲氧基)-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮(化合物編號為III₁₄)

如實(shí)施例二的條件和方法合成，得到3-((5-(芐硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)甲氧基)-5,7-二甲氧基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮，收率58.4％，熔點(diǎn)160.0～161.3℃。

實(shí)施例十五、5,7-二甲氧基-3-((5-((吡啶-3-基甲基)硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)甲氧基)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮(化合物編號為III₁₅)

如實(shí)施例二的條件和方法合成，得到5,7-二甲氧基-3-((5-((吡啶-3-基甲基)硫基)-1,3,4-噻二唑-2-基)甲氧基)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮，收率58.4％，熔點(diǎn)155.3～156.2℃。

合成的噻二唑類楊梅素衍生物核磁共振氫譜(¹H NMR)數(shù)據(jù)如表1所示，核磁共振碳譜(¹³C NMR)數(shù)據(jù)如表2所示，物化性質(zhì)與元素分析數(shù)據(jù)如表3所示。

表1目標(biāo)化合物(III₁～I(xiàn)II₁₅)的¹H NMR數(shù)據(jù)

表2目標(biāo)化合物(III₁～I(xiàn)II₁₅)的¹³C NMR數(shù)據(jù)

表3目標(biāo)化合物III₁～I(xiàn)II₁₅理化性質(zhì)及紅外數(shù)據(jù)

上述目標(biāo)化合物的抗煙草花葉病毒活性：

(1)測試方法

A.病毒提純

采用周雪平方法(Zhou,X.P.；Xu,Z.X.；Xu,J.；Li,D.B.J.South Chin.Agric.Univ.1995,16,74-79.)，選取接種3周以上，TMV系統(tǒng)侵染寄主Nicotiana tabacum.L植株上部葉片，在磷酸緩沖液中勻漿，雙層紗布過濾，8000g離心，經(jīng)2次聚乙二醇處理，再離心，沉淀用磷酸緩沖液懸浮，即得到TMV的精提液體。整個實(shí)驗(yàn)在4℃下進(jìn)行。用紫外分光光度計(jì)測定260nm波長的吸光度值，根據(jù)公式計(jì)算病毒濃度。

病毒濃度(mg/mL)＝(A260×稀釋倍數(shù))/E^0.1％_1cm^260nm

其中E表示消光系數(shù)，即波長260nm時，濃度為0.1％(1mg/mL)的懸浮液，在光程為1cm時的光吸收值。TMV的E^0.1％_1cm^260nm是5.0。

B.藥劑對TMV侵染的活體治療作用

藥劑對侵染的活體治療作用：選長勢一致的5-6葉期的心葉煙將其打頂，向全葉撒勻金剛砂，用排筆蘸取病毒汁液(6×10-3mg/mL)全葉接種病毒，自然晾干后用清水沖洗。待葉片干后，用毛筆在左半葉輕涂施藥劑，右半葉涂施對應(yīng)溶劑的濃度的溶劑作對照，6-7d記錄枯斑數(shù)，按下列公式計(jì)算抑制率。

C.藥劑對TMV侵染的活體保護(hù)作用

藥劑對TMV侵染的活體保護(hù)作用：選長勢一致的5-6葉期的心葉煙打頂，用毛筆在左半葉輕涂施藥劑，右半葉涂施對應(yīng)溶劑的濃度的溶劑作對照。24h后，向全葉撒勻金剛砂，用排筆蘸取病毒汁液(6×10^-3mg/mL)全葉接種病毒，用清水沖洗，6-7d后記錄枯斑數(shù)，按下列公式計(jì)算抑制率。

其中，未涂施藥劑半葉的平均枯斑數(shù)和涂施藥劑的半葉枯斑數(shù)都采用各組三次重復(fù)的平均數(shù)。

(2)生物活性測試結(jié)果

表4目標(biāo)化合物對煙草花葉病毒的保護(hù)和治療活性

采用半葉枯斑法，以商品藥劑寧南霉素為對照，在測試濃度為500μg/mL時，測試了目標(biāo)化合物Ⅲ₁～Ⅲ₁₅對煙草花葉病毒(TMV)的治療和保護(hù)活性(見表4)。該測試結(jié)果表明：大部分目標(biāo)化合物對TMV均有較好的治療和保護(hù)活性。其中，目標(biāo)化合物Ⅲ₅、Ⅲ₆、Ⅲ₉和Ⅲ₁₃對TMV擁有較好的治療作用，其抑制率分別為60.0％、68.3％、66.3％和57.1％，略優(yōu)于寧南霉素(51.8％)。目標(biāo)化合物Ⅲ₄和Ⅲ₉對TMV擁有較好的保護(hù)作用，其抑制率分別為58.4％、60.7％，略優(yōu)于寧南霉素(58.3％)。這也表明該類化合物對TMV擁有較好的抑制作用，其中部分含取代甲基芐氯、取代氯基芐氯的噻二唑類楊梅素衍生物對植物病毒表現(xiàn)有優(yōu)良抑制活性，可作為潛在的抗植物病毒藥物，具有較好應(yīng)用的前景。

以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并非對本發(fā)明作任何形式上的限制，任何未脫離本發(fā)明技術(shù)內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實(shí)質(zhì)對以上所作的任何簡單修改，等同變化的修飾，均仍屬于本發(fā)明技術(shù)方案的范圍內(nèi)。