低溫乙醇提取人血白蛋白的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種低溫乙醇提取人血白蛋白的方法，以人血漿為原料依次分離出F?Ⅰ、FⅡ+Ⅲ、FⅣ、得FⅤ沉淀，溶解FⅤ沉淀，調(diào)節(jié)溶液的蛋白質(zhì)含量至20～60g/L，pH值至4.50～4.70，乙醇濃度至體積百分比9.0～13.0%，經(jīng)3～5級過濾，將溶液超濾透析并濃縮至所需濃度后，加入辛酸鈉，使溶液中的辛酸鈉含量為0.140～0.180mmol/g蛋白質(zhì)，加入氯化鈉，使溶液的滲透壓為210～400mOsmol/kg，再調(diào)節(jié)溶液pH值至6.40～7.40，并稀釋至規(guī)定分裝濃度。本發(fā)明提高了FⅤ沉淀的提取率，大幅度提高了人血白蛋白的收率。
【專利說明】低溫乙醇提取人血白蛋白的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及以人血漿為原料制備人血白蛋白的方法，更具體的說涉及一種低溫乙醇提取人血白蛋白的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]低溫乙醇法是人血漿白蛋白的制備方法之一，該方法是1940年由美國哈佛大學(xué)醫(yī)學(xué)院的EdwinJ.Cohn教授發(fā)明的，因此又稱為“孔氏法”。孔氏法最初用來分離牛血清白蛋白，隨后應(yīng)用于人血漿分離。低溫乙醇法是以混合血漿為原料，逐級降低酸度(從PH7.0降到pH4.0)。提高乙醇濃度(從O升到40%)，同時降低溫度(從2°C降到_2°C)，各種蛋白在不同的條件下以組分(粗制品)的形式分步從溶液中析出，并通過離心或者過濾分離出來。低溫乙醇法存在的問題是白蛋白收率低、穩(wěn)定性差，故該方法需要改良以提高白蛋白的收率。
[0003]專利號為95118471.7的發(fā)明專利公開了 “改良低溫乙醇人血白蛋白生產(chǎn)工藝”，該發(fā)明用去冷沉淀血漿為原料，首先分離出組分I + II +III，再分離組分IV，組分IV上清經(jīng)深濾再分離組分V，組分V沉淀經(jīng)12%乙醇純化獲得精制白蛋白。該方法的組分分離周期略長、提取組分沉淀不夠細化，并且白蛋白生廣的收率還有待提聞。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的 目的是提供一種低溫乙醇提取人血白蛋白的方法，在用人血漿為原料制備人血白蛋白時，以提高人血白蛋白的收率。
[0005]本發(fā)明所述低溫乙醇提取人血白蛋白的方法，包括以下步驟:
[0006]步驟一、從人血漿中分離F I，得F I上清液；
[0007]步驟二、從F I上清液中分離F II + III，得F II + III上清液；
[0008]步驟三、從F II + III上清液中分離F IV，得F IV上清液；
[0009]步驟四、從F IV上清液中分離F V，得F V沉淀；
[0010]步驟五、在F V沉淀中加入注射用水，使F V沉淀完全溶解，調(diào)節(jié)溶液的蛋白質(zhì)含量至20~60g/L，pH值至4.50~4.70，乙醇濃度至體積百分比9.0~13.0%，經(jīng)3~5級過濾，將溶液超濾透析并濃縮至所需濃度后，加入辛酸鈉，使溶液中的辛酸鈉含量為0.140~0.180mmol/g蛋白質(zhì),加入氯化鈉,使溶液的滲透壓為210~400m0smol/kg,再調(diào)節(jié)溶液pH值至6.40~7.40,并稀釋至規(guī)定分裝濃度。
[0011]步驟六、將步驟五所得溶液進行巴氏滅活、經(jīng)除菌濾芯灌裝至容器后，在52~62°C溫度下加溫1.5~2.5小時。
[0012]所述步驟一是將融合后的人血漿的溫度控制在0.0~4.(TC之間，調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)濃度至40~65g/L、調(diào)節(jié)溶液電導(dǎo)率為12.5~13.7ms/cm、調(diào)節(jié)pH值至6.80~7.30，乙醇濃度至體積百分比7.0~10.0%，控制溫度至-1.0~-3.(TC，待沉淀產(chǎn)生完全后，用壓濾機進行加壓過濾，加壓過濾時選用孔徑不超過0.9 μ m的深層濾板，控制壓濾機溫度至-10C以下，過濾分離出F I沉淀，得F I上清液。
[0013]所述步驟二是，調(diào)節(jié)F I上清液pH值至5.70~6.30、乙醇濃度至體積百分比18.0~22.0%，控制溫度至-4.0~-6.(TC，待沉淀產(chǎn)生完全后，按照每16Kg蛋白質(zhì)添加0.5~1.5Kg的比例分別添加等量的珍珠巖和硅藻土，用壓濾機進行加壓過濾，加壓過濾時，選用孔徑不超過0.7 μ m的深層濾板，控制壓濾機溫度至-3°C以下，過濾分離出F II +III沉淀，得 F II +III上清。
[0014]所述步驟三是，調(diào)節(jié)F II + III上清液電導(dǎo)率為6.0~8.0ms/cm,調(diào)節(jié)pH值至
5.70~6.30，調(diào)節(jié)乙醇濃度至體積百分比38.0~42.0%，在滴加乙醇時采用每小時0.2~
0.5°C梯度降溫方式使溶液最終溫度在-4.0~-6.(TC之間，待沉淀產(chǎn)生完全后，按照每
2.5Kg蛋白質(zhì)添加0.5~1.5Kg的比例分別添加等量的珍珠巖和硅藻土，用壓濾機進行加壓過濾，加壓過濾時，選用孔徑不超過0.7 μ m的深層濾板，控制壓濾機溫度至_3°C以下，過濾分離出F IV沉淀，得F IV上清液。
[0015]所述步驟四是，調(diào)節(jié)F IV上清液pH值至4.70~4.90,乙醇濃度至體積百分比38.0~42.0%，控制溫度至-7.0~-15.(TC，待沉淀產(chǎn)生完全后，用壓濾機進行加壓過濾，加壓過濾時選用孔徑不超過0.9 μ m的深層濾板，控制壓濾機溫度至-5°c以下，過濾分離出F V沉淀，得F V沉淀。
[0016]所述調(diào)節(jié)FIV上清液pH是采用噴霧式滴加醋酸溶液的方式，用于噴射醋酸溶液的噴頭距離F IV上清 液面的高度為I~3米。
[0017]所述巴氏滅活是將溶液在58~62°C溫度下滅活10小時以上。
[0018]本發(fā)明所述低溫乙醇提取人血白蛋白的方法，從人血漿中依次分離F 1、F II +II1、F IV、F V，相對于現(xiàn)有技術(shù)，其提取組分沉淀精益細化，縮短了組分的分離周期，利于人血漿的綜合利用。通過控制壓濾機的溫度避免了制品壓濾過程升溫而導(dǎo)致蛋白變性，提高了收率。在酸性PH調(diào)節(jié)劑滴加方式上進行了改進，使制品與調(diào)節(jié)劑混合反應(yīng)更加溫和，通過改變制品電導(dǎo)率的重大調(diào)整，大大提聞了 F V沉淀的提取率，大幅度提聞了人血白蛋白的收率，人血白蛋白的收率可達到29.0g/Ι以上(表一人血白蛋白提取率對比)。
[0019]表一:人血白蛋白提取率對比
[0020]
【權(quán)利要求】
1.一種低溫乙醇提取人血白蛋白的方法，其特征在于:包括以下步驟: 步驟一、從人血漿中分離F I，得F I上清液； 步驟二、從F I上清液中分離F II + III，得F II + III上清液； 步驟三、從F II +III上清液中分離F IV，得F IV上清液； 步驟四、從F IV上清液中分離F V，得F V沉淀； 步驟五、在F V沉淀中加入注射用水，使F V沉淀完全溶解，調(diào)節(jié)溶液的蛋白質(zhì)含量至20~60g/L，pH值至4.50~4.70，乙醇濃度至體積百分比9.0~13.0%，經(jīng)3~5級過濾，將溶液超濾透析并濃縮至所需濃度后，加入辛酸鈉，使溶液中的辛酸鈉含量為0.140~0.180mmol/g蛋白質(zhì),加入氯化鈉,使溶液的滲透壓為210~400m0smol/kg,再調(diào)節(jié)溶液pH值至6.40~7.40,并稀釋至規(guī)定分裝濃度。 步驟六、將步驟五所得溶液進行巴氏滅活、經(jīng)除菌濾芯灌裝至容器后，在52~62°C溫度下加溫1.5~2.5小時。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述低溫乙醇提取人血白蛋白的方法，其特征在于:所述步驟一是將融合后的人血漿的溫度控制在0.0~4.(TC之間，調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)濃度至40~65g/L、調(diào)節(jié)溶液電導(dǎo)率為12.5~13.7ms/cm、調(diào)節(jié)pH值至6.80~7.30，乙醇濃度至體積百分比7.0~10.0%，控制溫度至-1.0~-3.(TC，待沉淀產(chǎn)生完全后，用壓濾機進行加壓過濾，加壓過濾時選用孔徑不超過0.9μ m的深層濾板，控制壓濾機溫度至-1°C以下，過濾分離出F I沉淀，得F I上清液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述低溫乙醇提取人血白蛋白的方法，其特征在于:所述步驟二是，調(diào)節(jié)F I上清液pH值至5.70~6.30、乙醇濃度至體積百分比18.0~22.0%，控制溫度至-4.0~-6.(TC，待沉淀產(chǎn)生完全后，按照每16Kg蛋白質(zhì)添加0.5-1.5Kg的比例分別添加等量的珍珠巖和硅藻土，用壓濾機進行加壓過濾，加壓過濾時，選用孔徑不超過0.7 μ m的深層濾板，控制壓濾機溫度至_3°C以下，過濾分離出F II +III沉淀，得F II +III上清。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述低溫乙醇提取人血白蛋白的方法，其特征在于:所述步驟三是，調(diào)節(jié)F II +III上清液電導(dǎo)率為6.0~8.0ms/cm，調(diào)節(jié)pH值至5.70~6.30，調(diào)節(jié)乙醇濃度至體積百分比38.0~42.0%，在滴加乙醇時采用每小時0.2~0.5°C梯度降溫方式使溶液最終溫度在-4.0~-6.(TC之間，待沉淀產(chǎn)生完全后，按照每2.5Kg蛋白質(zhì)添加0.5~1.5Kg的比例分別添加等量的珍珠巖和硅藻土，用壓濾機進行加壓過濾，加壓過濾時，選用孔徑不超過0.7 μ m的深層濾板，控制壓濾機溫度至-3V以下，過濾分離出F IV沉淀，得F IV上清液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述低溫乙醇提取人血白蛋白的方法，其特征在于:所述步驟四是，調(diào)節(jié)F IV上清液pH值至4.70~4.90，乙醇濃度至體積百分比38.0~42.0%，控制溫度至-7.0~-15.(TC，待沉淀產(chǎn)生完全后，用壓濾機進行加壓過濾，加壓過濾時選用孔徑不超過0.9 μ m的深層濾板，控制壓濾機溫度至_5°C以下`，過濾分離出F V沉淀，得F V沉淀。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述低溫乙醇提取人血白蛋白的方法，其特征在于:所述調(diào)節(jié)FIV上清液pH是采用噴霧式滴加醋酸溶液的方式,用于噴射醋酸溶液的噴頭距離F IV上清液液面的高度為I~3米。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述低溫乙醇提取人血白蛋白的方法，其特征在于:所述巴氏滅活是將溶液在58~62°C溫度下滅活10小時以上。
【文檔編號】C07K1/14GK103709245SQ201310710743
【公開日】2014年4月9日 申請日期:2013年12月20日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月20日
【發(fā)明者】安康, 張寶獻, 張其昌, 王猛, 滕世超, 郭心怡 申請人:華蘭生物工程重慶有限公司