專利名稱：二元吲哚生物堿的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及二元吲哚生物堿的制備方法，如長春花堿或異長春堿，這是一類有效的抗癌藥物。
象通過脫水長春花堿(AVLB)的化學(xué)轉(zhuǎn)化制備具有抗腫瘤活性的二元吲哚生物堿，如長春花堿(VLB)和異長春堿(LEU)的普通方法已在J.C.S.Chem.Commun.583，1979上公開。然而，目標(biāo)物長春花堿(VLB)和異長春堿(LEU)等的產(chǎn)率很低，只有1～2%。同時(shí)，方法中所用的酶也在J.C.S.Chem.Commun.257，1979和phytochemistry26(12)，3233(1987)上公開。這些方法有許多不利因素，如產(chǎn)率很低，反應(yīng)時(shí)間長等等。因此這些方法的工業(yè)化存在許多問題，不能令人滿意。
本發(fā)明的任務(wù)屬于解決上述普通技術(shù)的問題。本發(fā)明的目的是提供一個(gè)工業(yè)上可行的制備工藝，用這套工藝，作為有效抗癌藥物的，象長春花堿，異長春堿或其類似物這樣的二元吲哚生物堿可以得到較高產(chǎn)率。
為了達(dá)到上述目標(biāo)，本發(fā)明采用如脫水長春花堿作原料，試驗(yàn)了幾種類型的水解反應(yīng)，氧化還原反應(yīng)等。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，有效的抗癌藥物長春花堿(VLB)，異長春堿(LEU)等可以從脫水長春花堿(AVLB)開始，在三價(jià)鐵和氧存在下，通過往含AVLB的溶液中加入氫化物，以高的產(chǎn)率一步合成。就完成了本發(fā)明。
也就是說，本發(fā)明涉及由通式(Ⅱ)表示的化
(其中R1代表氫原子，低級烷基，或甲酰基;R2代表低級烷氧羰基、或酰氨基;R3代表乙酰氧基，或羥基;R4代表羥基，R5代表乙基或者R4表示乙基，R5代表羥基)合物的制備方法，該方法使用通式(Ⅰ)表示的化合物或
(其中R1至R3的定義與通式(Ⅱ)相同)其鹽作原料，其特征在于在氧的存在下加入三價(jià)鐵離子和氫化物。
根據(jù)本發(fā)明，一個(gè)典型的制備工藝可用下例來說明，其中以下述式(Ⅴ)代表的長春花堿(縮寫為VLB，下同)〔式(Ⅴ)中，R1代表羥基，R2代表乙基〕和異長春堿(縮寫為LEU，下同)〔式(Ⅴ)中R1代表乙基，R2代表羥基〕能用式(Ⅳ)表示的脫水長春花堿(縮寫為AVLB，下同)作起始原料來合成。作為本發(fā)明的其它目標(biāo)物，上述通式(Ⅱ)中R1是氫原子的化合物可包括如N-脫甲基長春花堿等，通式(Ⅱ)中R1是甲?；幕衔锟砂ㄈ玳L春花堿等。它們可用通式(Ⅰ)中相應(yīng)的化合物作起始物來合成。
本發(fā)明可以用非常簡單的工藝實(shí)施，即在氧存在下，往用適當(dāng)溶劑溶有三價(jià)鐵離子和通式(Ⅰ)表示的化合物或其鹽的體系中加入氫化物。
所用的三價(jià)鐵可以是任何能溶于反應(yīng)混合物中并參與反應(yīng)的鹽;尤其是氯化物，硫酸鹽和硝酸鹽最為合適。加入的量為比原料0.01-10，000倍摩爾過量，最好是1～2，000倍摩爾過量。
本法所用的溶劑可舉如下例子H2O，醇、如甲醇、乙醇等;THF，乙腈，DMF，DMSO，等等。其中的兩種或兩種以上混合的溶劑也可應(yīng)用;最好是單一的H2O，或是混合溶劑H2O-甲醇。
加入的氫化物可包括硼氫化鈉、硼氫化鉀、氰代硼氫化鈉以及硼烷的氨合物。氫化物加入的量是相對于三價(jià)鐵0.05～10倍摩爾過量，最好是0.1～5倍摩爾過量。
氧源可以是氧氣或用惰氣沖稀的氧氣，但通常寧愿用空氣。對于一個(gè)最好的工藝，在加入氫化物之前，將含氧的氣體通入反應(yīng)溶液一定時(shí)間使反應(yīng)溶劑中溶有適量的氧。
反應(yīng)的溫度，從反應(yīng)溶劑的熔點(diǎn)到將近50℃這樣一個(gè)寬范圍都可以，最好是-20～10℃。
根據(jù)本發(fā)明，在制備過程中，進(jìn)一步加入(ⅰ)草酸離子和/或丙二酸離子，(ⅱ)無機(jī)陰離子或(ⅲ)一種氨基酸，可進(jìn)一步提高目標(biāo)物的產(chǎn)率。至于上述的(ⅰ);(a)更愿意加入用通式(Ⅲ)表示的二羧酸或其鹽，再加入氨基酸又更好，或者(b)寧愿加吡啶或其衍生物，并再加入氨基酸又更好，或(C)
(其中R7和R9代表氫原子或低級烷基;R6和R8代表氫原子或低級烷基，或者一起形成雙鍵)寧愿加無機(jī)陰離子，再加氨基酸會(huì)更好，或(d)加入氨基酸更好。對于上述(ⅱ)再加入氨基酸更好。
草酸離子和丙二酸離子可以是任何能溶于反應(yīng)溶劑，并與三價(jià)鐵形成絡(luò)合物的草酸離子和丙二酸離子。但是，如果加入游離的草酸和丙二酸，則需要再加等當(dāng)量的合適堿到游離酸中。加入草酸離子的較好例子可包括，象鹽類的堿金屬鹽，如Li鹽，Na鹽，K鹽等等;銨鹽，烷基銨鹽，加入量為比三價(jià)鐵鹽的0.1-10倍摩爾過量，最好是1至4倍摩爾過量。而且如同加入草酸離子和/或丙二酸離子和三價(jià)鐵離子，加入預(yù)先制好的三價(jià)鐵-草酸絡(luò)鹽和/或三價(jià)鐵-丙二酸絡(luò)鹽是更好的工藝之一。三價(jià)鐵-草酸絡(luò)鹽可舉例子如下如(NH4)3Fe(C2O4)3，K3Fe(C2O4)3，等等;丙二酸鹽的絡(luò)鹽包括象(NH4)3Fe(C3O4)3，K3Fe(C3H2O4)3，等等。
無機(jī)陰離子沒有特殊限制，但是象CO2-3和PO3-4這類形成不溶性鐵鹽者除外。在本發(fā)明中，最好是Cl-，Br-，I-、SO2-4等等。提供無機(jī)陰離子的鹽的類型可以是任何能溶于反應(yīng)溶劑中的鹽，尤其以銨鹽、烷基銨鹽及堿金屬鹽為好。加入的量是以三價(jià)鐵為基準(zhǔn)，0.1-100倍摩爾過量，最好是1-10倍摩爾過量。
氨基酸可以是任何氨基酸，但以低分子量的為好，如甘氨酸等，最好是甘氨酸和N-甲基-甘氨酸。加入的量以三價(jià)鐵為基準(zhǔn)是0.01至1，000倍摩爾過量，最好是1-10倍摩爾過量。
式(Ⅲ)表示的化合物包括馬來酸，甲基順丁烯二酸，琥珀酸，衣康酸，但并不局限于列舉的化合物。特別是馬來酸和琥珀酸可作為最佳例子。
這些化合物最好是以鹽的形式加入，鹽的種類是任意的，當(dāng)然最好是銨鹽，烷基銨鹽。如果加入一種游離鹽，則還需加入一種與游離酸等當(dāng)量的合適的鹽等。加入的羧酸離子量為三價(jià)鐵的0.1～3倍摩爾過量，最好是0.3-2倍摩爾過量。
吡啶或其衍生物包括吡啶衍生物，如吡啶，烷基吡啶等;α，α′-雙吡啶衍生物，如α，α′-雙吡啶，烷基-α，α′-雙吡啶衍生物等。尤其以α，α′-雙吡啶衍生物為好。加入量為三價(jià)鐵0.01-10倍摩爾過量，最好是0.1-3倍摩爾過量。
根據(jù)本發(fā)明，這一制備工藝可以連續(xù)化;方法是使各種(Ⅰ)類化合物，氫化物，氧，和三價(jià)鐵包含在兩種或多種溶液中，然后讓所說的兩種或多種溶液互相連續(xù)接觸，或者最好是讓含有氧-三價(jià)鐵-(Ⅰ)類化合物的溶液與含有氫化物的溶液連續(xù)接觸。
這一連續(xù)的制備工藝可以通過極簡單的操作來實(shí)施，例如將上述的兩種或多種溶液同時(shí)連續(xù)地喂入反應(yīng)柱一端的入口，使其互相接觸混合，溶液通過反應(yīng)柱后，反應(yīng)結(jié)束，這樣在反應(yīng)柱另一端的出口處連續(xù)獲得反應(yīng)混合物。
通過往連續(xù)工藝中接觸和混合的任一溶液中加入選自吡啶衍生物，無機(jī)陰離子，由式(Ⅲ)表示的二羧酸或其鹽，氨基酸，并同時(shí)加入草酸和/或丙二酸中的一種或多種成分可使目標(biāo)物的產(chǎn)率顯著增加。
通常，這些加入的成分最好是加到含有三價(jià)鐵離子的溶液中。然而，加入的方法是不受限制的。把這些成分加到接觸的兩種或多種溶液的任意一種里，產(chǎn)率的增加與上述的相近。
然而，通過結(jié)合使氫化物急速減少的加入方式應(yīng)避免。
吡啶衍生物可以是任意的，最好是吡啶，烷基吡啶，α，α′-雙吡啶，烷基α，α′-雙吡啶類;它加入的量是三價(jià)鐵的0.01-10倍摩爾過量。
事先通入含氧氣體，使氧適當(dāng)溶于要接觸的任何溶液中較好。
反應(yīng)溶液接觸的時(shí)間是0.1秒至60分鐘，最好是1秒至10分分鐘。
反應(yīng)容器可以是任何形狀;柱形反應(yīng)器特別適合。
與普通方法相比，例如從脫水長春花堿(AVLB)得到作為有效抗癌藥物的長春花堿(VLB)、異長春堿(LEU)等本發(fā)明的方法具有產(chǎn)率高，操作簡便等優(yōu)點(diǎn)。
考慮到長春花堿(VLB)是一種價(jià)格非常昂貴的抗癌藥，由本發(fā)明帶來的效益是十分巨大的。
本發(fā)明更詳盡地闡明如下，但本發(fā)明并不限于下述實(shí)施例。
實(shí)施例1在一個(gè)50ml反應(yīng)瓶中加入10mlH2O，1.9mg AVLB1ml FeCl3·6H2O(1.2M)水溶液及0.024ml 2NHCl水溶液，將混合物于冰冷卻下攪拌30分鐘，同時(shí)通入空氣，隨后加1ml NaBH4(0.227M)水溶液，混合物再攪拌30min 然后，加2ml 25%氨水堿化溶液。產(chǎn)物用10ml乙酸乙酯萃取，共3次，合并萃取液，在40℃或低于40℃下減壓蒸發(fā)至干，產(chǎn)品用高效液相色譜(HPLC)分析，分析條件如下所述，此時(shí)，AVLB轉(zhuǎn)化率是95%，VLB產(chǎn)率是10%，LEU產(chǎn)率是6%(分析條件)柱子YMC-填充柱A-512(CN)6×150mm流動(dòng)相H2O∶MeOH∶Et3N∶AcOH＝1500∶1500∶4∶1.6(V/V/V/V)流速1ml/min柱溫45℃檢測UV(254nm)保留時(shí)間VLB19.5minLEU17minAVLB46min實(shí)施例2-4方法同實(shí)施例1，只是進(jìn)一步加預(yù)定量的甘氨酸，結(jié)果見表1。
表1實(shí)施例甘氨酸/Fe3+AVLB轉(zhuǎn) VLB產(chǎn)率 LEU產(chǎn)率(摩爾比)化率(%)(%)(%)22901510348721124585149實(shí)施例5方法與實(shí)施例3相同，只是用N-甲基甘氨酸代替甘氨酸，此時(shí)，AVLB的轉(zhuǎn)化率為66%，VLB產(chǎn)率為24%，LEU產(chǎn)率為14%。
實(shí)施例6-8方法與實(shí)施例3相同，只是Fe3+及NaBH4的量與實(shí)施例3的不同，結(jié)果見表2表2實(shí)施例 Fe3+NaBH4AVLB VLB LEU水溶液水溶液轉(zhuǎn)化率產(chǎn)率產(chǎn)率加入量增加量(%)(%)(%)(cc)(cc)60.40.4327370.50.535948226916.59
實(shí)施例9-11方法與實(shí)施例3相同，只是NaBH4的量與實(shí)施例3不同，結(jié)果見表3表3實(shí)施例 NaBH4水溶 AVLB轉(zhuǎn) VLB產(chǎn)率 LEU產(chǎn)率液加入量(cc)化率(%)(%)(%)90.52910.561026911.5711591169實(shí)施例12-14方法與實(shí)施例3相同，只是用其它的鐵鹽溶液代替實(shí)施例3中的FeCl3·6H2O溶液，結(jié)果見表4表4實(shí)施例鐵鹽AVLB轉(zhuǎn)VLB產(chǎn)LEU產(chǎn)化率(%)率(%)率(%)12 Fe(NO3)3·9H2O 20 4 213 Fe2(SO4)375 18 1114 FeBr326.5 4 1實(shí)施例15-16方法與實(shí)施例3相同，只是用其它的氫化物代替實(shí)施例3中NaBH4，結(jié)果見表5
表5實(shí)施例氫化物AVLB轉(zhuǎn)VLB產(chǎn)率LEU產(chǎn)率化率(%)(%)(%)15 NaBH4CN 80 14 1016 KBH489 19 11實(shí)施例17在一個(gè)50ml反應(yīng)瓶中加10ml H2O，1.9mg脫水長春花堿，摩爾數(shù)500倍于脫水長春花堿的過量(NH4)3Fe(C2O4)3·3H2O，0.024ml 2N HCl水溶液，將混合物在冰冷卻下攪拌約30分鐘，同時(shí)通入空氣。隨后，加1ml NaBH4(0.227M)水溶液，再將混合物攪拌30分鐘。加入2ml 25%氨水使混合物呈堿性用10ml乙酸乙酯萃取，共3次。合并萃取液，在40℃或低于40℃下減壓蒸發(fā)至干，產(chǎn)物用HPLC分析，分析條件如下所述，此時(shí)，脫水長春花堿(AVLB)的轉(zhuǎn)化率是97%，長春花堿(VLB)產(chǎn)率是23%，異長春堿(LEU)的產(chǎn)率為12%。
(分析條件)柱子YMC-填充柱AM-312流動(dòng)相0.01M碳酸銨水溶液∶乙腈＝1800∶1200(V/V)流速1ml/min溫度45℃
檢測波長UV(245nm)保留時(shí)間VLB12.3minLEU9.0minAVLB39.1min實(shí)施例18方法與實(shí)施例17相同，只是加入實(shí)施例17中鐵原子的4倍摩爾過量的甘氨酸，此時(shí)，AVLB的轉(zhuǎn)化率是86%，VLB產(chǎn)率為27%，LEU產(chǎn)率為14%實(shí)施例19方法與實(shí)施例18相同，只是加入1ml FeCl3·6H2O(1.2M)水溶液以代替實(shí)施例18中的(NH4)3Fe(C2O4)3·3H2O，同時(shí)進(jìn)一步加入摩爾數(shù)3倍于三價(jià)鐵離子的過量(NH4)3C2O4此時(shí)，AVLB轉(zhuǎn)化率為86.5%，VLB產(chǎn)率為34%，LEU產(chǎn)率為22.5%實(shí)施例20-21方法與實(shí)施例19相同，只是加入的(NH4)2C2O4的量與實(shí)施例19有不同，結(jié)果見表6表6實(shí)施例 C2O2-4/Fe3+AVLB轉(zhuǎn) VLB產(chǎn)率 LEU產(chǎn)率(摩爾比)化率(%)(%)(%)2014322.5152126331.521.5
實(shí)施例22-24方法與實(shí)施例19相同，只是鐵的加入量減少一半，(NH4)2C2O4的加入量也有改變，結(jié)果見表7表7實(shí)施例 C2O2-4/Fe3+AVLB轉(zhuǎn) VLB產(chǎn)率 LEU產(chǎn)率(摩爾比)化率(%)(%)(%)22143.519.517.52325630.523.524387.527.516.5實(shí)施例25方法與實(shí)施例19相同，只是用Fe(NO3)3·9H2O水溶液代替實(shí)施例19中的FeCl3·6H2O水溶液。此時(shí)，AVLB的轉(zhuǎn)化率是89.5%，VLB的產(chǎn)率是26%，LEU的產(chǎn)率是15%實(shí)施例26-28方法與實(shí)施例19相同，只是溶劑由水變?yōu)槠渌旌先軇磻?yīng)溫度有所改變，結(jié)果見表8
表8實(shí)施例溶劑＊反應(yīng)溫 AVLB轉(zhuǎn) VLB LEU度(℃)化率(%)產(chǎn)率產(chǎn)率(%)(%)26 H2O-MeOH -15℃ 74.5 36 23.527 H2O-DMSO -8℃ 74 21 1428 H2O-CH3CN -6℃ 71 29.5 16＊H2O有機(jī)溶劑＝8∶2(V/V)實(shí)施例29-33方法與實(shí)施例19相同，只是用其它鹽代替實(shí)施例19中(NH4)2C2O4，結(jié)果見表9表9實(shí)施例加入的草酸鹽AVLB轉(zhuǎn)VLB產(chǎn)LEU產(chǎn)化率(%)率(%)率(%)29 H2C2O478 30 25.530 K2C2O478 30.5 2231 (Me4N+)2C2O489.5 32 2132 (εt4N+)2C2O455 21.5 7.533 (CH3N+H3)2C2O482 36 26實(shí)施例34-35方法與實(shí)施例19相同，只是用丙二酸銨代替實(shí)施例19中(NH4)2C2O4。結(jié)果見表10表10實(shí)施例AVLB轉(zhuǎn)化率VLB產(chǎn)率(%)LEU產(chǎn)率(%)(%)3465221135＊80 30 12＊pH調(diào)至6.6到6.7以后，再加NaBH4水溶液。
實(shí)施例36在一個(gè)裝有轉(zhuǎn)動(dòng)葉片的100ml反應(yīng)瓶中，加22.3mg脫水長春花堿硫酸鹽，100ml H2O，0.2029gFeCl3·6H2O，0.2134g(NH4)2C2O4，0.0874g馬來酸，和馬來酸等當(dāng)量的25%氨水(0.1025ml)，混合物在0℃下用高速轉(zhuǎn)動(dòng)葉片攪拌30min以上，攪拌同時(shí)通空氣(50ml/min)，之后在1分鐘內(nèi)泵入1ml 0.5M的NaBH4水溶液，繼續(xù)攪拌30分鐘，加入5ml 25%氨水堿化該溶液，產(chǎn)物用100ml乙酸乙酯萃取，共3次。
合并萃取液，用Na2SO4干燥，在40℃或低于40℃下減壓蒸發(fā)至干，殘余物用甲醇溶出并用高效液相色譜分析。此時(shí)，脫水長春花堿(AVLB)的轉(zhuǎn)化率是94.5%，長春花堿(VLB)的產(chǎn)率是50%，異長春堿(LEU)產(chǎn)率是16%，長春花堿的選擇性是52.9%。
(分析條件)
柱子YMC-填充柱AM-3126×150mm流動(dòng)相0.01M碳酸銨水溶液∶乙腈＝12∶1800(V/V)流速1ml/min溫度45℃檢測UV(254nm)保留時(shí)間VLB13.0minLEU10.5minAVLB42.5min比較實(shí)施例1方法與實(shí)施例36相同，只是不加馬來酸及氨水。此時(shí)，AVLB轉(zhuǎn)化率為93.5%，VLB產(chǎn)率為40%，LEU產(chǎn)率為15.5%，VLB選擇性為42.8%。
比較實(shí)施例37-40方法與實(shí)施例36相同，只是馬來酸及氨水的加入量有改變，結(jié)果見表11。
表11實(shí)施例馬來酸AVLBVLBLEUVLB/Fe3+轉(zhuǎn)化率產(chǎn)率產(chǎn)率選擇性(mol/mol)(%)(%)(%)(%)370.59042.51347.2380.7588.547.51453.7391.587.54910.5564028140.51050比較實(shí)施例1093.54015.542.8
加相當(dāng)于馬來酸當(dāng)量的氨水。
比較實(shí)施例41-43方法與實(shí)施例36相同，只是用琥珀酸代替馬來酸，且加入量有所改變，結(jié)果見表12表12實(shí)施例琥珀酸AVLBVLBLEUVLB/Fe3+轉(zhuǎn)化率產(chǎn)率產(chǎn)率選擇性(mol/mol)(%)(%)(%)(%)410.759743.513.544.842193.5471250.3431.587441150.6氨水的加入量與琥珀酸等當(dāng)量。
實(shí)施例44-46方法與實(shí)施例36相同，只是用其它二羧酸代替實(shí)施例36中馬來酸，結(jié)果見表13
表13實(shí)施例二羧酸AVLBVLBLEUVLB轉(zhuǎn)化率產(chǎn)率產(chǎn)率選擇性(%)(%)(%)(%)44衣康酸77.534947.745檸康酸88.5401345.246草酰乙酸76.5341245.8實(shí)施例47在一個(gè)50ml反應(yīng)瓶中加10ml H2O，1.9mg脫水長春花堿，1ml FeCl3·6H2O(1.5M)水溶液，0.024ml 2N HCl，摩爾數(shù)4倍于Fe3+的過量甘氨酸，6倍于Fe3+的過量NH4Cl，隨后于冰冷卻下攪拌30分鐘以上，同時(shí)通空氣。再加入1ml NaBH4(0.227M)水溶液并繼續(xù)攪拌30分鐘，加2ml 25%氨水堿化該溶液。產(chǎn)物用10ml乙酸乙酯萃取，共3次。合并萃取液，不超過4℃下減壓蒸發(fā)至干，所得樣品用高效液相色譜分析，此時(shí)，脫水長春花堿(AVLB)的轉(zhuǎn)化率是66.5%長春花堿(VLB)的產(chǎn)率是30.5%，異長春堿(LEU)產(chǎn)率是14.5%。
(分析條件)柱子YMC-填充柱A-512(CN)6×150mm流動(dòng)相H2O∶MeOH∶Et3N∶AcOH＝1500∶1500∶4∶1.6(V/V/V/V)流速1ml/min
溫度45℃檢測波長UV(254nm)保留時(shí)間VLB19.5minLEU17minAVLB46min實(shí)施例48方法與實(shí)施例47相同，只是用NH4Br代替實(shí)施例47中NH4Cl，此時(shí)，AVLB的轉(zhuǎn)化率是59.5%，VLB產(chǎn)率為22%，LEU產(chǎn)率為12.5%實(shí)施例49方法同實(shí)施例47，只是用摩爾數(shù)3倍于Fe3+的過量(NH4)2SO4代替實(shí)施例47中NH4Cl，此時(shí)，AVLB的轉(zhuǎn)化率為75%，VLB產(chǎn)率為28%，LEU產(chǎn)率為15.5%實(shí)施例50-52方法同實(shí)施例47，只是NH4Cl的加入量與實(shí)施例47比有改變，結(jié)果見表14表14實(shí)施例 NH4Cl/Fe3+AVLB轉(zhuǎn) VLB產(chǎn)率 LEU產(chǎn)率(mol比)化率(%)(%)(%)502632617.55147131.51952881.52922.5
實(shí)施例53-55方法同實(shí)施例47，只是用其它鹽代替實(shí)施例47中NH4Cl，結(jié)果見表15.
表15實(shí)施例增加的鹽AVLB轉(zhuǎn)VLB產(chǎn)LEU產(chǎn)化率(%)率(%)率(%)53 (CH3)4NCl 69.5 30 1954 (CH3)2NH2Cl 70 30.5 2255NaCl672312.5實(shí)施例56在一個(gè)50ml反應(yīng)瓶中加10ml H2O，1.9mg脫水長春花堿，1ml FeCl3·6H2O(1.2M)水溶液，0.024ml 2N HCl，摩爾數(shù)2倍于Fe3+的過量(NH4)2C2O4。將混合物在冰冷卻下攪拌30min以上，同時(shí)通入空氣。隨后加入1ml NaBH4(0.227M)水溶液，繼續(xù)攪拌30min以上，加2ml 25%氨水堿化混合液，用10ml乙酸乙酯萃取，共3次。合并萃取液，在40℃或低于40℃下減壓蒸發(fā)至干，最終產(chǎn)物進(jìn)行高效液相色譜分析，此時(shí)，脫水長春花堿(AVLB)的轉(zhuǎn)化率是66.0%，長春花堿(VLB)的產(chǎn)率是35.5%，異長春堿(LEU)的產(chǎn)率是18%。
(分析條件)柱子YMC-填充柱A-512(CN)6×150mm
流動(dòng)相H2O∶MeOH∶Et3N∶AcOH＝1500∶1500∶4∶1.6流速1ml/min溫度45℃檢測UV(254nm)保留時(shí)間VLB19.5minLEU17minAVLB46min實(shí)施例57-59方法同實(shí)施例56，只是NH4Cl的加入量有變化，結(jié)果見表16表16實(shí)施例 NH4Cl/Fe3+AVLB轉(zhuǎn) VLB LEU(mol比)化率(%)產(chǎn)率產(chǎn)率(%)(%)57263.532.5175866933.52159877.53521實(shí)施例60-61方法同實(shí)施例56，只是用(NH4)2SO4代替實(shí)施例56中NH4Cl，結(jié)果見表17
表17實(shí)施例 (NH4)2SO4/ AVLB轉(zhuǎn) VLB產(chǎn)率 LEUFe3+(mol比) 化率(%) (%) 產(chǎn)率(%)60270.531.518613663016實(shí)施例62在一個(gè)裝有轉(zhuǎn)動(dòng)葉片的100cc反應(yīng)瓶中加入19mgAVLB，100mlH2O，0.2025gFeCl3·6H2O，0.2162g(NH4)2C2O4，0.1604g NH4Cl，0.225g甘氨酸和0.12ml 2N HCl，混合物在0℃下由渦輪葉片高速攪拌30min以上，同時(shí)通空氣，然后，在約1分鐘內(nèi)滴加2mlNaBH4(0.227M)水溶液，加10ml25%氨水堿化該溶液，再用100ml乙酸乙酯萃取，共3次。后面的步驟同實(shí)施例56，此時(shí)，AVLB的轉(zhuǎn)化率是80%，VLB產(chǎn)率是41%，LEU產(chǎn)率是18%實(shí)施例63-64方法同實(shí)施例62，只是FeCl3·6H2O的量與實(shí)施例62比有所改變((NH4)2C2O4/Fe3+，NH4Cl/Fe3+和甘氨酸/Fe3+的比率與實(shí)施例62中相同)，結(jié)果見表18
表18實(shí)施例 Fe3+/AVLB AVLB轉(zhuǎn) VLB產(chǎn) LEU產(chǎn)(mol比)化率(%)率(%)率(%)6342773919.56416863714.5實(shí)施例65.
方法同實(shí)施例56，只是不加實(shí)施例56中甘氨酸，此時(shí)，AVLB的轉(zhuǎn)化率是64%，VLB的產(chǎn)率是20%，LEU的產(chǎn)率是16%實(shí)施例66.
將19mg脫水長春花堿(AVLB)，摩爾數(shù)32倍于AVLB的過量FeCl3·6H2O;5倍于AVLB的過量2N HCl，2倍于Fe3+的過量(NH4)2C2O4，4倍于Fe3+的NH4Cl，4倍于Fe3+的過量甘氨酸溶于100cc水中，在0℃下通空氣30min。將此溶液及另一種溶液，即將12.9mg NaBH4溶于2cc水中并冷卻至0℃制得的溶液加到反應(yīng)柱中使二溶液接觸，此兩種溶液通過柱子1分鐘并進(jìn)行反應(yīng)后，再加到氨水(2ml 25%氨水用5ml水稀釋)中。
混合液用100mlAcoεt萃取，共3次。洗脫液在不超過40℃下減壓蒸發(fā)至干，產(chǎn)物的高效液相色譜表明AVLB的轉(zhuǎn)化率是67.5%，VLB產(chǎn)率是32%，LEU的產(chǎn)率是12%。
高效液相色譜分析條件如下柱子YMC-填充柱AM-312(S-5120AODS)
流動(dòng)相CH3CN∶0.01M(NH4)2CO3水溶液＝1800∶1200流速1ml/min溫度45℃檢測UV(254nm)保留時(shí)間VLB12minAVLB42.1min實(shí)施例67方法同66，只是用21.2mgAVLB硫酸鹽代替AVLB，不加2NHCl，此時(shí)，AVLB轉(zhuǎn)化率是67%，VLB產(chǎn)率是33.5%，LEU產(chǎn)率是13%實(shí)施例68-71方法同66，只是NaBH4的量有改變，結(jié)果見表19表19實(shí)施例 NaBH4AVLB轉(zhuǎn) VLB產(chǎn)率 LEU產(chǎn)率(mg/2mlH2O) 化率(%) (%) (%)6817.283.536136925.878.534147034.48636.5197143.08436.515.5實(shí)施例72-73方法同實(shí)施例67，只是用2倍量的AVLB硫酸鹽，NaBH4量有改變，結(jié)果見表20表20實(shí)施例 NaBH4AVLB轉(zhuǎn) VLB產(chǎn)率 LEU產(chǎn)率(mg/2mlH2O) 化率(%) (%) (%)7217.256.527107334.46934.515實(shí)施例74-75方法同實(shí)施例66，只是接觸時(shí)間約6秒，使用38mg AVLB，并且NaBH4用量有所改變，結(jié)果見表21表21實(shí)施例 NaBH4AVLB轉(zhuǎn) VLB產(chǎn)率 LEU產(chǎn)率(mg/2ccH2O) 化率(%) (%) (%)7425.870.528.5117534.476.53314實(shí)施例76方法同實(shí)施例66，只是用38mg AVLB，NaBH4用量是34.4mg，通入AVLB溶液中的氣體變?yōu)榧冄鯕?，此反?yīng)中，AVLB的轉(zhuǎn)化率是72.5%，VLB產(chǎn)率是27.5%，LEU產(chǎn)率是11%。
實(shí)施例77方法同實(shí)施例67，只是NaBH4的用量是34.4mg，加入等當(dāng)量于三價(jià)鐵的α，α′-雙吡啶代替NH4Cl。此時(shí)，AVLB轉(zhuǎn)化率是65%，VLB產(chǎn)率是36%，LEU產(chǎn)率是9%。
實(shí)施例78方法同實(shí)施例70，只是實(shí)施例5提到的AVLB硫酸鹽溶液中的FeCl3·6H2O，(NH4)2C2O4，NH4Cl及甘氨酸分別制成2毫升水溶液。隨后將三類溶液，即上述水溶液，AVLB硫酸鹽溶液及NaBH4溶液同時(shí)并連續(xù)地引入柱中，此時(shí)，AVLB轉(zhuǎn)化率是80%，VLB的產(chǎn)率是31%，LEU的產(chǎn)率是12%。
實(shí)施例79在一個(gè)300ml反應(yīng)瓶中加100ml H2O，19mg脫水長春花堿，摩爾數(shù)30倍于AVLB的過量FeCl3·6H2O，5摩爾過量H+(2N HCl)與AVLB等摩爾的α，α′-雙吡啶及摩爾數(shù)2倍于Fe3+的過量(NH4)2C2O4?；旌衔镌诒鋮s下攪拌30min以上，同時(shí)通入空氣，再加2ml NaBH4(0.227M)水溶液，攪拌30min。加10ml 25%氨水堿化混合物，用100ml乙酸乙酯萃取產(chǎn)物，共3次，萃取液合并，在40℃或低于40℃下減壓蒸發(fā)至干，產(chǎn)物用高效液相色譜分析，此時(shí)，脫水長春花堿(AVLB)轉(zhuǎn)化率是80%，長春花堿(VLB)的產(chǎn)率是50%(選擇性63%)，異長春堿(LEU)產(chǎn)率是13%。
(分析條件)柱子YMC-填充柱AM-312(S-5120AODS)
流動(dòng)相CH3CN∶0.01M(NH4)2CO3＝1800∶1200(V/V)流速1mi/min柱溫45℃檢測UV(254nm)保留時(shí)間VLB12.8minLEU10.8minAVLB42min實(shí)施例80方法同實(shí)施例79，只是不加實(shí)施例79中的α，α′-雙吡啶。此時(shí)，AVLB轉(zhuǎn)化率是92%，VLB產(chǎn)率是44%(選擇性48%)LEU產(chǎn)率是19%實(shí)施例81方法同實(shí)施例79，只是用4，4′-二甲基-2，2′-雙吡啶代替實(shí)施例79中的α，α′-雙吡啶。此時(shí)，AVLB轉(zhuǎn)化率是81%，VLB產(chǎn)率是45%(選擇性56%)，LEU產(chǎn)率是17%實(shí)施例82方法同實(shí)施例79，只是用吡啶代替α，α′-雙吡啶，其用量為Fe3+的2.16摩爾，此時(shí)，AVLB的轉(zhuǎn)化率是48%，VLB的產(chǎn)率是28%(選擇性58%)LEU產(chǎn)率是4%實(shí)施例83方法同實(shí)施例79，只是加入摩爾數(shù)為Fe3+的4倍的過量甘氨酸，此時(shí)，AVLB的轉(zhuǎn)化率是75%，VLB的產(chǎn)率是50%(選擇性是67%)，LEU的產(chǎn)率是14%。
權(quán)利要求
1.制備通式(Ⅱ)表示的化合物的方法，用通式(Ⅰ)
(其中R1代表氫原子，低級烷基或甲?；?，R2代表低級烷氧羰基或酰胺基，R3代表乙酰氧基或羥基，R4代表OH基，R5代表乙基或R4代表乙基，R5代表羥基)表示的化合物或其鹽作原料，其特征在于，在
(其中R1至R3的定義與通式(Ⅱ)相同)合成(Ⅱ)的過程中，在氧的存在下，加入三價(jià)鐵離子和氫化物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于再加入一種無機(jī)氨基酸。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于再加入一種無機(jī)陰離子。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于再加入一種氨基酸。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于再加入一種草酸離子和/或丙二酸離子。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于再加入一種氨基酸。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于再加入一種草酸離子和/或丙二酸離子。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于再加入一種氨基酸。
9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于再加入吡啶或一種吡啶衍生物。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的制備方法，其特征在于再加入一種氨基酸。
11.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于再加入一種由通式(Ⅲ)表示的二羧酸或其鹽。
(其中R7和R9代表氫原子或低級烷基、R6和R8代表氫原子或低級烷基，或一起形成雙鍵)
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的制備方法，其特征在于再加入一種氨基酸。
13.根據(jù)權(quán)利要求1至12任意一項(xiàng)所述的制備方法，其特征在于式(Ⅱ)的化合物是長春花堿(式中的符號如下R1＝CH3，R2＝CO2CH3，R3＝OCOCH3，R4＝C2H5，R5＝OH)
14.根據(jù)權(quán)利要求1至12任意一項(xiàng)所述的制備方法，其特征在于式(Ⅱ)化合物是異長春堿(式中符號如下R1＝CH3，R2＝CO2CH3，R3＝OCOCH3，R4＝OH，R5＝C2H5)
15.根據(jù)權(quán)利要求1至14任意一項(xiàng)所述的制備方法，其特征在于各個(gè)成分-(Ⅰ)類化合物，氫化物，氧，三價(jià)鐵包含在兩種或多種溶液中，并讓所說的兩種或多種溶液互相連續(xù)接觸。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的制備方法，其特征在于一種或多種成分可以包含在互相接觸的兩種或多種溶液中的一至二種溶液里，這些成分選自無機(jī)陰離子，吡啶衍生物，由通式(Ⅲ)表示的二羧酸或其鹽，氨基酸，以及草酸離子和(或)丙二酸離子。
全文摘要
本發(fā)明涉及從如脫水長春花堿制備象長春花堿，異長春堿作為有效抗癌藥物的二元吲哚生物堿的方法，其中在氧存在下加入三價(jià)鐵離子和氫化物，以增加目標(biāo)物的產(chǎn)率。經(jīng)反應(yīng)體系中再加入草酸離子，丙二酸離子，無機(jī)陰離子，氨基酸等能使產(chǎn)率進(jìn)一步提高。
文檔編號C07D519/04GK1047506SQ90101770
公開日1990年12月5日 申請日期1990年3月3日 優(yōu)先權(quán)日1989年3月4日
發(fā)明者坂本直哉, 丹弘明, 秦英一郎, 木原則昭 申請人:三井石油化學(xué)工業(yè)株式會(huì)社