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重組α?L?鼠李糖苷酶粗提液用于微通道反應(yīng)器中催化定向水解黃酮苷的方法與流程

文檔序號:11838187閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.重組α-L-鼠李糖苷酶粗提液用于微通道反應(yīng)器中催化定向水解黃酮苷的方法,其特征在于步驟為將表達的RhaA和RhaB型α-L-鼠李糖苷酶超聲提取粗酶液直接在微通道反應(yīng)器內(nèi)水解黃酮苷,并在微反應(yīng)器中加入表面活性劑建立共溶劑體系,提高微反應(yīng)器的催化效率。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述重組α-L-鼠李糖苷酶粗提液用于微通道反應(yīng)器中催化定向水解黃酮苷的方法,其特征在于分別構(gòu)建RhaA型和RhaB型的表達α-L-鼠李糖苷酶的重組工程菌;所述的工程菌的質(zhì)粒載體為pET21a;所述工程菌的宿主菌為大腸桿菌Escherichia coli BL21(DE3);所述的重組工程菌的培養(yǎng)方法為:接種到50μg/mL氨芐青霉素鈉鹽的LB液體培養(yǎng)基中生長到指數(shù)期,然后經(jīng)異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)表達;所述的IPTG濃度為200~800μM;所述的生長溫度為22~37℃;所述的誘導(dǎo)溫度為17~25℃;所述的誘導(dǎo)時間為12~20h。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述重組α-L-鼠李糖苷酶粗提液用于微通道反應(yīng)器中催化定向水解黃酮苷的方法,其特征在于由所述重組工程菌制備α-L-鼠李糖苷酶的方法為超聲破碎法,所述的超聲緩沖液分別為:pH7.0PBS,pH8.0 1.0M Tris-HCl和pH8.0 1×LEW buffer:含有50mM NaH2PO4和300mM NaCl,所述的超聲波功率為0.2~1.0kW,所述的超聲時間為6~36min,然后12000rpm離心30min,收集上清為粗酶液。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述重組α-L-鼠李糖苷酶粗提液用于微通道反應(yīng)器中催化定向水解黃酮苷的方法,其特征在于所述黃酮苷溶解于緩沖液中,所述的緩沖液為pH4.5的NaOAc、pH5.0的檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖液、pH5.5~6.5的MES緩沖液和pH6.5~7.5的PBS緩沖液;表面活性劑濃度為2wt.%~15wt.%;底物濃度為0.02~0.2g/L;反應(yīng)溫度為30~70℃;流速為1~20μL/min。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述重組α-L-鼠李糖苷酶粗提液用于微通道反應(yīng)器中催化定向水解黃酮苷的方法,其特征在于所述的表面活性劑分別為陰離子表面活性劑、非離子表面活性劑或離子液體;所述的離子液體分別為[Bmim]Tf2N,[Nmim]HSO4,[Emim]BF4,[Emim]OTF,[Emim]PF6,[Bmim]BF4,[Bmim]PF6,[Hmim]HSO4,[Omim]BF4,[BMPY]C4F9SO3,[Toma]Tf2N,[Toma]TF3,[Toma]PF6,[ChCl]Urea,[TCMAC]或[Hmim]Cl。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述重組α-L-鼠李糖苷酶粗提液用于微通道反應(yīng)器中催化定向水解黃酮苷的方法,其特征在于所述黃酮苷為蘆丁或柚皮苷。

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