專利名稱：芳基化藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及芳基化劑，特別是苯基化劑，它們適于作治療用化合物，尤其是癌癥和由病毒感染引起的病病的治療。
就最廣義來說，本發(fā)明涉及用于治療腫瘤或病毒如由HIV引起的感染的芳基化劑。芳基化劑是一種具有芳基的化合物，芳基的芳環(huán)優(yōu)選碳環(huán)，在任何情況下具有至少一個(gè)不穩(wěn)定取代基和至少一個(gè)親電子取代基。碳環(huán)或其它芳環(huán)優(yōu)選是單環(huán)的，在任何情況下，芳環(huán)通常帶有一個(gè)或多個(gè)羧酸或磺酸基團(tuán)以及一個(gè)或多個(gè)硝基和/或氨基和/或一個(gè)或多個(gè)鹵素取代基。優(yōu)選取代基含有不超過兩個(gè)硝基取代基。鹵素(例如氯)和硝基取代基的組合是一種特別有效的結(jié)構(gòu)，對(duì)由帶有一個(gè)羧酸取代基的環(huán)構(gòu)成的單環(huán)芳基化劑尤其如此。這種結(jié)構(gòu)的一個(gè)實(shí)例是一種基于單硝基和單氯取代的組合(例如，2—氯—5—硝基苯甲酸和2—氯—4—硝基苯甲酸)。
根據(jù)本發(fā)明，提出了一種用于治療癌癥或由病毒感染引起的疾病(特別是AIDS)的化合物，該化合物含有帶有至少一個(gè)不穩(wěn)定離去取代基團(tuán)和至少一個(gè)親電子取代基團(tuán)的芳環(huán)結(jié)構(gòu)，只要有兩個(gè)鄰位硝基和一個(gè)對(duì)位磺基或三個(gè)對(duì)稱的硝基，并且1位上的不穩(wěn)定基團(tuán)是如國際說明書No.WO91/15200中所定義的一種基團(tuán)，以高于1×10-3摩爾/升的濃度使用。
一般地說，本發(fā)明的化合物可具有通式 其中，n是一個(gè)整數(shù)且至少為2，每個(gè)X是相同或不同的并且是一個(gè)不穩(wěn)定基團(tuán)或一個(gè)親電子基團(tuán)，如果至少2個(gè)X基團(tuán)(除了硝基，至少一個(gè)是不穩(wěn)定基團(tuán)，至少一個(gè)是親電子基團(tuán))。
另外，由于通過所確信的芳基化機(jī)理來尋求治療方案，通常使用相對(duì)高的濃度和劑量。一般地說，本發(fā)明的化合物的使用濃度為至少約1×10-2摩爾/升，用劑量來說通常至少為5mg/kg。
選擇本發(fā)明化合物的取代基團(tuán)時(shí)的基本特征是保證特定芳環(huán)中含有至少一個(gè)不穩(wěn)定取代基團(tuán)和至少一個(gè)親電子取代基團(tuán)。另外，一種在某個(gè)環(huán)中可歸為不穩(wěn)定基團(tuán)的基團(tuán)在另一個(gè)環(huán)中可歸為親電子基團(tuán)。此外，當(dāng)至少有兩個(gè)硝基取代基時(shí)，不穩(wěn)定取代基團(tuán)可以是環(huán)上的氫。
被認(rèn)為是優(yōu)選取代基團(tuán)的基團(tuán)可被定義為，其中至少一個(gè)X選自下列基團(tuán)，即親電子基團(tuán)—SO3H，SO3M(這里M是一種金屬例如鉀)，鹵素和NO2不穩(wěn)定基團(tuán)—鹵素，SO3H，SO3M(這里M是一種金屬)，NH2，取代的NH2例如NHR1，NR1R2(這里R1和R2相同或不同，是烷基，烷氧基或羥烷基)，COOH，CONH2，取代的CONH2例如CONHR1，CONR1R2
(這里R1和R2如上所述)和COOR3(這里R3是一種金屬或烷基)。
因此，作為本發(fā)明的化合物的普通實(shí)例，可提及的有下列化合物，即氯二硝基苯磺酸氯苯磺酸二氯苯磺酸氨基二硝基苯磺酸硝基甲基苯磺酸谷胱甘肽基二硝基苯磺酸硝基氯苯磺酸二硝基苯磺酸二硝基氯苯二硝基氟苯二氯二硝基苯三硝基苯酚例如苦味酸三硝基苯胺三硝基氯苯三硝基苯磺酸氯二硝基苯甲酸二氯苯甲酸二硝基苯甲酸硝基氯苯甲醚氨基二硝基苯甲酰胺二硝基苯胺二硝基氯苯胺氯硝基苯胺二硝基氟苯胺可用下面通式的化合物總結(jié)上述化合物 其中X1是SO3H，SO3M(這里M是一種金屬)，鹵素例如氯、氟等，COQ(這里Q是羥基，氨基或取代的氨基，OR3基團(tuán)，其中R3是一種金屬或烷基)，NH2，取代的NH2，NO2或OH，X″是氫，鹵素，谷胱甘肽或硝基，每一個(gè)B相同或不同，是氫，鹵素或硝基，以及C是氫，硝基，氨基(包括取代的氨基)，鹵素，烷基或谷胱甘肽。
在這樣的化合物中，優(yōu)選的特征如下X′是SO3H，SO3R(這里R是一種金屬)，鹵素例如氯、氟等，氨基，硝基或COOH，以及C是氫，烷基例如甲基，氨基或硝基。
根據(jù)本發(fā)明的顯示抗癌和抗病毒效果的化合物可細(xì)分成一些優(yōu)選的組，例如，如下所述(i)具有下列通式的化合物
其中，A是氫，鹵素例如氯、氟等，或者谷胱甘肽；B是氫，硝基或鹵素例如氯等；C是氫，硝基，氨基(包括取代的氨基)，鹵素，烷基或谷胱甘肽；D是氫，鹵素或硝基。
上述式III化合物是優(yōu)選的，因?yàn)閾?jù)認(rèn)為，磺基能產(chǎn)生乳化作用，由于乳化作用能增加化合物的溶解度，所以很有用，對(duì)細(xì)胞來說，它又能帶來更好的生物利用率。
上述式III化合物中，更優(yōu)選的是4—氯—3，5—二硝基苯磺酸4—氯苯磺酸2，5—二氯苯磺酸4—氨基—3，5—二硝基苯磺酸3—硝基—4—甲基苯磺酸2—氯—3，5—二硝基苯磺酸2—谷胱甘肽基—3，5—二硝基苯磺酸4—谷胱甘肽基—3，5—二硝基苯磺酸
3—硝基—4—甲基苯磺酸3—硝基—4—氯苯磺酸2，4—二硝基苯磺酸特別優(yōu)選的是4—氯—3，5—二硝基苯磺酸4—氯苯磺酸2，5—二氯苯磺酸4—氨基—3，5—二硝基苯磺酸3—硝基—4—甲基苯磺酸2—氯—3，5—二硝基苯磺酸(ii)具有下列通式的化合物 其中，halo是鹵素例如氯、氟等，每一個(gè)B相同或不同并且如上所述。
上述式IV化合物中，更優(yōu)選的是1—氯—2，4—二硝基苯1—氯—3，4—二硝基苯1—氟—2，4—二硝基苯1，2—氯—4，5—二硝基苯1，3—氯—4，5—二硝基苯特別優(yōu)選的是1，3—氯—4，5—二硝基苯1—氯—2，4—二硝基苯1—氟—2，4—二硝基苯(iii)具有下列通式的化合物 其中，E是SO3H，SO3M(這里M是一種金屬例如鉀)，NH2或取代的NH2，鹵素或羥基。
式V化合物中，更優(yōu)選的是2，4，6—三硝基苯酚(苦味酸)，2，4，6—三硝基苯胺2，4，6—三硝基氯苯2，4，6—三硝基苯磺酸在上述優(yōu)選的化合物中，第1和第3種是特別優(yōu)選的。
(iv)具有下列通式的化合物
其中，每一個(gè)B相同或不同并且如上面所定義的，G與上面所述的C基團(tuán)相同，但不包括烷基和谷胱甘肽，J是氫或鹵素，以及Q是羥基，氨基或取代的氨基，或者OR3基團(tuán)，其中，R3是一種金屬或烷基。
式VI化合物中，更優(yōu)選的是2，4—氯—3，5—二硝基苯甲酸4—氯—3，5—二硝基苯甲酸2，5—二氯苯甲酸2，4—二硝基苯甲酯3，5—二硝基苯甲酸3—硝基—4—氯苯甲醚4—氨基—3，5—二硝基苯甲酰胺上述優(yōu)選的化合物中，除后三個(gè)外，都是特別優(yōu)選的。
(v)具有下列通式的化合物 其中，每一個(gè)B相同或不同并且如上面所定義的，還有其氨基取代的衍生物。
式VII化合物中，更優(yōu)選的是2，6—二硝基苯胺2，4—二硝基苯胺3，5—二硝基苯胺2，4—二硝基—6—氯苯胺2，6—二硝基—4—氯苯胺2—氯—4—硝基苯胺2，4—二硝基—5—氟苯胺特別優(yōu)選的是2，6—二硝基苯胺如上所述，在至少有兩個(gè)硝基取代基的情況下，環(huán)上的氫可以提供不穩(wěn)定基團(tuán)。在這里可提及(vi)具有下列通式的化合物 即1，2—二硝基苯1，3—二硝基苯1，4—二硝基苯可用制備苯取代化合物的公知技術(shù)制備本發(fā)明的化合物。這些技術(shù)在各種標(biāo)準(zhǔn)教科書中作了描述，例如，Harry P.Schultz所著，John Wiley and Sons Inc.出版的“Organic Syntheses”1963總第4卷，364—366頁。
本發(fā)明的化合物可用于配制成含有至少一種活性化合物和稀釋劑或載體的藥物組合物(例如，用于靜注、腹膜內(nèi)、口服或皮下給藥)。因此，本發(fā)明包括一種藥物組合物，該組合物含有根據(jù)本發(fā)明的化合物和藥學(xué)上可接受的稀釋劑或載體(例如含水的)。
這樣的組合物可以是散裝形式的或更優(yōu)選單位劑量形式的。因此，例如，該組合物可被制成片劑、膠囊、粉末，溶液或懸浮液。軟膠囊特別方便。該組合物可以是脂質(zhì)體制劑或由控速釋藥體系給藥。
用這里所述的活性化合物，按照傳統(tǒng)的制藥方法，可以制備根據(jù)本發(fā)明的組合物。可用的稀釋劑、賦形劑或載體等在制劑加工技術(shù)中廣為人知，對(duì)具體情況所選擇的形式取決于給定情況和醫(yī)生的決定。
因此，例如象下面闡述的那樣，本發(fā)明的化合物可以無菌去離子水的溶液方式給藥。而且，如有必要，可用二甲基亞砜(DMSO)或可選擇的乙醇、乙二醇或植物油，使溶液更便于使用。最優(yōu)選將化合物溶于玉米油或作為DMSO/無菌水的溶液給藥。
在上述應(yīng)用范圍內(nèi)，本發(fā)明還涉及在制備用于預(yù)防或治療癌癥或病毒感染(例如減少或消除癌的增長(zhǎng))的藥劑中使用此處所述的化合物。
在應(yīng)用本發(fā)明化合物時(shí)，可從如下所述的動(dòng)物研究確定指導(dǎo)劑量。在這些研究中已經(jīng)證實(shí)，典型地從約50mg/kg直至約200mg/kg甚至約400mg/kg和更高都是有效的。因此，對(duì)人而言，典型劑量可能是從約5mg/kg至約20mg/kg，也許可達(dá)約40mg/kg或更高。此濃度和劑量足以使芳基化機(jī)理發(fā)揮作用。
從上面列出的特別優(yōu)選的化合物可見，本發(fā)明的最有效的化合物按活性遞減次序排列如下，即4—氯—3，5—二硝基苯磺酸4—氯苯磺酸1，5—二氯—2，3—二硝基苯2，4，6—三硝基苯酚(苦味酸)2，4—二氯—3，5—二硝基苯甲酸2，5—二氯苯磺酸4—氨基—3，5—二硝基苯磺酸3—硝基—4—甲基苯磺酸4—氯—3，5—二硝基苯甲酸2，6—二硝基苯胺2，4—二硝基氯苯2，4—二硝基氟苯2，4，6—三硝基氯苯2，5—二氯苯甲酸2—氯—3，5—二硝基苯磺酸2，4—二硝基苯甲酸特別優(yōu)選的化合物是那些其中至少一個(gè)X選自下面基團(tuán)的化合物不穩(wěn)定取代基團(tuán)—1或2個(gè)鹵素基團(tuán)和/或NH2或取代的NH2和/或COOH或取代的COOH和/或烷基和/或SO3H/SO3M親電子取代基—1或2個(gè)硝基和/或SO3H/SO3M和/或1或2個(gè)鹵素基團(tuán)。
另外，盡管可以在上面舉例說明的劑量范圍內(nèi)使用本發(fā)明的化合物，當(dāng)如上所述，在有三個(gè)對(duì)稱硝基取代基或者在上述國際說明書NO.WO91/15200中所述活性成分的情況下，任何配方中活性成分濃度必須高于1×10-3摩爾/升，優(yōu)選至少1×10-2摩爾/升。
由下面表8中報(bào)道的結(jié)果可見，2—氯—5—硝基苯甲酸表現(xiàn)出很強(qiáng)的體內(nèi)抗癌活性。體外實(shí)驗(yàn)并不支持這一結(jié)論，本發(fā)明的一些化合物似乎需要在病人肝臟中激活。它和其它化合物也可是免疫調(diào)節(jié)劑。
下面的動(dòng)物研究說明本發(fā)明化合物的顯著活性。
動(dòng)物研究這些研究的目的是評(píng)價(jià)一組具有結(jié)構(gòu)相似性、能作為芳基化劑的化合物的抗癌性能。評(píng)價(jià)它們?cè)隗w內(nèi)對(duì)兩種腹水腫瘤MACISA鼠大腸腺癌和P388鼠血癌以及各種固體腫瘤模型的抗腫瘤反應(yīng)。在200μl緩沖液中含1×105細(xì)胞的細(xì)胞濃度下腹膜下(ip)接種，將MAC15A腹水腫瘤細(xì)胞移植到雄性NMR1鼠中(表1)。在200μl緩沖液中含1×106細(xì)胞的細(xì)胞濃度下，將P388ip移植到雄性BDF1鼠中(表2)。固體腫瘤模型包括MAC13和MAC16鼠大腸腺癌，B16F1鼠黑瘤和M5076網(wǎng)狀細(xì)胞肉瘤。
ip移植后3天開始治療，或者在固體腫瘤如MAC13和MAC16的情況下，平均腫瘤體積達(dá)40mm3時(shí)開始治療。
在這兩種情況下，動(dòng)物都分成5至8個(gè)動(dòng)物的組。
12天后或者當(dāng)腫瘤潰爛、腫瘤體積超過1000mm3或體重下降超過50％時(shí)屠宰動(dòng)物。
除另有說明外，用藥前都以200μl體積的溶劑中的適宜濃度將化合物溶解于DMSO中并稀釋于無菌蒸餾水中。通過對(duì)照溶劑空白比較平均存活時(shí)間或腫瘤增長(zhǎng)抑制，得到抗腫瘤反應(yīng)。得到結(jié)果如下面表1至8中所示。
下面舉例說明劑量溶液的制備實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)量10個(gè)動(dòng)物重量22g劑量每只動(dòng)物每天50mg/kg體重，因此每只鼠每天1.1mg總重量劑量55mg活性組分(指5天治療的情形)總配方10ml溶劑＋溶解于200ml溶劑中的55mg活性組分，用于分成50份，每份1.1mg。
按下述方法測(cè)定T/C％動(dòng)物存活實(shí)驗(yàn)對(duì)照T天 C天T/C%=TC×100]]>實(shí)例動(dòng)物存活實(shí)驗(yàn)對(duì)照443天 100天T/C%=443100×100=443]]>158或更高的值表明性能符合臨床試驗(yàn)的要求。結(jié)論已評(píng)價(jià)了一組已經(jīng)鹵化的芳基化化合物在體內(nèi)對(duì)一些實(shí)驗(yàn)?zāi)[瘤生長(zhǎng)速率的影響，指出下面的發(fā)現(xiàn)1.針對(duì)MAC15A鼠大腸腺瘤的結(jié)構(gòu)—活性關(guān)系表明，雌性NMR1鼠中，當(dāng)分劑量給藥以及鹵素被最大激發(fā)用于親核攻擊時(shí)活性最高。
2.活性最高的倫合物是4—氯苯磺酸(T/C％443)，日劑量為100mg/kg體重，給藥5天。
3.通過腹膜下和皮下給藥，分次劑量降至25mg/kg體重時(shí)2，4—二氯—3，5—二硝基苯甲酸對(duì)M5076網(wǎng)狀細(xì)胞m肉瘤顯示出了活性。酰胺和甲基酯毒性都提高10倍，都不具抗腫瘤活性。這種酸還有效抑制B16鼠黑瘤和MAC16鼠大腸腺癌的生長(zhǎng)。
可以斷定，這組化合物表現(xiàn)出對(duì)鼠模型的廣譜活性。
表1對(duì)MAC15A(鼠大腸腺癌)的抗腫瘤活性。結(jié)構(gòu)—活性關(guān)系。每組5只動(dòng)物。每天劑量100mg kg-1ip-化合物日程 T/C％a- (days)4—氯苯磺酸 1，2，3，4，5 4434—氯—3，5—二硝基苯磺酸 1，2，3，4，5 4141，5—二氯—2氯3—二硝基苯1，2，3，4，5 3862，4，6—三硝基苯酚 1，2，3 3004—氨基—3，5—二硝基苯磺酸 1，2，3，4，5 2864—氯—3，5—二硝基苯甲酸 1，2，3，4，5 2712，4—二氯—3，5—二硝基苯甲酸1，2 2432—谷胱甘肽基—3，5—二硝基苯磺酸 1，2，3，4，5 2423—硝基—4—甲基苯磺酸1，2，3，4，5 2292，6—二硝基苯胺 1，2，3，4，5 2142，5—二氯苯磺酸 1，2，3，4，5 2121，4—二硝基苯1，2 2001—氯—3，4—二硝基苯 1，2，3，4，5 2001—氯—2，4—二硝基苯 1，2，3，4，5 1882，4，6—三硝基苯磺酸 1，2，3，4，5 1882—氯—4—硝基苯胺1，2，3，4，5 1712，5—二氯苯甲酸 1，2，3，4，5 1712，4—二硝基苯磺酸1，2，3，4，5 1711，2—二氯—4，5—二硝基苯1，2，3，4，5 1714—氯—3—硝基苯磺酸 1，2，3，4，5 1402—氯—3，5—二硝基苯磺酸 1，2，3，4，5 1371—氯—2，4，6—三硝基苯 1，2，3 1134—谷胱甘肽基—3，5—二硝基苯 1，2，3，41132，4—二硝基苯胺 1，2 1002，4—二硝基苯甲酸1，2，3，4，5 1003，5—二硝基苯甲酸1，2，3，4，5 1004—氨基—3，5—二硝基苯甲酰胺 1 1004—氯—3—硝基苯甲醚 1，2，3，4，5 1004—氯—2，6—二硝基苯胺 1，2，3，4，5 876—氯—2，4—二硝基苯胺1，2，3，4，5 871—氟—2，4—二硝基苯 1 751—氟—2，4—二硝基苯胺1 62.5b-a＝平均值，T-試驗(yàn)組，C-溶劑對(duì)照；b-中毒死亡表2對(duì)P388(鼠血癌)的抗癌活性。每組8只動(dòng)物。在1至5天進(jìn)行IP治療。劑量是每天的劑量。
化合物劑量 TC％a4—氯—3，5—二硝基苯磺酸sulphonic acid 100mg kg-12034—氯—3，5—二硝基苯磺酸sulphonic acid 50mg kg-1259a＝平均值T＝試驗(yàn)組；C＝溶劑對(duì)照表3用4—氯—3，5—二硝基苯磺酸(CDNSA)ip治療時(shí)對(duì)P388(鼠血癌)的抗癌活性。每組8只動(dòng)物。劑量是每天的劑量。-化合物劑量(mg/kg)日程(天) T/C％a-CDNSA 1001，2，3，4，522575 1，2，3，4，5300-a＝平均值T-試驗(yàn)組，C-溶劑對(duì)照表4im移植16天后對(duì)M5076—網(wǎng)狀細(xì)胞肉瘤的抗癌活性每組7只動(dòng)物。藥物溶解于玉米油中。劑量是每天的劑量。-化合物 劑量方式 日程 ％ 腫瘤重量(mg/kg)(天) 抑制-2，4BA 75aip1，4，6，9 79，88b50 ip1，4，6，9 5725 ip1，2，4，6，9 7575 sc1，4，5，7，9 6650 sc1，2，4，5，6，7，97625 sc1，2，4，5，6，7，9632，4BZ 2.5aip1，2，3，4，5，6，7，8，9 511.25ip1，2，3，4，5，6，7，8，9 342，4BM 1.0aip1，2，3，4，5，6，7，8，9 410.5 ip1，2，3，4，5，6，7，8，9 390.25ip1，2，3，4，5，6，7，8，9 42-a＝最大耐受劑量b＝兩個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)；在第二個(gè)實(shí)驗(yàn)中，4只動(dòng)物沒有腫瘤。2，4BA＝2，4—二氯—3，5—二硝基苯甲酸2，4BZ＝2，4—二氯—3，5—二硝基苯甲酰胺2，4BM＝2，4—二氯—3，5—二硝基苯甲酸甲基酯。％腫瘤重量抑制經(jīng)治療 對(duì)照Agm Bgm 腫瘤 重量
表5SC移植12天后對(duì)B16F1—鼠黑瘤的抗癌活性。每組6只動(dòng)物。藥物溶解于玉米油中，劑量是每天的劑量。-化合物劑量 方式 日程 ％腫瘤重量(mg/kg) (天) 抑制-2，4BA75aip1，571，81b50 ip1，545，56b25 ip1，51375 sc1，3，53050 sc1，3，5925 sc1，3，5222，4BZ2.5aip1，2391.25 ip1，2174BA 100ip1，53975 ip1，54150 ip1，5104BZ 5aip1，3，5182.5ip1，3，5181.25 ip1，3，5274BM 2.5aip1，3671.25 ip1，2，343-a＝最大耐受劑量b＝兩個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)2，4BA＝2，4—二氯—3，5—二硝基苯甲酸2，4Bz＝2，4—二氯—3，5—二硝基苯甲酰胺4BA＝4—氯—3，5—二硝基苯甲酸4Bz＝4—氯—3，5—二硝基苯甲酰胺4BM＝4—氯—3，5—二硝基苯甲酸甲基酯表6im移植12天后，對(duì)MAC13鼠大腸腺癌的抗癌活性。藥物溶解于玉米油中。劑量是每天的劑量。-化合物劑量方式 日程 ％腫瘤重量(mg/kg) (天)抑制-2，4BA75aip1，4，5452，4BA50 ip1，2，3，4，5，6，7，8，9392，4BA 圖3ip圖3圖32，4BZ2.5aip1，2，3，4，5，6，7，8，9512，4BZ1.25ip1，2，3，4，5，6，7，8，9172BA 圖4ip圖4圖4a＝最大耐受劑量2，4BA＝2，4—二氯—3，5—二硝基苯甲酸32，4BZ＝2，4—二氯—3，5—二硝基苯甲酰胺2BA＝2—氯—5—硝基苯甲酸(3參見附圖3；4參見附圖4)
表7開始用2，4—二氯—3，5—二硝基苯甲酸(2，4BA)治療后第11天SC移植，對(duì)MAC16鼠大腸腺癌的抗癌活性。藥物溶解于玉米油中。治療開始時(shí)腫瘤體積至少為40mm3。每組6只動(dòng)物。劑量是每天的劑量。-化合物劑量方式日程 ％腫瘤重量(mg/kg) (天) 抑制-2，4BA75aip 1，2，5，8 8850 ip 1，2，4，5，8 91-a＝最大耐受劑量表8SC移植到雌性C57/黑鼠上12天后，對(duì)B16鼠黑瘤的抗癌活性。每組6只動(dòng)物。劑量是每天的劑量，且是ip。-化合物劑量日程％腫瘤重量(mg/kg) (天) 抑制-2—氯—5—硝基苯甲酸 700 1，2，3，4，5，662
此外，采用下面的初步分析考查了本發(fā)明的化合物，特別是4—氯—3，5—二硝基苯磺酸的抗病毒活性。
還完成了對(duì)如下化合物的抗腫瘤活性和毒性研究，結(jié)果非常理想C222，5—二氯—4—硝基苯甲酸C232，4—二氯—5—硝基苯甲酸C242，6—二氯—4—硝基苯甲酸C252—氨基—5—硝基苯甲酸C262—羥基—5—硝基苯甲酸C273，5—二氯—4—硝基苯甲酸初步分析(1)急性感染分析人免疫缺陷病毒HIV—1RF的高滴度病毒儲(chǔ)液在H9細(xì)胞中在補(bǔ)充有10％小牛血清、青霉素(100IU/ml)的RPMI1640(Flowlaboratories)中生長(zhǎng)。用低速離心除去細(xì)胞碎片，上清液于-70℃下貯藏直至需要使用。在典型的分析中，C8166T—成淋巴細(xì)胞CD4+與10xTCID50HIV—1RF于37℃下一起培養(yǎng)90小時(shí)，然后用磷酸緩沖的生理鹽溶液(PBS)洗三次。在6個(gè)試管中，將細(xì)胞等分試樣(2×105)再懸浮于1.5ml生長(zhǎng)培養(yǎng)基中，并立即加入按對(duì)數(shù)稀釋(200μM至0.2μM)的化合物。每一化合物的20mM儲(chǔ)備溶液配制于70％乙醇中。化合物以粉末形式貯藏，每次實(shí)驗(yàn)之前新配制于蒸餾水中，或者以70％乙醇中的20mM儲(chǔ)備溶液形式貯藏。乙醇在組織培養(yǎng)基中的最終濃度為1％。然后于37℃下在5％CO2中培養(yǎng)細(xì)胞。感染72小時(shí)后，從每一培養(yǎng)物中取出200μl上清液，用能同樣識(shí)別所有核心蛋白質(zhì)的抗原附著的ELISA(Coulter Electronics，Luton，UK)分析HIV(Kingchington等，1989，Robert等，1990)。使用如下的對(duì)照物取自未感染和感染的細(xì)胞的上清液，用AZT(Roche Products UK，Ltd)和ddc(Roche)以及R031—8959(Roche)，一種HIV蛋白酶抑制劑處理過的感染細(xì)胞。8959，AZT和ddc在感染細(xì)胞中的IC50活性分別為1，10，20nM和200nM(附圖2)。用分光光度計(jì)讀ELISA板。在每一濃度下重復(fù)檢測(cè)化合物，所示數(shù)據(jù)是至少兩次分析的平均值。這種分析通過檢測(cè)化合物對(duì)HIV核心抗原水平的抑制，評(píng)價(jià)出它們的活性。(ii)慢性感染的細(xì)胞的分析將慢性感染的細(xì)胞洗滌三次以除去胞外病毒，用活性化合物(200—0.2μM)培養(yǎng)4小時(shí)。然后，用ELISA檢測(cè)上清液中的HIV—1抗原。
為檢測(cè)化合物毒性，將未感染的H9細(xì)胞用化合物培養(yǎng)4天。廢棄上清液，細(xì)胞再懸浮于含有14C蛋白水解物的200μl pg生長(zhǎng)培養(yǎng)基中。6小時(shí)后，收集細(xì)胞，檢測(cè)結(jié)合的14C。(iii)毒性分析為檢測(cè)化合物毒性，2×105未感染細(xì)胞等分試樣用相同稀釋率的化合物培養(yǎng)72小時(shí)。再用PBSA洗滌細(xì)胞，細(xì)胞再懸浮于含有14C蛋白水解物的200μl生長(zhǎng)培養(yǎng)基中。12小時(shí)后收集細(xì)胞并測(cè)定結(jié)合的14C。未感染的，未經(jīng)處理的細(xì)胞用作對(duì)照物。。用14C蛋白水解物的攝取的抑制表示毒性。
附

圖1中顯示了對(duì)4—氯—3，5—二硝基苯磺酸的這些分析結(jié)果，其中，RC代表Radopath化合物即4—氯—3，5—二硝基苯磺酸。結(jié)果還總結(jié)于下面表9中表9化合物IC50CD50TI4—氯—3，5—二硝基-苯磺酸3μM 80μM 28.6
IC50是使HIV核心抗原水平降低50％的藥物濃度，用Coul-ter P24抗原分析檢測(cè)，用雙稀釋法來測(cè)定取自含有未處理的急性感染細(xì)胞的試管的上清液。CD50是用14C蛋白水解物攝取檢測(cè)法，使細(xì)胞抑制達(dá)50％的藥物濃度。用IC50除CD50確定治療系數(shù)(TI)。
本發(fā)明的其它化合物的進(jìn)一步結(jié)果總結(jié)于下面表10中
表10化合物IC50CD50TI2—氯—3，5—二硝基—苯磺酸25μm ＞200μm ＞84—氨基—3，5—二硝基—苯磺酸20μm 100μm52，4，6—三硝基苯酚 ＜0.2μm 95μm ＞4754—氯—3，5—二硝基—苯甲酸30μm 70μm 2.33
幾乎同時(shí)進(jìn)行的初步試驗(yàn)表明，2—氯—5—硝基苯甲酸的性能至少與此處實(shí)驗(yàn)報(bào)道的任何化合物是同樣有效的，即使不是更有效。
按照前述抗HIV的性能的分析方法，進(jìn)行了如下面表11中所報(bào)道的更深入的分析
表11.1抗HIV病毒的結(jié)構(gòu)—活性關(guān)系-代號(hào) 化合物AgIC50ToxCC50-A組-P1苦基氯P2苦味酸P3苦基磺酸(鈉鹽)-B組-C12，4—二氯—3，5—二硝基苯甲酸C22，4—二氯—3，5—二硝基苯甲酰胺C32，4—二氯—3，5—二硝基苯甲酸甲基酯C44—氯—3，5—二硝基苯甲酸C54—氯—3，5—二硝基苯甲酰胺C64—氯—3，5—二硝基苯甲酸甲基酯C72—氯—3，5—二硝基苯甲酸C82—氯—3，5—二硝基苯甲酸甲基酯C94—氯—3—硝基苯甲酸C10 2—氯—4—硝基苯甲酸C11 3，4—二氯苯甲酸C12 2，5—二氯苯甲酸C13 4—氯苯甲酸-C組-S14—氯—3，5—二硝基苯磺酸S22—氯—3，5—二硝基苯磺酸S34—氨基—3，5—二硝基苯磺酸S44—氯—3—硝基苯磺酸S54—氯苯磺酸S64—硝基甲苯磺酸S72，5—二氯苯磺酸S82，4—二硝基苯磺酸表11.1(續(xù)/p)-D組-E11—氯—3，4—二硝基苯E21—氯—2，4—二硝基苯E31，2—二氯—4，5—二硝基苯E42，3—二氯硝基苯E52，4—二氯硝基苯E62，5—二氯硝基苯E73，4—二氯硝基苯E83，5—二氯硝基苯E91，5—二氯—2，3—二硝基苯E10 1，2，3—三氯—4—硝基苯E11 1，2，4—三氯—5—硝基苯E12 2，4，6—三氯苯E13 2，3，4，6—四氯硝基苯E14 五氯硝基苯表11.2p-化合物IC50 CC50 SI(抗病毒) (毒性) (選擇性指數(shù))抗HIV—1RFP1 0.6 7 10- 5 -0.4 - -平均0.5 6 12P2 38 67 2P3 ＞200 ＞200抗HIV—IIIIBP1 0.6 7 11.61 7 7平均0.8 7 9抗慢性感染的細(xì)胞P1 0.9 7 82 12 6平均1.5 9.5 6
表11.3C-化合物IC50 CC50 SI(抗病毒) (毒性)(選擇性指數(shù))抗HIV—IIIBC1 5 70 143670 23370 23560 2平均 2770 3抗HIV—1RFC1 7 60 8.5-561656 3.5平均 11.5 57 5抗慢性感染的細(xì)胞C1 1630 21695 6平均 1663 4抗HIV—IIIIBC2 2 70 35C3 0.3 723C4 40100 2.53070 2.3平均 3585 2.4C5 5 50 10C6 5 60 12C7 23150 6
5＞200＞10平均22 ＞1758C8 10 60 5C9 ＞200＞200-C-10＞200＞200-C-11＞200＞200-C-12＞200＞200-
表11.4S-化合物IC50 CC50 SI(抗病毒) (毒性)(選擇性指數(shù))抗HIV—1RFS1 20 100 519 603平均20 804S2 NRS3 NRS4 ＞200 ＞200 -S5 ＞200 ＞200 -S6 ＞200 ＞200 -S7 ＞200 ＞200 -S8 40 100 2.530 702平均 35 752.4
表11.5E-化合物IC50 CC50 SI(抗病毒) (毒性)(選擇性指數(shù))抗HIV—1RFE1 4 102.5E2 4 133E3 4 7 1.5E4 80 ＞200 1.5E5 180＞200 1E6 110＞200 2E7 ＞200 ＞200 -E8 120＞200 1.5E9 NDE10 ＞200 90-E11 ＞200 ＞200 -E12 ＞200 ＞200 -E13 ＞200 80-E14 ＞200 ＞200 -
雖然上面非常詳細(xì)地闡述了本發(fā)明，應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，在下述權(quán)利要求的實(shí)質(zhì)和范圍內(nèi)還有許多各式各樣的變化形式。因而，例如，官能團(tuán)可在各個(gè)其它位置上，前面具體引述的僅僅是其實(shí)例。
權(quán)利要求
1.一種用作藥品的化合物，該化合物含有帶有至少一個(gè)不穩(wěn)定離去基團(tuán)和至少一個(gè)親電子基團(tuán)的芳環(huán)結(jié)構(gòu)。
2.如權(quán)利要求1中所要求的化合物，具有通式 其中，X1至X6之一是不穩(wěn)定離去基團(tuán)，其穩(wěn)定型式之一是親電子基團(tuán)，其余的相同或不同，是氫或取代基。
3.如權(quán)利要求2中所要求的化合物，其中，X1是不穩(wěn)定離去基團(tuán)，X2至X6之一是親電子基團(tuán)，其余的分別獨(dú)立地為氫或取代基，如果當(dāng)X2和X6是硝基，X4既不是硝基、磺酸基也不是磺酸鹽或X1不是下述不穩(wěn)定基團(tuán)，即羥基、氨基、磺基、羧基、甲氧基、鹵素或下式的偕腙肼基 其中，A是氫或者氮原子的不成對(duì)電子，Y是氫或有機(jī)基團(tuán)，Z是有機(jī)基團(tuán)，或者Y和Z以及相鄰的氮原子形成含氮的雜環(huán)。
4.如權(quán)利要求2中所要求的化合物，其中，X1至X6之一是不穩(wěn)定離去基團(tuán)，其穩(wěn)定形式之一是親電子基團(tuán)，其余的相同或不同地為氫或取代基，其中至少有兩個(gè)不是硝基，至少一個(gè)是不穩(wěn)定基團(tuán)，至少一個(gè)是親電子基團(tuán)。
5.如權(quán)利要求2至4任一權(quán)利要求的化合物，其中，X1至X6中至少一個(gè)是選自下列基團(tuán)的親電子基團(tuán)或不穩(wěn)定基團(tuán)親電子基團(tuán)—SO3H，SO3M(這里M是一種金屬)，氫和NO2不穩(wěn)定基團(tuán)—?dú)?，SO3H，SO3M(這里M是一種金屬)，任意取代的NH2，COOH，任意取代的CONH2和COOR3(這里R3是一種金屬或烷基)。
6.如前述任一權(quán)利要求所要求的化合物，具有通式 其中X7是SO3H，SO3M(這里M是一種金屬)，鹵素，COQ(這里Q是羥基，氨基或取代的氨基，或者OR3基團(tuán)，其中R3是一種金屬或烷基)，NH2，取代的NH2，NO2或OH；X8是氫，鹵素，谷胱甘肽或硝基；X9，X10和X11分別獨(dú)立地為氫，鹵素或硝基；以及X12是氫，硝基，任意取代的氨基，鹵素，烷基或谷胱甘肽。
7.如權(quán)利要求6中所要求的化合物，其中X7是SO3H；X8是氫，鹵素或谷胱甘肽；X9和X10分別獨(dú)立地為氫、鹵素或硝基；X11是氫；以及X12是氫，硝基，任意取代的氨基，鹵素，烷基或谷胱甘肽。
8.如權(quán)利要求7中所要求的和下列名稱表示的化合物8.14—氯—3，5—二硝基苯磺酸8.24—氯苯磺酸8.32，5—二氯苯磺酸8.44—氨基—3，5—二硝基苯磺酸8.53—硝基—4—甲基苯磺酸8.62—氯—3，5—二硝基苯磺酸8.72—谷胱甘肽基—3，5—二硝基苯磺酸8.84—谷胱甘肽基—3，5—二硝基苯磺酸8.93—硝基—4—甲基苯磺酸8.10 3—硝基—4—氯苯磺酸8.11 2，4—二硝基苯磺酸8.12 4—氯—3，5—二硝基苯磺酸8.13 如8.1和8.12中所列任何酸的鹽。
9.如權(quán)利要求6中所要求的化合物，其中X7是鹵素；X8，X9，X10和X12分別獨(dú)立地是氫，鹵素或硝基；X11是氫。
10.如權(quán)利要求9中所要求的和下列名稱表示的化合物10.12，4—二硝基氯苯10.23，4—二硝基氯苯10.32，4—二硝基氟苯1O.41，2—二氯—4，5—二硝基苯10.51，3—二氯—4，5—二硝基苯10.61，5—二氯—2，3—二硝基苯
11.如權(quán)利要求6中所要求的化合物，其中X7是SO3H，SO3M(這里M是一種金屬)，NH2或取代的NH2，鹵素或羥基；X8是硝基；X9是氫；X10是氫；X11是硝基；X12是硝基。
12.如權(quán)利要求11中所要求的和下列名稱表示的化合物12.12，4，6—三硝基苯酚(苦味酸)12.22，4，6—三硝基苯胺12.32，4，6—三硝基氯苯
13.如權(quán)利要求6中所要求的化合物，其中X7是式—COQ的基團(tuán)(其中Q是羥基，任意取代的氨基)或者具有式—OR3(其中，R3是烷基或金屬)；X8是氫或鹵素；X9和X10分別獨(dú)立地為氫，鹵素或硝基；X11是氫；以及X12是氫，硝基，任意取代的氨基或鹵素。
14.如權(quán)利要求13中所要求的和下列名稱表示的化合物14.12—氯—5—硝基苯甲酸14.22，4—二氯—3，5—二硝基苯甲酸或它的烷基酯14.34—氯—3，5—二硝基苯甲酸或它的烷基酯14.42，5—二氯苯甲酸14.52，4—二硝基苯甲酸14.63，5—二硝基苯甲酸14.73—硝基—4—氯苯甲醚14.84—氨基—3，5—二硝基苯甲酰胺14.94—氯—3，5—二硝基苯甲酰胺14.10 2，4—二氯—3，5—二硝基苯甲酰胺
15.如權(quán)利要求6中所要求的化合物，其中X7是任意取代的氨基；以及R8至R12分別獨(dú)立地為氫，鹵素或硝基。
16.如權(quán)利要求15中所要求的和下列名稱表示的化合物16.12，6—二硝基苯胺16.22，4—二硝基苯胺16.33，5—二硝基苯胺16.42，4—二硝基—6—氯苯胺16.52，6—二硝基—4—氯苯胺16.62—氯—4—硝基苯胺16.72，4—二硝基—5—氟苯胺
17.如權(quán)利要求1至5任一項(xiàng)所要求的化合物，其中，環(huán)上的氫提供一個(gè)不穩(wěn)定基團(tuán)，該化合物具有通式
18.如權(quán)利要求17中所要求的和下列名稱表示的化合物18.11，2—二硝基苯18.21，3—二硝基苯18.31，4—二硝基苯
19.如權(quán)利要求2至5任一項(xiàng)所要求的化合物，其中，X1至X6中至少一個(gè)選自不穩(wěn)定基團(tuán)/多個(gè)基團(tuán)—1或2個(gè)鹵代基和/或NH2或取代的NH2和/或COOH或取代的COOH和/或烷基和/或SO3H/SO3M、親電子基團(tuán)/多個(gè)基團(tuán)—1或2個(gè)硝基和/或SO3H/SO3M和/或1或2個(gè)鹵代基。
20.用于治療或預(yù)防癌癥，初癌或由病毒感染引起的疾病的一種化合物，該化合物含有帶有至少一個(gè)不穩(wěn)定離去基團(tuán)和至少一個(gè)親電子基團(tuán)的芳環(huán)結(jié)構(gòu)。
21.用于治療或預(yù)防癌癥，初癌或由病毒感染引起的疾病的一種化合物，該化合物選自下列類型的有機(jī)化合物21.1氯二硝基苯磺酸21.2氯苯磺酸21.3二氯苯磺酸21.4氨基二硝基苯磺酸21.5硝基甲基苯磺酸21.6谷胱甘肽基二硝基苯磺酸21.7硝基氯苯磺酸21.8二硝基苯磺酸21.9二硝基氯苯21.10 二硝基氟苯21.11 二氯二硝基苯21.12 三硝基苯酚如苦味酸21.13 三硝基苯胺21.14 三硝基氯苯21.15 三硝基苯磺酸21.16 氯硝基苯甲酸21.17 氯二硝基苯甲酸21.18 二氯苯甲酸21.19 二氯硝基苯甲酸21.20 二氯二硝基苯甲酸21.21 二硝基苯甲酸21.22 硝基氯苯甲醚21.23 氨基二硝基苯甲酰胺21.24二硝基苯胺21.25二硝基氯苯胺21.26氯硝基苯胺21.27二硝基氟苯胺
22.用于治療或預(yù)防癌癥，初癌或由病毒感染引起的疾病的一種化合物，該化合物是下列名稱表示的化合物22.12，4，6—三硝基苯酚22.22，4—二氯—3，5—二硝基苯甲酸22.34—氯—3，5—二硝基苯甲酸
23.用于治療或預(yù)防癌癥，初癌或由病毒感染引起的疾病的一種化合物，該化合物是下列名稱表示的化合物23.11，5—二氯—2，3—二硝基苯23.22—氯—5—硝基苯甲酸23.34—氯苯磺酸23.44—氯—3，5—二硝基苯磺酸
24.用于治療或預(yù)防癌癥，初癌或由病毒感染引起的疾病的一種化合物，該化合物是下列名稱表示的化合物24.14—氯—3，5—二硝基苯甲酰胺24.22，4—二氯—3，5—二硝基苯甲酰胺
25.一種藥物組合物，該組合物含有如前述權(quán)利要求所述的化合物和藥學(xué)上可接受的稀釋劑或載體。
26.如權(quán)利要求25中所要求的組合物，其中，稀釋劑或載體是含水的。
27.如權(quán)利要求25或26中所要求的組合物，它是以單位劑量的形式。
28.如權(quán)利要求27中所要求的組合物，它是以片劑、膠囊、粉末、溶液或懸浮液的形式。
29.用權(quán)利要求1至24中任一項(xiàng)中所要求的組合物制備預(yù)防或治療癌癥、初癌或病毒感染的藥劑的用途。
30.如權(quán)利要求29中所要求的用途，其中，化合物的濃度和劑量使芳基化機(jī)理發(fā)揮作用。
31.一種治療由病毒感染引起的疾病的方法，該方法包括，使用有效量的如權(quán)利要求1至24任一項(xiàng)中所要求的化合物或如權(quán)利要求25至28任一項(xiàng)中所要求的組合物。
32.一種治療癌癥或初癌以減少或消除腫瘤增長(zhǎng)的方法，該方法包括，使用有效量的如權(quán)利要求1至24任一項(xiàng)中所要求的化合物或如權(quán)利要求25至28任一項(xiàng)中所要求的組合物。
33.用作藥物的氯—或硝基—苯磺酸化合物，氯—或硝基—苯甲酸化合物或者氯—或硝基—苯甲酰胺化合物。
全文摘要
本發(fā)明公開了在治療癌癥和病毒感染中具有活性的各種芳基化劑，活性化合物含有帶有至少一個(gè)不穩(wěn)定離去基團(tuán)和至少一個(gè)親電子基團(tuán)的芳環(huán)。優(yōu)選的活性化合物包括氯苯磺酸和任意鹵化的硝基苯化合物。在抗病毒方面，活性化合物具有抗HIV感染的效力。
文檔編號(hào)C07C205/12GK1124012SQ9419218
公開日1996年6月5日 申請(qǐng)日期1994年5月23日 優(yōu)先權(quán)日1993年5月21日
發(fā)明者W·O·阿尤科 申請(qǐng)人:拉多帕思有限公司