本發(fā)明涉及抗白介素6抗體多肽及其應(yīng)用，具體涉及具有抑制白介素6，減輕抑郁癥狀的多肽。

背景技術(shù)：

抑郁癥(抑郁障礙)是表現(xiàn)為超過兩周持續(xù)并顯著的情緒低落(每天的大多數(shù)時間)，興趣下降，失眠(典型的為早醒)，食欲下降/體重減輕，疲乏，精力下降，自卑感，記憶下降/注意分散/做決定困難等癥狀的綜合征。抑郁狀態(tài)往往指那些還達(dá)不到抑郁癥，病情相對較輕，癥狀相對較少的狀態(tài)。

傳統(tǒng)的三環(huán)類、四環(huán)類抗抑郁藥和單胺氧化酶抑制劑由于不良反應(yīng)較大，應(yīng)用明顯減少。目前臨床上一線的抗抑郁藥主要包括選擇性5-羥色胺再攝取抑制劑(SSRI，代表藥物氟西汀、帕羅西汀、舍曲林、氟伏沙明、西酞普蘭和艾司西酞普蘭)、5-羥色胺和去甲腎上腺素再攝取抑制劑(SNRI，代表藥物文拉法辛和度洛西汀)、去甲腎上腺素和特異性5-羥色胺能抗抑郁藥(NaSSA，代表藥物米氮平)等。但是，這些藥物都存在起效慢，停藥后易復(fù)發(fā)的特點。因此，尋找新的治療抑郁癥的靶點，開發(fā)新型、有效的治療抑郁癥藥物，顯得尤為重要。

研究發(fā)現(xiàn)，具有抑郁癥臨床表現(xiàn)的患者，其大腦炎癥的發(fā)生率高出正常人30％。由此提出了炎癥細(xì)胞因子假說，細(xì)胞因子是機(jī)體免疫系統(tǒng)分泌的一類多肽類信號分子，廣泛存在于機(jī)體免疫系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)中。當(dāng)機(jī)體對損傷、感染和心理社會等應(yīng)激因素產(chǎn)生免疫應(yīng)答時，會通過分泌細(xì)胞因子參與機(jī)體多種功能的調(diào)節(jié)。越來越多的證據(jù)表明抑郁癥的發(fā)生與炎癥細(xì)胞因子的增加關(guān)系密切。從而，認(rèn)為抗炎治療可用于開發(fā)新的抑郁癥治療方法。

白細(xì)胞介素-6，簡稱白介素6(IL-6)，是一種細(xì)胞因子，屬于白細(xì)胞介素的一種。它是由纖維母細(xì)胞、單核/巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、上皮細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞、以及多種瘤細(xì)胞所產(chǎn)生。白介素6能夠刺激參與免疫反應(yīng)的細(xì)胞增殖、分化并提高其功能。研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)機(jī)體處于心理應(yīng)激、軀體疾病和創(chuàng)傷感染等應(yīng)激條件下，伴有Il 6升高等炎癥反應(yīng)?？梢?，白介素6抗體可治療炎癥相關(guān)疾病，如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎。

但是，未有研究報道白介素6抗體用于治療抑郁癥。而且，白介素6抗體本身的分子量較大，長期用于人體會產(chǎn)生中和反應(yīng)，降低藥效。因此，本發(fā)明提供了一種特異性強(qiáng)，純度較高的小分子白介素6抗體多肽，抑制炎癥反應(yīng)，從而起到抗抑郁的作用。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

發(fā)明目的

本發(fā)明提供全新的序列，該序列抗白介素6抗體多肽，對抑郁癥具有很好的療效。

技術(shù)方案

抗白介素6抗體多肽，其特征在于其序列為SEQ ID NO：1。

抗白介素6抗體多肽在治療抑郁癥藥物中的應(yīng)用。

有益效果

利用固相合成法化學(xué)合成抗白介素6抗體多肽，該多肽具有全新的序列，該多肽可用于治療抑郁癥。ELISA法測定抗白介素6抗體的效價結(jié)果顯示，本發(fā)明多肽的抗體效價為1：25000，為高效價抗體。在體藥理結(jié)果顯示，本發(fā)明的多肽能夠減少小鼠懸尾實驗中應(yīng)激絕望模型小鼠的懸尾時間；也能減少小鼠強(qiáng)迫游泳實驗中應(yīng)激絕望模型小鼠的強(qiáng)迫游泳時間；同時，本發(fā)明的多肽能夠減少慢性不可預(yù)測應(yīng)激模型大鼠的覓食潛伏期，提高模型大鼠糖水實驗中對糖水的攝取，與模型組相比，具有統(tǒng)計學(xué)差異。覓食潛伏期主要檢測的是大鼠焦慮樣行為，大鼠糖水偏好表明了大鼠的興趣缺失傾向。由此可見，本發(fā)明多肽能改善急性和慢性抑郁癥模型動物的抑郁癥狀。可作為臨床抑郁癥有效的候選治療方法。

具體實施方式

多肽由上海生工吉爾合成。

實施例1

抗白介素6抗體多肽的效價測定。

抗白介素6抗體多肽的效價測定采用ELISA法。步驟：(1)抗原包被：人白介素6作為抗原，用包被液l：8000稀釋，100μL/孔加入聚苯乙烯96孔反應(yīng)板中。4℃放置過夜，洗滌液洗3次；(2)封閉：加l00μL/孔封閉液(含1％牛血清白蛋白，0.1％Tween20的PBS)，室溫放置1h，用洗滌液洗3次；(3)將本發(fā)明多肽稀釋成不同的濃度梯度，(4)將不同濃度梯度的本發(fā)明多肽及空白陰性對照品分別加入到反應(yīng)板中，l00μL/孔，37℃，反應(yīng)2h，用洗滌液洗3次；(5)加酶標(biāo)抗抗體：兔抗鼠IgG-HRP，用封閉液l：8000稀釋，100μL/孔，加蓋37℃恒溫箱溫育1h，用洗滌液洗3次；(6)顯色：TMB底物溶液100μL/孔，室溫暗處放置10min；(7)終止反應(yīng)：加50μL/孔終止液；(8)用酶標(biāo)儀測定450nm處吸光值，當(dāng)檢測樣品吸光度/陰性樣品吸光度>2.5時，為陽性反應(yīng)，以檢測陽性反應(yīng)的最大稀釋度為待測樣品的效價。結(jié)果顯示本發(fā)明多肽的效價為1：25000。

實施例2

抗白介素6抗體多肽對小鼠強(qiáng)迫游泳應(yīng)激絕望模型的影響。

采用ICR小鼠作為受試動物，取50只小鼠，雌雄各半，體重為18-22g，隨機(jī)分為5組：高劑量組、中劑量組、低劑量組，陽性對照組，空白組，每組l0只。治療組皮下注射本發(fā)明多肽，劑量分別為40、20、10mg/Kg，對照組氟西汀，劑量為10mg/Kg，空白組給予生理鹽水，連續(xù)給藥7天。第7天給藥后1h，小鼠進(jìn)行強(qiáng)迫游泳實驗，小鼠在20-25℃水中強(qiáng)迫游泳6min，記錄后4min內(nèi)不動時間，不動時間，即為小鼠在水中停止掙扎，僅將頭露出水面漂浮的時間，以此評價本發(fā)明多肽對小鼠強(qiáng)迫游泳應(yīng)激絕望模型的影響。

表1本發(fā)明多肽對小鼠強(qiáng)迫游泳應(yīng)激絕望模型的影響

*p<0.05，**p<0.01與空白組相比

本發(fā)明多肽對小鼠強(qiáng)迫游泳應(yīng)激絕望模型結(jié)果如表1顯示：本發(fā)明多肽能夠減少小鼠強(qiáng)迫游泳時間，在劑量在10-40mg/Kg時呈劑量依賴性，與空白組相比，具有統(tǒng)計學(xué)差異。

實施例3

抗白介素6抗體多肽對小鼠懸尾應(yīng)激絕望模型的影響。

采用ICR小鼠作為受試動物，取50只小鼠，雌雄各半，體重為18-22g，隨機(jī)分為5組：高劑量組、中劑量組、低劑量組，陽性對照組，空白組，每組l0只。治療組皮下注射本發(fā)明多肽，劑量分別為40、20、10mg/Kg，對照組氟西汀，劑量為10mg/Kg，空白組給予生理鹽水，連續(xù)給藥7天。第7天給藥后1h，小鼠進(jìn)行懸尾實驗，將小鼠用膠帶固定在其尾部距末端約1cm處，使小鼠保持懸掛狀態(tài)6min，記錄后4min的不動時間，以此評價本發(fā)明多肽對小鼠懸尾應(yīng)激絕望模型的影響。

表2本發(fā)明多肽對小鼠懸尾應(yīng)激絕望模型的影響

*p<0.05，**p<0.01與空白組相比

本發(fā)明多肽對小鼠懸尾應(yīng)激絕望模型結(jié)果如表2顯示：本發(fā)明多肽能夠減少小鼠懸尾時間，在劑量在10-40mg/Kg時呈劑量依賴性，與空白組相比，具有統(tǒng)計學(xué)差異。

實施例4

抗白介素6抗體多肽對大鼠慢性不可預(yù)測應(yīng)激模型的影響。

采用SD大鼠作為受試動物，取60只大鼠，雌雄各半，體重為180-220g，隨機(jī)分為6組，高劑量組、中劑量組、低劑量組、陽性對照組、模型組、空白組，每組l0只。建立大鼠慢性不可預(yù)測應(yīng)激模型：應(yīng)激內(nèi)容為：束縛4h；濕墊料過夜；搖晃1h(160r/min)；禁食12h；冰水游泳4℃，10min；飼養(yǎng)籠傾斜45°過夜；夾尾1min；擁擠過夜(8只/籠)。白天使用兩種應(yīng)激，夜晚使用一種應(yīng)激，連續(xù)應(yīng)激4周。最后一次刺激后給藥。給藥方案：治療組皮下注射本發(fā)明多肽，劑量分別為40、20、10mg/Kg，對照組氟西汀，劑量為10mg/Kg，空白組給予生理鹽水，連續(xù)給藥7天。第7天給藥后1h，大鼠進(jìn)行新奇覓食潛伏期實驗和糖水偏好實驗，以此評價本發(fā)明多肽對大鼠慢性不可預(yù)測應(yīng)激模型的影響。新奇覓食潛伏期實驗即：實驗動物在進(jìn)行24h禁食后，將動物置于一個長×寬×高為76.5cm×76.5cm×40cm的曠場中，曠場中間放有一定量的食物，動物從曠場的一角放入，觀察動物在5min內(nèi)成功覓食所花費的時間。同時試驗后測量動物在5min內(nèi)消耗的食物總重量，以此作為參考來判斷實驗動物饑餓程度是否一致。糖水偏好實驗即：在糖水檢測前用1％的糖水讓動物適應(yīng)48h，禁水4h后將動物置于放有兩個相同水瓶的飼養(yǎng)籠中。這兩只水瓶一只盛有1％的糖水，另一只裝有自來水。記錄1h內(nèi)每只大鼠分別飲用糖水和自來水的體積。糖水偏好＝飲用的糖水體積/(飲用的糖水體積+自來水總體積)×100％。

表3本發(fā)明多肽對大鼠慢性不可預(yù)測應(yīng)激模型的影響

*p<0.05，**p<0.01與模型組相比

本發(fā)明多肽對大鼠慢性不可預(yù)測應(yīng)激模型結(jié)果如表3顯示：本發(fā)明多肽能夠減少模型組大鼠的覓食潛伏期，提高慢性不可預(yù)測應(yīng)激模型大鼠糖水實驗中對糖水的攝取，與模型組相比，具有統(tǒng)計學(xué)差異。覓食潛伏期主要檢測的是大鼠焦慮樣行為，大鼠糖水偏好表明了大鼠的興趣缺失傾向。由此可見，本發(fā)明多肽能改善慢性不可預(yù)測應(yīng)激模型大鼠的抑郁癥狀。

SEQUENCE LISTING

<110> 蘇州普羅達(dá)生物科技有限公司

<120> 抗白介素6抗體多肽及其應(yīng)用

<130>

<160> 1

<170> Patent In version 3.3

<210> 1

<211> 33

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 1

Met Asn Ser Leu Gln Ala Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Arg

1 5 10 15

Asn Gly Asn Arg Tyr Tyr Gly Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

20 25 30

Thr