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一種用葉綠體微衛(wèi)星引物對鑒定霍山石斛的方法與流程

文檔序號:11838664閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種用葉綠體微衛(wèi)星引物對鑒定霍山石斛的方法,其特征在于操作步驟如下:

(1)提取待測樣品的DNA作為模板,采用引物對進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng),得到PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;

所述引物對為:上游引物CPSSR1s:5’-CGTATGCGATAGAAGAAT-3’,

下游引物CPSSR1a:5’-ATCTGTAGATTGGGCTCT-3’;

(2)瓊脂糖凝膠電泳法檢測PCR擴(kuò)增產(chǎn)物

若PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中含有282 bp的DNA片段,則所述待測樣品中含有霍山石斛;若PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中不含有282 bp的DNA片段,則所述待測樣品中不含有霍山石斛。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種用葉綠體微衛(wèi)星引物對鑒定霍山石斛的方法,其特征在于:步驟(1)PCR擴(kuò)增反應(yīng)中,PCR反應(yīng)體系的總體積25 μL,其中0.5 μL待測樣品的DNA,1.0μL含量為10 pmol的上游引物CPSSR1s,1.0 μL含量為10 pmol的下游引物CPSSR1a,2.5 μL 10×buffer緩沖液,1.5 μL濃度為25 mM的氯化鎂水溶液,0.5 μL濃度為10 mM的dNTPs ,0.5 μL濃度為5U/μL的Taq DNA聚合酶,無菌雙蒸水補(bǔ)足至25 μL;PCR擴(kuò)增反應(yīng)條件: 95 ℃ 5 min;95 ℃ 30 s,55 ℃ 30 s,72 ℃ 30 s,35個循環(huán);72 ℃ 10 min。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種用葉綠體微衛(wèi)星引物對鑒定霍山石斛的方法,其特征在于:步驟(2)的具體操作如下:取5 μL PCR擴(kuò)增產(chǎn)物,用2%的瓊脂糖凝膠,在電壓80-90V下電泳30分鐘,凝膠成像系統(tǒng)下觀察并拍照;若PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中含有282 bp的DNA片段,則所述待測樣品為霍山石斛;若PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中未含有282 bp的DNA片段,則所述待測樣品為非霍山石斛。

4.一種權(quán)利要求1所述用葉綠體微衛(wèi)星引物對鑒定霍山石斛的檢測試劑盒,其特征在于:將PCR反應(yīng)體系中的上游引物CPSSR1s和下游引物CPSSR1a分別單獨包裝;將除待測樣品的DNA、上游引物CPSSR1s和下游引物CPSSR1a外的其它物質(zhì)混合均勻單獨包裝;將以上分別單獨包裝的物質(zhì)放置于同一個試劑盒內(nèi),組成一個檢測試劑盒。

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