專利名稱：一種人血白蛋白的分離方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生物制品技術(shù)中蛋白質(zhì)的分離、提純工藝方法， 特別是一種人血白蛋白的分離方法。
技術(shù)背景人血白蛋白是人體血液中含量最多的一種大分子蛋白質(zhì)，自40年 代Cohn等人創(chuàng)立低溫乙醇人血漿蛋白質(zhì)分離技術(shù)以來，血漿蛋白質(zhì)的 工業(yè)化大生產(chǎn)取得了長(zhǎng)足的進(jìn)步。目前的低溫乙醇分離法生產(chǎn)人血白蛋白，存在著蛋白成分收率偏 低、白蛋白組份中的不穩(wěn)定物質(zhì)(如脂蛋白)去除不徹底等不足。導(dǎo)致 上述缺陷的原因主要有兩個(gè)方面， 一是乙醇濃度、溫度、pH值等工藝參 數(shù)的選擇不合理，二是分離方法不科學(xué)，目前大多采用離心法，這種離 心分離法由于在高速旋轉(zhuǎn)時(shí)的升溫作用使雜蛋白被溶解而未被除去，不 能準(zhǔn)確地除去白蛋白組份中的不穩(wěn)定物質(zhì)。 發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的上述不足而提供一種人血白蛋白 的分離方法，其是在分離過程中采用壓濾法過濾，同時(shí)調(diào)控白蛋白分 離的乙醇濃度、溫度、蛋白濃度、離子強(qiáng)度、PH值等五個(gè)參數(shù)，以提 高白蛋白收率，保證白蛋白的產(chǎn)品質(zhì)量。本發(fā)明的技術(shù)方案是 一種人血白蛋白的分離方法，其是用人血漿為原料，首先將組分i、組分n+ni分別沉淀，然后將組分i+n+m 一并分離，最后將組分iv-1 、 IV-4分別沉淀， 一并分離。本發(fā)明進(jìn)一步的技術(shù)方案是固液分離采用壓濾法過濾，其進(jìn)液壓力不超過O. 2Mpa。本發(fā)明更進(jìn)一步的技術(shù)方案是壓濾機(jī)內(nèi)殘余的組分IV-1和IV-4 可用洗液清洗后再回收組分W-1和IV-4。本發(fā)明由于在分離過程中采用壓濾法過濾，同時(shí)調(diào)控白蛋白分離 的乙醇濃度、溫度、pH值等參數(shù)，克服了現(xiàn)有低溫乙醇分離法生產(chǎn)人 血白蛋白技術(shù)中存在的蛋白成分收率偏低，白蛋白組份中的不穩(wěn)定物質(zhì) (如脂蛋白)去除不徹底等不足，具有白蛋白收率高(不低于 2.9g/100ml)，產(chǎn)品質(zhì)量好等優(yōu)點(diǎn)。以下結(jié)合具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明的詳細(xì)內(nèi)容作進(jìn)一步描述。
具體實(shí)施方式
一種人血白蛋白的分離方法，其具體工藝為(1) 、先分離組分I :將血漿輸入反應(yīng)罐，計(jì)量，啟動(dòng)攪拌和循環(huán)制冷乙醇機(jī)，在血漿中緩慢加入95。/。的乙醇至乙醇體積濃度為8%，用pH4.0醋酸緩沖液調(diào) 節(jié)反應(yīng)液pH7. 1 7. 3，反應(yīng)后得組分I固液混合物；(2) 、再分離組分n+m:在組分I固液混合物中加入95%乙醇至乙醇體積濃度為20%,用pH4.0醋酸緩沖液調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH6.8 7.0，溫度_4 -6°C，反應(yīng)后得組分i+n+m固液混合物；(3)、壓濾分離出組分I+II+III:將上述組分I +11+111固液混合物在壓濾設(shè)備中進(jìn)行壓濾，進(jìn)液壓力不超過o.2Mpa，壓濾完后將沉淀吹干，得組分i+n+m固體物；(4)、進(jìn)一步分離組分IV-1: 在濾去組分I +11+111的濾液中加冷注射用水至乙醇體積濃度為 18%,用pH4. 0醋酸緩沖液調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH5. 1 5. 2，溫度-4 -6°C, 反應(yīng)后得組分IV-1固液混合物；(5) 、再進(jìn)一步分離組分IV-4:在組分IV-1固液混合物中加入95%乙醇至乙醇體積濃度為40%，用 lmol/LNaHC(V溶液調(diào)節(jié)pH5.8 6. 1，溫度-4 -6°C，反應(yīng)后得組分IV -1和IV-4固液混合物；(6) 、壓濾分離出組分IV-1和W-4:將上述組分IV-1和W-4固液混合物在壓濾設(shè)備中進(jìn)行壓濾，進(jìn)液 壓力不超過0.2Mpa，壓濾完后將沉淀吹干得組分IV-1和IV-4;壓濾機(jī) 內(nèi)殘余的組分W-1和IV-4可用洗液清洗后再回收組分IV-1和IV-4;(7) 、最后分離組分V:將壓濾分離出組分IV-l和IV-4的濾液用pH4. O醋酸緩沖液調(diào)節(jié)反 應(yīng)液pH4.7 4.9，溫度-l(TC以下，反應(yīng)后得組分V固^t混合物；(8) 、壓濾分離出組分V:將組分v固液混合物在壓濾設(shè)備中進(jìn)行壓濾，壓濾設(shè)備進(jìn)口壓力不超過0.2Mpa，壓濾完后將沉淀吹干后得組分V,于-3(TC冷庫(kù)儲(chǔ)藏備 用；(9)、超濾、滅菌、檢定合格按每g組分V沉淀量加4. 5 5. 5 ml注射用水溶解組分V，得組 分V溶解液，將組分V溶解液濃縮到蛋白濃度20.0。/c)，用注射用水調(diào)整 蛋白濃度至20. 5 21. 0%，加入保護(hù)劑辛酸鈉0.14-0.18咖ol/g,在60 匸土0.5'C條件下巴氏滅活10小時(shí)，除菌過濾得人血白蛋白，檢定合 格后分裝即可。
權(quán)利要求
1、一種人血白蛋白的分離方法，其特征是用人血漿為原料，首先將組分I、組分II+III分別沉淀，然后將組分I+II+III一并分離，最后將組分IV-1、IV-4分別沉淀，一并分離。
2、 根據(jù)權(quán)利要求i所述的分離方法，其特征是固液分離采用壓濾法過濾，其進(jìn)液壓力不超過0.2Mpa。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的分離方法，其特征是先分離組分I ，再分離組分ii+m，壓濾分離出組分i+ii+in后，進(jìn)一步分離組分iv-1，再進(jìn)一步分離組分IV-4，壓濾分離出組分IV-l和IV-4后，最后分離組分V，壓濾組分 V后再超濾，加入保護(hù)劑辛酸鈉0. 14-0. 18mmol/g，在60°C±0. 5。C條件下巴 氏滅活10小時(shí)，除菌過濾得人血白蛋白，檢定合格后分裝即可。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的分離方法，其特征是壓濾機(jī)內(nèi)殘余的組分 IV-1和IV-4可用洗液清洗后再回收組分IV-1和IV-4。
5、 根據(jù)權(quán)利要求3所述的分離方法，其特征是壓濾機(jī)內(nèi)殘余的組分IV-1 和IV-4可用洗液清洗后再回收組分IV-1和IV-4。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種生物制品技術(shù)中蛋白質(zhì)的分離、提純工藝方法，特別是一種人血白蛋白的分離方法，它包括有蛋白質(zhì)的分離、提純工藝，其特征在于用人血漿為原料，首先將組分I、組分II+III分別沉淀，然后將組分I+II+III一并分離，最后將組分IV-1、IV-4分別沉淀，一并分離，固液分離采用壓濾技術(shù)，其進(jìn)液壓力不超過0.2MPa。本發(fā)明方法由于在分離過程中采用壓濾法過濾，同時(shí)調(diào)控白蛋白分離的乙醇濃度、溫度、pH值等參數(shù)，克服了現(xiàn)有低溫乙醇分離法生產(chǎn)人血白蛋白技術(shù)中存在的蛋白成分收率偏低，白蛋白組份中的不穩(wěn)定物質(zhì)(如脂蛋白)去除不徹底等不足，與傳統(tǒng)的低溫乙醇法相比，具有白蛋白收率高(不低于2.9g/100ml)，產(chǎn)品質(zhì)量好等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)C07K14/76GK101333245SQ200710035210
公開日2008年12月31日 申請(qǐng)日期2007年6月26日 優(yōu)先權(quán)日2007年6月26日
發(fā)明者單永紅, 周柏林, 岳躍飛, 翔 張, 張秋聲, 陳治海 申請(qǐng)人:湖南紫光古漢南岳制藥有限公司